果蔬汁中毒死蜱考核樣測定的方法比對研究

王冉冉 程曉華 呂警 肖瀟

摘 要：目的：通過比較得到較理想的果蔬汁樣品前處理方法，采用此方法對能力驗證樣品進行處理，精確測定能力驗證樣品中的毒死蜱含量。方法：果蔬汁樣品經過乙腈、丙酮、二氯甲烷及乙酸乙酯等提取，顏色較深的提取液經過石墨化炭黑凈化，再用無水硫酸鎂或無水硫酸鈉進行脫水處理，以NPD、FPD與質譜3種檢測器進行檢測，外標法定量。結果：島津的NPD檢測器測定值較指定值偏低;安捷倫的FPD檢測器測定值較指定值偏高;島津GPC-GC-MS的測定值最接近指定值。以上測定結果經加標回收與質控校正后均較接近真實值，且RSD均<0.1%。結論：采用以上方法對能力驗證樣品中毒死蜱殘留進行測定，能力驗證試驗取得了滿意的結果，以上說明實驗方法有著較好的準確性和實用性，適合果汁中毒死蜱農藥殘留的檢測。

關鍵詞：果蔬汁;毒死蜱;能力驗證

我國果蔬資源日益豐富多樣[1]，果蔬汁越來越頻繁的出現在人們的日常生活中。在過去的50年里，農業發展的一個關鍵組成部分就是使用殺蟲劑來提高果蔬產量。嬰幼兒食品中用到了一定比例的果蔬。在過去的10年，毒死蜱一直排在嬰幼兒食品中超標殺蟲劑的首位。因此，建立快速、有效、安全的樣品預處理和檢測方法來檢測、鑒定和量化毒死蜱農殘成為當前研究和探索的熱點[2]。

目前，國外的研究大都集中在采用QuEChERS前處理方法結合反相高效液相色譜熒光檢測器對水果蔬菜樣品中的毒死蜱進行測定，或是使用固相萃取技術與便攜式拉曼分析儀相結合的檢測方法，以及使用納米纖維固相萃取法對水和果汁樣品進行前處理后用氣相色譜測定毒死蜱的含量[3-4]。國內對水果和蔬菜樣品中農藥多殘留的檢測方法研究較多，但對于果蔬汁中的農藥多殘留檢測方法卻研究較少[5-9]。已有的方法陳舊且耗時較長。而國家標準中關于農藥殘留的分析檢測方法也尚未細化到果蔬汁，所以目前還缺少一些安全、高效且準確的方法作為日常監測果蔬汁中農殘的參考。因此，為了有效控制毒死蜱農藥殘留安全問題，進一步提高果蔬汁的質量安全，實驗室通過對試驗條件的比對和優化，篩選得到了可快速準確測定果蔬汁中毒死蜱殘留量的分析方法，并將篩選得到的方法應用于能力驗證，取得了滿意的考核結果。為果汁中農藥殘留分析以及實驗室面臨的考核工作提供更多借鑒和參考。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

Agilent7890A氣相色譜儀（FPD檢測器，美國安捷倫科技有限公司）;島津GC-2014氣相色譜儀（NPD檢測器，島津國際貿易有限公司）;凝膠滲透色譜-氣相色譜-四級桿質譜聯用儀（島津國際貿易有限公司）;氮吹儀OA-HEAT Heating System（Organomation）;離心機Thermo Electron LED GmbH D-37520 Osterode（ThermoFisher SCIENTIFIC）;邦潔BG-08C超聲波儀（廣州邦潔電子產品有限公司）;其林貝爾VORTEX/KB3渦旋均質器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）。

1.2 試劑及標準溶液

丙酮（色譜純，霍尼韋爾（中國）有限公司）;乙腈（色譜純，西格瑪奧德里奇（上海）貿易有限公司）;無水硫酸鎂（分析純，使用前于600 ℃烘烤4 h）;氯化鈉（分析純，使用前于120 ℃烘烤4 h）;無水硫酸鈉（分析純，使用前于600 ℃烘烤4 h）;二氯甲烷（色譜純，賽默飛世爾科技（中國）有限公司）;正己烷（色譜純，韓國德山公司）;毒死蜱（GSB05-1869-2016，100 μg/mL）;丙酮。

1.3 實驗樣品

果蔬汁，能力驗證樣品，由華測檢測認證集團股份有限公司（CNAS認可的能力驗證提供者）提供。

將購買的橙子用榨汁機榨汁，過濾，離心。加入一定量的毒死蜱標準溶液，渦旋混合均勻，于冰箱中（-4 ℃）冷藏保存，測定前放至室溫，混合均勻使用。

1.4 實驗方法

1.4.1 實驗步驟

果蔬汁樣品經過乙腈、丙酮、二氯甲烷及乙酸乙酯等提取，顏色較深的提取液經過石墨化炭黑凈化，再用無水硫酸鎂或無水硫酸鈉進行脫水處理，以NPD、FPD與質譜3種檢測器進行檢測，外標法定量。

1.4.2 標準溶液的配制

將毒死蜱（GSB05-1869-2016，100 μg/mL）標準原液用色譜純丙酮稀釋成10.0 μg/mL的標準儲備液，再次用色譜純丙酮稀釋成1.00 μg/mL的標準使用液，之后用標準使用液準確配制成0.05 μg/mL、0.10 μg/mL、0.25 μg/mL、0.50 μg/mL和1.00 μg/mL的標準系列溶液，搖勻冷藏待測。

1.4.3 樣品前處理

準確稱取5 g果蔬汁樣品于塑料離心管中，加入10 mL乙腈或丙酮等有機試劑渦旋振蕩5 min后，加入3 g氯化鈉再次渦旋振蕩1 min，在室溫下靜置10 min使乙腈和水相分層或者低溫離心分層，吸取有機試劑層，用無水硫酸鈉或無水硫酸鎂進行干燥，再次低溫離心，上清液用有機系濾膜過濾后轉入進樣瓶中待測。

1.4.4 儀器條件

GC-NPD（SHIMADZU，GC-2014）：所用色譜柱為Rtx-5型（30 m×320 μm×0.25 μm）;進樣口溫度為250 ℃;檢測器溫度為255 ℃;色譜柱升溫程序：初始溫度50 ℃保持2 min，15 ℃/min升至250 ℃，保持7 min;柱流量為1.71 mL/min;氫氣流速為35 mL/min;空氣流速為55 mL/min;進樣方式為不分流;進樣量為1.0 μL。

GC-FPD（Agilent，7890A）：所用色譜柱為HP-5型（30 m×320 μm×0.25 μm）;進樣口溫度為250 ℃;檢測器溫度為200 ℃;色譜柱升溫程序：初始溫度50 ℃，保持1 min;20 ℃/min升至270 ℃，保持8 min;柱流量為2.0 mL/min;氫氣流速為75 mL/min;空氣流速為100 mL/min;尾吹流量為60 mL/min;進樣方式為分流（分流比1∶1）;進樣量為1.0 μL。

GPC-GC-MS（SHIMADZU，QP2010Ultra）：所用色譜柱為Rxi-5Sil MS（30 m×250 μm×0.25 μm），進樣口初始溫度為120 ℃，后升至250 ℃，色譜柱升溫程序：初始溫度82 ℃，保持5 min;15 ℃/min升至300 ℃，保持2 min;柱流量為1.75 mL/min;進樣方式為不分流;電離方式：電子轟擊離子源（EI）70 eV;接口溫度為280 ℃;離子源溫度為200 ℃;溶劑延遲為9.70 min;掃描方式：SIM模式;載氣：高純氦氣，純度99.999%。

2 結果與分析

2.1 前處理所用的萃取試劑對毒死蜱農藥萃取效率的影響

固定加標量為（125 ng/mL），4種不同的萃取試劑（丙酮、乙腈、二氯甲烷/丙酮、乙酸乙酯）對目標分析物萃取效率的影響見圖1。由圖1可知，4種萃取溶劑中，乙腈的萃取效果較理想。

2.2 氯化鈉加入順序對毒死蜱農藥提取效果的影響

在果蔬汁中提取農藥殘留的前處理方法中，均加入鹽（氯化鈉或硫酸鈉）進行鹽析，降低目標分析物在水相中的溶解度，以達到更好的萃取效果。由圖2可知，在目標分析物提取過程中，氯化鈉在萃取試劑之前或是之后加入，對萃取效果無明顯差異。

2.3 提取溶劑的體積對毒死蜱農藥萃取效果的影響

固定加標量為（125 ng/mL，理論值），考察4種不同的萃取試劑（丙酮、乙腈、二氯甲烷/丙酮、乙酸乙酯）的體積對目標分析物萃取效率的影響。圖3結果表明，萃取試劑體積在5.0～15.0 mL范圍內變化時，萃取試劑體積為10.0 mL時，達到較理想的萃取效果，加入兩倍體積的萃取試劑時，萃取效率并無明顯變化，為了節能減排，后續試驗選取萃取試劑體積為10.0 mL。

2.4 使用GC-FPD、GC-NPD、GPC-GC/MS 3種檢測器對能力驗證樣品的分析測定

用樣品加標回收試驗以及質控樣品試驗對測定結果進行校正，3種檢測器測定結果并無顯著性差異（使用單因素方差分析，得P>0.05），測定數據見表1。用GPC-GC/MS對能力驗證樣品進行分析測定，測定結果見圖4。

3 結論與討論

3.1 建立一種快速準確的前處理方法

搖勻后稱取5 g果蔬汁樣品，準確加入10 mL乙腈，加入3 g氯化鈉，渦旋混勻，低溫超聲提取10 min，靜置后，取上清液適量加入無水硫酸鈉干燥，離心后上機測定。

3.2 樣品適用性

采用本研究檢測方法對能力驗證樣品中毒死蜱殘留量進行檢測，能力驗證試驗取得了滿意的結果（Z=0.1），說明以上實驗方法有著較好的準確性和實用性，適合果汁中毒死蜱農藥殘留的檢測。

參考文獻

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