飼糧葉酸添加水平對初產種鵝繁殖性能、蛋品質及血清生殖激素和抗氧化指標的影響

劉晨龍 王寶維* 葛文華 凡文磊 孔 敏 張名愛 王煥森 邢 月 汪 超 王巧莉

(1.青島農業大學優質水禽研究所，國家水禽產業技術體系營養與飼料研究室，青島 266109；2.重慶市畜牧科學院，重慶 402460；3.青島普興生物科技有限公司，青島 266113)

葉酸又名喋酰谷氨酸，是參與動物生長發育的一種重要水溶性維生素。葉酸在機體營養代謝中發揮重要生理作用，為機體細胞生長和繁殖所必需的物質，幫助蛋白質的代謝，缺乏葉酸可導致機體同型半胱氨酸代謝和營養物質利用率下降[1-2]。缺乏葉酸還會導致高同型半胱氨酸血癥，進而影響血管功能，增加卒中風險。研究發現，缺乏葉酸影響機體營養代謝，從而導致機體生長緩慢，母雞缺乏葉酸會引起產蛋量和孵化率下降，且死亡率升高[3]。試驗表明，缺乏葉酸可加重大腦中動脈閉塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)和再灌注后的DNA氧化損傷，增大缺血病灶體積[4]。Abas等[5]研究發現，飼糧添加適宜水平的葉酸可提高羅曼蛋雞的產蛋量和蛋品質。El-Husseiny等[6]研究表明，飼糧添加適宜水平的葉酸可以降低血清谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶的活性，并能提高肉雞的生長性能。夏偉光等[7]研究發現，飼糧添加1.0 mg/kg 葉酸顯著提高了山麻鴨的蛋殼相對重量，且獲得較高的蛋殼厚度。飼糧中添加適宜水平的葉酸可降低育雛期仔鵝的死淘率[8]。目前，我國在種雞、種鴨葉酸需要量方面已有報道，但有關種鵝的葉酸需要量還未見報道。因此，本試驗通過研究飼糧葉酸添加水平對初產種鵝繁殖性能、蛋品質及血清生殖激素和抗氧化指標的影響，旨在確定葉酸在初產種鵝飼糧中的適宜添加水平，為完善我國種鵝營養需要量數據庫提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料和試驗設計

試驗鵝(五龍鵝)由高密市銀河潤雁鵝業有限公司提供。葉酸由青島某生物科技有限公司提供，有效成分含量為98.0%。

選擇健康、體重相近的34周齡種鵝180只，隨機分成6個組，每組6個重復，每個重復5只鵝(1公4母)。各組(Ⅰ～Ⅵ組)種鵝分別飼喂葉酸添加水平為0、0.25、0.50、0.75、1.00和1.25 mg/kg的試驗飼糧。預試期1周，飼喂基礎飼糧；正試期10周。

1.2 試驗飼糧

基礎飼糧參照NRC(1994)家禽營養需要量中推薦的種鵝飼糧營養水平設計配方，其組成及營養水平見表1。采用高效液相色譜法[9]測定基礎飼糧中葉酸含量為0.50 mg/kg。

表1 基礎飼糧組成及營養水平(風干基礎)

1.3 飼養管理

試驗種鵝采用地面飼養方式，自由采食，自由飲水。試驗前鵝舍進行充分沖洗和嚴格消毒，試驗期內每周消毒2次。每天08：00撿蛋，記錄產蛋數、蛋重、耗料量和合格蛋數。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 繁殖性能和蛋品質指標的測定

繁殖性能和蛋品質指標的測定與計算方法按照農業部推薦標準NY/T 823—2004進行。

1.4.2 血清生殖激素指標的測定

飼養試驗結束后采血，采血前斷料24 h，從6個組中每個重復隨機選擇2只種鵝，采用抗凝管翅靜脈采血，3 000 r/min離心15 min制備血清，分裝成3份，放入-40 ℃冰箱保存。血清孕酮、雌二醇、促卵泡素、催乳素含量采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗測定，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.4.3 血清抗氧化指標的測定

汽車駛出中甸壩子，來到金沙江邊。江水從豐滿的稻谷邊洶涌流過。在江岸的公路上，就可以看見日尼神山，這是奔子欄最大的神山，當地人認為日尼神山是世界神山之首，在眾神的隱秘世界里有著無上的權威，能呼風喚雨、統攝眾神、救護子民。光從地貌上看，日尼神山也有著攝人心魂的氣勢，在江岸的山群中赫然聳立著，似乎其余的高山和河流，都為了維護他的氣勢而壓低山頭、改變流向。

血清總蛋白(TP)含量采用考馬斯亮藍法測定，血清總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性采用羥胺法測定，血清丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸反應(TBA)法測定，血清谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性采用比色法測定，以上指標均用試劑盒(南京建成生物工程研究所)測定。

1.5 數據處理與統計分析

采用SPSS 22.0軟件對數據進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，差異顯著者進行Duncan氏法多重比較。數據均以平均值和均值標準誤(SEM)表示。P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著，并采用二次曲線模型擬合葉酸需要量。

2 結果與分析

2.1 飼糧葉酸添加水平對初產種鵝繁殖性能的影響

由表2可知，飼糧葉酸添加水平對初產種鵝的產蛋率、合格率、健雛率和料蛋比影響不顯著(P>0.05)，但對種鵝蛋的受精率和孵化率有顯著或極顯著影響(P<0.05或P<0.01)。Ⅴ和Ⅵ組種鵝蛋的受精率顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅵ組種鵝蛋的孵化率顯著高于Ⅰ、Ⅱ組(P<0.05)。

表2 飼糧葉酸添加水平對初產種鵝繁殖性能的影響

通過對受精率和孵化率(Y)分別與飼糧葉酸添加水平(X)進行二次曲線擬合，建立回歸方程：Y(受精率)=92.093+1.241X-0.516X2(R2=0.637，PQ<0.001)，Y(孵化率)=95.578+0.914X-0.415X2(R2=0.586，PQ=0.006)。根據回歸方程可以得出飼糧葉酸添加水平為1.22 mg/kg時受精率最高，飼糧葉酸添加水平為1.10 mg/kg時孵化率最高。Ⅳ組與Ⅴ組孵化率沒有顯著差異(P>0.05)，雖然從經濟效益來看，飼糧葉酸添加水平為0.75 mg/kg時最好；但是，從繁殖性能考慮，建議飼糧葉酸添加水平為1.00～1.25 mg/kg。

2.2 飼糧葉酸添加水平對初產種鵝蛋品質的影響

由表3可知，飼糧葉酸添加水平對初產種鵝的蛋重、蛋形指數、蛋殼厚度、蛋白高度、蛋黃顏色和蛋黃比率影響不顯著(P>0.05)，但對蛋殼強度有顯著影響(P<0.05)。Ⅴ組蛋殼強度顯著高于Ⅰ、Ⅳ、Ⅵ組(P<0.05)。

表3 飼糧葉酸添加水平對初產種鵝蛋品質的影響

通過對蛋殼強度(Y)與飼糧葉酸添加水平(X)進行二次曲線擬合，建立回歸方程：Y(蛋殼強度)=5.058+0.014X-0.007X2(R2=0.441，PQ=0.008)，根據回歸方程可以得出飼糧葉酸添加水平為1.01 mg/kg時蛋殼強度最大。以上結果表明，飼糧葉酸添加水平與蛋殼強度密切相關，且在葉酸添加水平為1.01 mg/kg時達到最大。

2.3 飼糧葉酸添加水平對初產種鵝血清生殖激素和抗氧化指標的影響

由表4可知，飼糧葉酸添加水平對初產種鵝血清雌二醇、促卵泡素和催乳素含量影響不顯著(P>0.05)，但對血清孕酮含量有極顯著影響(P<0.01)。Ⅴ組血清孕酮含量顯著或極顯著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組(P<0.05或P<0.01)。

表4 飼糧葉酸添加水平對初產種鵝生殖激素指標的影響

通過對血清孕酮含量(Y)與飼糧葉酸添加水平(X)進行二次曲線擬合，建立回歸方程：Y(血清孕酮含量)=141.565+0.235X-0.124X2(R2=0.648，PQ=0.009)，根據回歸方程可以得出飼糧葉酸添加水平為1.05 mg/kg時血清孕酮含量最高。以上結果表明，葉酸有提高初產種鵝血清孕酮含量的效果，但Ⅳ組和Ⅴ組血清孕酮含量沒有顯著差異，從經濟效益上來看，建議飼糧葉酸添加水平為0.75 mg/kg。

由表5可知，飼糧葉酸添加水平對初產種鵝血清T-SOD和GSH-Px活性無顯著影響(P>0.05)，但對血清TP和MDA含量有顯著或極顯著影響(P<0.05或P<0.01)。Ⅴ組血清TP含量顯著或極顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅵ組(P<0.05或P<0.01)，Ⅵ組血清MDA含量顯著低于Ⅰ和Ⅱ組(P<0.05)。

表5 飼糧葉酸添加水平對初產種鵝血清抗氧化指標的影響

通過對血清TP和MDA含量(Y)分別與飼糧葉酸添加水平(X)進行二次曲線擬合，建立回歸方程：Y(血清TP含量)=59.315+0.123X-0.061X2(R2=0.438，PQ=0.017)，Y(血清MDA含量)=52.172-6.564X+3.647X2(R2=0.606，PQ=0.003)，根據回歸方程可以得出飼糧葉酸添加水平為1.12 mg/kg時抗氧化性能最好。Ⅴ組和Ⅳ組血清MDA含量沒有顯著差異(P>0.05)，但從經濟效益上來看，飼糧葉酸添加水平為0.75 mg/kg時最好。以上結果表明，飼糧葉酸添加水平為1.00～1.25 mg/kg時，可顯著提高初產種鵝血清TP含量，顯著降低初產種鵝血清MDA含量。

3 討 論

3.1 飼糧葉酸添加水平對初產種鵝繁殖性能的影響

支麗慧[10]研究發現，肉仔雞孵化期不同胚齡注射葉酸極顯著影響了各組種蛋孵化率。劉安之等[11]研究表明，飼糧葉酸添加水平為1.5 mg/kg時可極顯著提高48周齡星雜579蛋雞受精率和孵化率。Roth-Maier等[12]和Ryu等[13]研究表明，飼糧葉酸添加水平為3.6 mg/kg時白萊航母雞的生產性能最好，飼糧葉酸添加水平為2.0 mg/kg時白萊航母雞的受精率達到最大值。本試驗結果表明，隨飼糧葉酸添加水平的提高初產種鵝蛋的受精率和孵化率有上升趨勢，表明飼糧添加葉酸可提高初產種鵝蛋的受精率和孵化率。飼糧葉酸添加水平對初產種鵝的產蛋率、合格率、健雛率和料蛋比的影響不顯著。由二次擬合曲線得出當飼糧葉酸添加水平分別為1.22和1.10 mg/kg時初產種鵝的受精率和孵化率最高，建議飼糧葉酸添加水平為1.00～1.25 mg/kg。這表明初產種鵝蛋的受精率和孵化率受飼糧中葉酸添加水平的影響，可能是葉酸添加水平影響了種鵝的生殖激素的分泌。本試驗結果與前人研究結果基本一致，但是葉酸添加水平存在差異，是否與鵝種品種和飼養方式有關，還有待于進一步研究證實。

3.2 飼糧葉酸添加水平對初產種鵝蛋品質的影響

Hebert等[14]研究表明，在大麥-豆粕型飼糧中添加不同水平(0、2、4、8、16、32、64、128 mg/kg)的葉酸，對蛋雞的蛋重、采食量和料蛋比均無顯著影響。Tactacan等[15]在小麥-豆粕型飼糧中分別添加10和100 mg/kg的葉酸飼喂蛋雞21 d，結果發現添加10和100 mg/kg的葉酸對蛋雞的蛋重和產蛋量均無顯著影響。本試驗結果表明，飼糧葉酸添加水平對初產種鵝蛋重、蛋形指數、蛋殼厚度、蛋白高度、蛋黃顏色和蛋黃比率影響不顯著，蛋殼強度隨葉酸添加水平的增加有增加趨勢，說明飼糧添加適宜水平葉酸可以提高初產種鵝蛋的蛋殼強度。初產種鵝蛋的蛋殼強度的增加可能是葉酸影響了初產種鵝血清孕酮含量，孕酮不僅能夠增加蛋殼厚度，而且可以增強蛋殼強度[16]。由二次擬合曲線得出，當飼糧葉酸添加水平為1.01 mg/kg時初產種鵝的蛋殼強度最大。

3.3 飼糧葉酸添加水平對初產種鵝血清生殖激素和抗氧化指標的影響

Yang等[17]研究表明，隨時間的變化各個階段血清生殖激素含量不同，血清孕酮含量在四季鵝產蛋最高期達到最高[18]。夏偉光[7]等研究發現，隨飼糧葉酸添加水平的提高，血清孕酮含量有升高趨勢，且在飼糧葉酸添加水平為2.0 mg/kg時血清孕酮含量最高。本研究表明，初產種鵝飼糧添加葉酸可以提高血清孕酮含量，初產種鵝的產蛋量與血清孕酮含量有關。研究發現，孵化期3、11胚齡注射不同水平葉酸對肉仔雞血漿白蛋白含量無顯著影響，但是顯著升高了血漿TP含量[10]。葉酸可顯著降低小鼠血清MDA含量[19]，血清TP通過限制自由基的產生從而在機體內具有一定的抗氧化力[20]。飼糧添加15 mg/kg的葉酸可以顯著提高山羊血清TP、白蛋白含量[21]。研究發現，如果機體內有大量的氧化自由基，會造成血清T-SOD活性下降，抗氧化能力下降，生成大量的MDA，造成機體的損傷[22]。因此血清MDA含量也可反映機體的抗氧化能力。GSH-Px是機體抗氧化能力指標之一[23]。本試驗中，雖然飼糧葉酸添加水平對初產種鵝血清T-SOD和GSH-Px活性無顯著影響，但血清T-SOD和GSH-Px活性有增加趨勢。這可能是飼糧葉酸添加水平降低了初產種鵝血清MDA含量，從而影響了血清T-SOD和GSH-Px活性。飼糧添加葉酸提高了初產種鵝血清TP含量，血清TP在機體內有一定的抗氧化能力；飼糧添加葉酸降低了初產種鵝血清MDA含量，從而反映出初產種鵝的抗氧化能力隨飼糧葉酸添加水平的增加而提高。根據二次擬合曲線，初產種鵝的抗氧化能力在飼糧葉酸添加水平為1.00～1.25 mg/kg時較大。這表明飼糧葉酸添加水平與初產種鵝抗氧化能力密切相關，葉酸對抗氧化能力的影響機理目前尚未明確，其有關分子調控機理有待于繼續研究。

4 結 論

飼糧添加葉酸有利于提高初產種鵝的受精率、孵化率、蛋殼強度和抗氧化能力。初產種鵝的飼糧葉酸適宜添加水平為1.00～1.25 mg/kg。