HPLC法測(cè)定呋喃甲醛中3-呋喃甲酸

萬(wàn)國(guó)盛，蘭公劍，崔甜甜，許悅，林萍，徐丹

（南京正大天晴制藥有限公司，江蘇 南京 210046）

呋喃甲醛別名糠醛，廣泛地應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、日化和石油工業(yè)等行業(yè)，以其作為原料直接或間接衍生出的化工產(chǎn)品達(dá)數(shù)千種[1]。根據(jù)質(zhì)量源于設(shè)計(jì)（QbD）理念[2]，呋喃甲醛作為醫(yī)藥原料時(shí)，應(yīng)對(duì)其中可能存在的雜質(zhì)進(jìn)行研究和控制，否則可能會(huì)對(duì)最終藥品的質(zhì)量產(chǎn)生影響，3-呋喃甲酸是呋喃甲醛中可能存在的雜質(zhì)之一，為保障后續(xù)藥品的質(zhì)量，需對(duì)其進(jìn)行研究和控制。

高效液相色譜（HPLC）法是現(xiàn)行《中國(guó)藥典》各品種項(xiàng)下有關(guān)物質(zhì)檢查最為常用的方法，高效液相色譜儀也是醫(yī)藥化工企業(yè)研發(fā)實(shí)驗(yàn)室和質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)裝備，本研究開(kāi)發(fā)了高效液相色譜法測(cè)定呋喃甲醛中3-呋喃甲酸的含量，各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)表明該方法操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確度較高，且實(shí)用性強(qiáng)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試藥

呋喃甲醛對(duì)照品（質(zhì)量分?jǐn)?shù)：97.89%，來(lái)源：安耐吉化學(xué)技術(shù)有限公司）；3-呋喃甲酸對(duì)照品（含量：100.0%，來(lái)源：上海瀚鴻科技有限公司）；呋喃甲醛（南京化學(xué)試劑有限公司）。

1.2 儀器與試劑

Agilent 1260 infinity型高效液相色譜儀（Agilent公司）；Water Arc型高效液相色譜儀（Waters公司）；MSU225P-1CE-DI型電子天平（Sartorius公司）；乙腈（色譜純，TEDIA公司）；實(shí)驗(yàn)用水為默克 Millipore超純水儀自制超純水。

1.3 色譜條件

采用YMC Pack Pro C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱，流動(dòng)相A為0.1%磷酸溶液，流動(dòng)相B為乙腈，梯度洗脫：0～15 min，流動(dòng)相A 90%～10%；15～23 min，流動(dòng)相A 50%～90%；23～32 min，流動(dòng)相A 90%），流速為1.0 mL?min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm，柱溫30 ℃。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

溶劑：50%乙腈溶液。

系統(tǒng)適用性溶液：取呋喃甲醛對(duì)照品和3-呋喃甲酸對(duì)照品各適量，加50%乙腈溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含呋喃甲醛對(duì)照品0.2 mg和3-呋喃甲酸對(duì)照品1 μg的混合溶液，搖勻。

對(duì)照品貯備液：密稱取3-呋喃甲酸對(duì)照品約20 mg，置100 mL量瓶中，加50%乙腈使溶解并稀釋至刻度，搖勻。

對(duì)照品溶液：取3-呋喃甲酸對(duì)照品適量，精密稱定，用50%乙腈溶解并稀釋制成每1 mL含1 μg的溶液，搖勻。

供試品溶液：取呋喃甲醛20 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加50%乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.2 方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1 專屬性

在建立的色譜條件下空白溶劑對(duì)檢測(cè)無(wú)干擾，系統(tǒng)適用性溶液中3-呋喃甲酸色譜峰與相鄰峰之間的分離度大于1.5，方法專屬性良好（見(jiàn)圖1）。

圖1 系統(tǒng)適用性溶液色譜圖

2.2.2 檢測(cè)限和定量限

根據(jù)人用藥品技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)理事會(huì)（ICH）指導(dǎo)原則Q2（R1）中信噪比（S/N）法分別確定本品的檢測(cè)限（LOD）和定量限（LOQ）[3]，按S/N≥3∶1確定檢測(cè)限濃度，按S/N≥10∶1確定定量限濃度。取3-呋喃甲酸對(duì)照品適量，用50%乙腈溶液逐級(jí)稀釋，在建立的色譜條件下進(jìn)樣分析，測(cè)得3-呋喃甲酸的檢測(cè)限和定量限分別為30.8 ng?mL-1和102.7 ng?mL-1，表明方法的檢測(cè)靈敏度良好。

2.2.3 線性和范圍

取上述“2.1溶液的制備”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液適量，用50%乙腈溶液依次稀釋得到3-呋喃甲酸濃度分別為0.103、0.513、0.821、1.027、1.232、1.540和2.053 μg?mL-1的系列線性溶液，在建立的色譜條件下依次進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，以濃度（C，μg·mL-1）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，線性回歸方程為y=9 460.2x-129.19，相關(guān)系數(shù)r=0.999 7，表明線性關(guān)系良好。

2.2.4 準(zhǔn)確度

本次研究中準(zhǔn)確度以回收率（%）評(píng)價(jià)，取呋喃甲醛供試品約20 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，精密加入上述“2.1溶液的制備”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液適量，用50%乙腈稀釋至刻度，分別制成相當(dāng)于50%、100%、150%質(zhì)量分?jǐn)?shù)的加樣回收率試驗(yàn)溶液，每個(gè)濃度水平平行配制3份，在建立的色譜條件下依次進(jìn)樣分析，計(jì)算加樣回收率及RSD（n=9），測(cè)的3-呋喃甲酸的平均回收率為97.0%，回收率RSD（n=9）為1.3%，表明方法的準(zhǔn)確度良好。詳細(xì)試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 3-呋喃甲酸的回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.5 重復(fù)性

取呋喃甲醛供試品約20 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，精密加入上述“2.1溶液的制備”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液0.5 mL，用50%乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻，平行配制6份，作為重復(fù)性測(cè)試溶液，在建立的色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，測(cè)定每一份溶液中3-呋喃甲酸的含量，并計(jì)算含量的RSD。結(jié)果各化合物含量的RSD（n=6）為0.79%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.2.6 中間精密度

由不同實(shí)驗(yàn)人員在不同日期，使用不同的高效液相色譜儀，照“2.2.5 重復(fù)性”項(xiàng)下的方法進(jìn)行試驗(yàn)，將測(cè)定結(jié)果與重復(fù)性項(xiàng)下測(cè)得的6份結(jié)果合并計(jì)算各化合物含量的RSD。結(jié)果各化合物含量的RSD（n=12）為1.0%，表明方法的中間精密度良好。

2.2.7 溶液的穩(wěn)定性

照“2.1溶液的制備”項(xiàng)下方法制備對(duì)照品溶液，在室溫條件下放置2、4、8、12、24和36 h進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，考察3-呋喃甲酸峰面的變化情況，并以不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)得峰面積的RSD進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果在不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)得的3-呋喃甲酸峰面積的RSD為2.3%，表明溶液在室溫條件下放置36 h穩(wěn)定性良好。

2.3 樣品測(cè)定

照“2.1溶液的制備”項(xiàng)下方法制備系統(tǒng)適用性溶液、對(duì)照品溶液和供試品溶液，采用建立的色譜方法對(duì)呋喃甲醛樣品中的3-呋喃甲酸進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，采用外標(biāo)法計(jì)算3-呋喃甲酸含量，結(jié)果3個(gè)批次樣品中均未檢出3-呋喃甲酸，本品質(zhì)量可控。

3 結(jié)果與討論

3-呋喃甲酸結(jié)構(gòu)中有呋喃環(huán)和羧基官能團(tuán)具有共軛結(jié)構(gòu)，因此可以利用其紫外吸收特征選用紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)；在方法建立過(guò)程中還對(duì)柱溫、柱流速以及流動(dòng)相A中磷酸的濃度進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示在所建立的色譜條件上，使柱溫變化±5 ℃、柱流速變化±0.1 mL?min-1、流動(dòng)相A中磷酸濃度變化±0.5%后，本方法依然可以準(zhǔn)確測(cè)定3-呋喃甲酸的含量，表明方法的耐用性較好。

4 結(jié) 論

本研究建立了高效液相色譜法測(cè)定呋喃甲醛中3-呋喃甲酸含量的分析方法，方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明，所建立的方法專屬性強(qiáng)、精密度好、準(zhǔn)確度高可以穩(wěn)定的用于呋喃甲醛中3-呋喃甲酸的測(cè)定，為呋喃甲醛的質(zhì)量控制提供了有效的支撐，也可為其他醫(yī)藥原料或藥品中的3-呋喃甲酸的測(cè)定提供參考。