益生菌干預對嬰兒腸道微生態及生長發育的影響

方曉丹，王有成，王愛珍，錢 穎

(金華市人民醫院 兒科，浙江 金華 321000)

腸道微生態為人體中最主要、最復雜的微生態系統，腸道微生態穩態的維系對嬰幼兒營養代謝、致病菌的免疫拮抗具有重要的意義[1]。腸球菌、大腸桿菌等需氧菌為出生初期嬰兒腸道的優勢菌群。隨著嬰兒的生長發育，雙歧桿菌等專性厭氧菌發酵乳糖逐漸改變腸道微生態的pH值，腸道微生物群形成相互制約并依存的平衡體系[2]。嬰幼兒期為腸道微生態形成的關鍵時期，腸道微生態受多因素影響，其中喂養方式是重要的影響因素[3]。本研究對240例新生兒進行長期跟蹤隨訪，探討益生菌干預對嬰兒腸道微生態及生長發育的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2017年1月—2019年1月金華市人民醫院兒科73例純母乳喂養足月新生兒設為母乳喂養組。另選擇同期171例人工喂養(母乳喂養不超過1周)足月新生兒，按隨機數字表分為益生菌干預組86例和單純人工喂養組85例。納入標準：健康足月兒，均為陰道分娩，產婦6個月內無抗生素應用史。排除低體重兒(出生體質量<2.5 kg)、巨大兒(出生體質量>4.0 kg)，排除有窒息、顱內出血、感染、病理性肥胖、先天性畸形、遺傳代謝性疾病的新生兒；排除有妊娠糖尿病、妊娠高血壓綜合征、吸煙、酗酒、吸毒史的產婦。隨訪過程中，母乳喂養組發生脫漏1例、益生菌干預組發生脫漏2例、單純人工喂養組發生喂養不耐受1例。各組性別、出生體質量、出生身長及胎齡差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。本研究經醫院倫理會批準，所有研究對象家屬均簽署知情同意書。

表1 各組一般資料比較

1.2 喂養方法 母乳喂養組采用純母乳喂養，單純人工喂養組采用不添加益生菌的配方奶粉(合生元)喂養，益生菌干預組采用添加益生菌的配方奶粉(合生元，雙歧桿菌出廠時不少于 1×106CFU/g)喂養，3組均于出生后第5月開始正常添加輔食。

1.3 觀察指標

1.3.1 雙歧桿菌與大腸桿菌的數量比值 分別于嬰幼兒出生第3天、第1月及第6月留取2 g糞便置于無菌容器，16S r RNA熒光定量PCR定量檢測糞便中雙歧桿菌、大腸桿菌，計算雙歧桿菌與大腸桿菌的數量比值(B/E值)。雙歧桿菌引物：上游5′-GATTCTGGCTCAGGATGAACGC-3′，下游 5′-CTGATAGGACGCGACCCCAT-3′；大腸桿菌引物：上游5 ′-CATGCCGCGTGTATGAAGAA - 3′，下游 5′-CGGGTAACGTCAATGAGCAAA-3′；擴增反應條件：95℃預變性5 min；95℃ 40 s、55℃ 20 s、68℃ 40 s，共40個循環；72℃延伸10 min。試劑購于北京天根生化有限科技公司。

1.3.2 發育指標 嬰兒肥胖指標采用《中國7歲以下兒童生長發育參照標準》[4]，BMI≥95 kg/m2為肥胖。采用《0～6歲小兒神經心理發育檢查表》[5]評價嬰兒神經心理發育水平，包括大運動、精細動作、語言、適應能力、社會行為，神經心理發育商(DQ)=智齡/實際月齡×100%，≥130為優秀，115～<130為中上，85～<115為中等，70～<85為中下，<70為低下。

1.4 統計學處理 采用統計學軟件SPSS22.0，log腸道菌群定量值為正態分布，采用log值比較，3組及3組以上組間計量資料比較單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK法，計數資料比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 雙歧桿菌與大腸桿菌及比值比較 干預前，3組糞便雙歧桿菌定量結果、大腸桿菌定量結果、B/E比值比較差異均無統計學意義(P>0.05)。干預后第3天、第1月及第6月，母乳喂養組和益生菌干預組的糞便雙歧桿菌定量結果、B/E比值均高于同期單純人工喂養組，差異均有統計學意義(P<0.05)。干預后第3天和第1月，母乳喂養組、益生菌干預組的糞便大腸桿菌定量結果均低于同期單純人工喂養組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 干預前后3組研究對象雙歧桿菌與大腸桿菌及比值比較

2.2 發育指標比較 干預后第6月，3組身長、神經發育商比較差異均有統計學意義(P<0.05)；母乳喂養組、益生菌干預組的身長、神經發育商結果均高于單純人工喂養組，母乳喂養組、益生菌干預組肥胖率均低于單純人工喂養組，差異均有統計學意義(P<0.05)；見表3。

表3 干預后第6月3組研究對象發育指標比較

3 討論

腸道微生態的穩定對病原微生物的免疫防御、營養物質的代謝均有重要意義。嬰兒腸道微生態的形成源于母體及周圍環境，早期腸道定植群主要來源于生產時產道以及母乳喂養時所接觸的菌群。隨著喂養方式以及所接觸的環境不同，嬰兒期腸道微生態的波動也較大。本研究結果顯示，母乳喂養與益生菌干預嬰兒在干預后第3天、第1月及第6月腸道微生態雙歧桿菌、大腸桿菌數量均逐漸增多，其中雙歧桿菌為優勢菌群，B/E隨生長發育逐漸降低。研究[6]表明，成人腸道微生態較為穩定，嬰幼兒腸道微生態的發育需達3歲左右才接近于成人。嬰幼兒保健一直提倡母乳喂養，一方面母乳中的免疫球蛋白可提高嬰幼兒免疫力，另一方面母乳中的雙歧因子也可促進嬰幼兒腸道雙歧桿菌的增殖，利于嬰幼兒腸道微生態的早期建立[7]。早期嬰幼兒腸道菌群99%為生理性厭氧菌，雙歧桿菌對腸道微生態的平衡較為關鍵[8]。益生菌為益于宿主健康的活微生物，對腸道微生態平衡是有益補充；同時可增強腸道黏膜的屏障作用，保護腸黏膜上皮的完整性；對嬰幼兒免疫系統的發育完善也有較好的刺激作用[9]。本研究結果顯示，母乳喂養組、益生菌干預組干預后第3天、第1月及第6月的糞便雙歧桿菌定量結果均明顯高于同期單純人工喂養組，母乳喂養組和益生菌干預組干預后第3天、第1月及第6月的糞便B/E比值結果均明顯高于同期單純人工喂養組，提示益生菌干預對嬰兒腸道微生態的建立有積極作用。

研究[10-11]表明，雙歧桿菌、乳酸桿菌為腸道有益菌種，早期益生菌的干預對嬰幼兒的生長發育有積極作用。本研究結果表明，干預后第6月，母乳喂養組、益生菌干預組嬰兒的身長、神經發育商結果均明顯高于單純人工喂養組，母乳喂養組、益生菌干預組肥胖率均明顯低于單純人工喂養組。母乳中低聚糖可促進雙歧桿菌、乳酸桿菌的腸道定植，益生菌對腸道吸收植物多糖具有促進作用，對于碳水化合物的分解以及維生素的合成均有積極的促進作用[12]。另外，腸道微生態與脂質代謝關系密切，研究[13]顯示，部分肥胖人群存在腸道微生態失衡、雙歧桿菌減少、大腸桿菌增多的現象。動物實驗[14]結果表明，高脂飲食可導致小鼠腸道菌群紊亂。目前腸道微生態失衡引起肥胖的機制未完全明確，仍需進一步深入研究。

綜上所述，腸道微生態的穩態對嬰兒的生長發育較為關鍵，相較于單純人工喂養，益生菌干預有助于嬰兒腸道微生態的建立和生長發育。