牛心樸子草總生物堿超聲提取工藝及抑菌活性研究

景炳年 王偉 劉雨晴 謝曉陽(yáng) 周雍 寧二娟 張華南 陳飛 魏磊

摘要：采用響應(yīng)面法優(yōu)化牛心樸子草總生物堿（TACKI）超聲提取工藝，并研究其抑菌活性。以TACKI得率為研究指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取乙醇濃度、料液比、提取溫度、提取時(shí)間4個(gè)因素進(jìn)行Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)和響應(yīng)面法分析，研究TACKI的最佳提取工藝條件;并分別采用倍比稀釋和生長(zhǎng)速率法研究TACKI對(duì)10 種常見(jiàn)致病細(xì)菌和9種植物病原真菌菌絲生長(zhǎng)的抑制活性。結(jié)果表明，TACKI最佳提取工藝條件為26倍量72%乙醇，53 ℃超聲提取57 min，TACKI平均得率為0.492 8%，與模型預(yù)測(cè)值（0.493 1%）一致性好。TACKI可強(qiáng)烈抑制化膿性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和銅綠假單胞菌的生長(zhǎng)，其最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）均在 12.5 mg/mL 以下;在供試質(zhì)量濃度100 mg/L時(shí)，TACKI對(duì)玉米彎孢病菌、蘋(píng)果輪紋病菌、水稻稻瘟病菌和煙草赤星病菌菌絲生長(zhǎng)均表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，抑制率均在85%以上。優(yōu)化得到的提取工藝穩(wěn)定、簡(jiǎn)單、TACKI得率高，且TACKI具有較強(qiáng)的廣譜抗菌作用。

關(guān)鍵詞：牛心樸子草;生物堿;超聲提取;抑菌作用;植物病原菌

中圖分類號(hào)：R284?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2021）15-0163-08

收稿日期：2020-11-20

基金項(xiàng)目：河南省科學(xué)院基本科研項(xiàng)目（編號(hào)：200613027）。

作者簡(jiǎn)介：景炳年（1980—），男，甘肅武威人，博士，助理研究員，主要從事天然產(chǎn)物功能活性研究及農(nóng)業(yè)綠色防控體系構(gòu)建等。E-mail：stop328@163.com。

通信作者：魏 磊，博士，助理研究員，主要從事植物化學(xué)及分子生物學(xué)。E-mail：yhweilei2@163.com。

牛心樸子草（Cynanchum komarovii Al. Iljinski），別稱老瓜頭，為蘿摩科鵝絨藤屬有毒植物，主要分布于陜西、寧夏、甘肅、青海等我國(guó)北部的荒漠草原上，資源較豐富[1]。民間和藏醫(yī)用牛心樸子草鎮(zhèn)痛、殺蟲(chóng)、退燒、止瀉、治療膽囊炎等[2-3]，現(xiàn)代研究表明，牛心樸子提取物具有殺蟲(chóng)[4～8]、抗菌[9-10]、抗植物病毒[11-13]、抗腫瘤[14]、抗氧化[15]、除草[16]、鎮(zhèn)痛抗炎[17-19]、止咳、祛痰及平喘[20]、增強(qiáng)免疫力[21]等多種生物活性，開(kāi)發(fā)潛力巨大。

牛心樸子草所含化學(xué)成分種類繁多，主要包括：C21-甾體糖苷、生物堿、萜類、黃酮醇類、多糖等[22-28]。目前，對(duì)牛心樸子草化學(xué)成分的研究主要集中在C21-甾體糖苷、生物堿。研究表明，牛心樸子草總生物堿（TACKI）與牛心樸子草廣泛而顯著的生物活性息息相關(guān)[31-52]，TACKI主要為7-脫甲氧基娃兒藤堿（7-demethoxylophorine，DEM）、（13aR，14R）-14-羥基-7-脫甲氧基娃兒藤堿、（13aR，14R）-14-羥基-7-脫甲基娃兒藤堿氮氧化物、氧化脫氧娃兒藤次堿、去羥娃兒藤寧、娃兒藤寧、N-氧化-7-脫甲氧基娃兒藤堿、娃兒藤堿、6-羥基-2，3-二甲氧基菲駢吲哚里西啶等[52]，這些生物堿結(jié)構(gòu)主要為菲駢吲哚里西啶類生物堿[53]。

TACKI在牛心樸子草中的含量較低[53]，因此TACKI提取工藝研究就成為牛樸心子草開(kāi)發(fā)利用的關(guān)鍵。萬(wàn)清玉等以正交試驗(yàn)建立了甲醇超聲提取牛心樸子草中7-脫甲氧基娃兒藤堿的最佳提取工藝[54];郭金玲等研究了不同提取劑及其操作條件對(duì)總生物堿提取率的影響[55];米海莉等考察了提取溶劑濃度和提取方法對(duì)TACKI提取量影響以及絮凝劑對(duì)總生物堿精制條件[56];李玉美等研究了大孔吸附樹(shù)脂吸附和分離TACKI的方法和條件[57];這些研究多限于對(duì)TACKI的分離精制工藝或7-脫甲氧基娃兒藤堿等特定成分的提取，對(duì)TACKI提取的研究也主要集中在提取溶劑、提取方法或單個(gè)參數(shù)的研究上，但目前尚未見(jiàn)利用響應(yīng)面法優(yōu)化TACKI提取工藝，并研究其抑菌活性的報(bào)道。本研究擬采用響應(yīng)曲面方法（response surface methodoloy，RSM）對(duì)牛心樸子草中TACKI提取工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，以確定最佳提取工藝;并對(duì)所提取的TACKI進(jìn)行常見(jiàn)致病細(xì)菌和植物病原真菌抑制活性研究，以期為該植物資源的充分、合理開(kāi)發(fā)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

牛心樸子草于2018年10月采自內(nèi)蒙古鄂爾多斯市杭錦旗，曬干粉碎后備用;大腸桿菌（Escherichia coli）ATCC 25922、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）ATCC 29213、化膿性鏈球菌（Streptococcus pyogenes）ATCC 19615、鼠傷寒沙門(mén)氏菌（Salmonella typhimurium）ATCC 13311、肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae）ATCC 49619、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）ATCC 27853、肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）ATCC 700603，7株試驗(yàn)菌株凍干菌種購(gòu)自南京便診生物科技有限公司;糞腸球菌（Enterococcus faecalis）、嗜麥芽窄食單胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）、都柏林沙門(mén)氏菌（Salmonella dublin）、煙草赤星病菌[Alter aria alternate （Fries）Keissler]、小麥赤霉病菌（Fusarium graminearum）、水稻稻瘟病菌（Pyricularia oryzae Cav.）、蘋(píng)果輪紋病菌（Physalospora piricola Nose）、白菜黑斑病菌（Alternaria raphani Groves）、玉米彎孢病菌[Curvularia lunata （Walk） Boed]、南瓜枯萎病菌（Fusarium bulbigenum）、馬鈴薯干腐病菌[Fusarium solani （Mart.）]、棉花枯萎病菌（Cotton Fusarium Wilt）12種供試菌株，由河南省科學(xué)院天然產(chǎn)物重點(diǎn)試驗(yàn)室提供;胰蛋白胨（上海寶錄生物科技有限公司）、牛肉浸膏（北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠）、微量MIC測(cè)定板（美國(guó)Corning公司）、瓊脂粉（青島海博生物）、無(wú)水乙醇、鹽酸、氯仿、無(wú)水Na2SO4（均為北京化工廠生產(chǎn)），以上試劑均為分析純。

KQ-500E型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）、YJ-VS-2型超凈工作臺(tái)（無(wú)錫一凈凈化設(shè)備有限公司）、ME-204型電子天平（美國(guó)Mettler公司）、EYELA N-1100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛(ài)郎儀器有限公司）、TU-1810型紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）、SYQ-DSX-280B型手提式壓力蒸汽滅菌鍋（上海申安醫(yī)療器械廠）、DHP-9082型電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海紅華儀器有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 牛心樸子草粗粉的制備

將曬干的牛心樸子草放入50 ℃恒溫干燥箱內(nèi)24 h，粉碎過(guò)40目篩得到牛心樸子草粗粉，備用。

1.2.2 TACKI的提取工藝[46]

精確稱取牛心樸子草10 g于100 mL錐形瓶中，加溶劑超聲輔助提取，重復(fù)3次，合并濾液濃縮，獲得乙醇浸膏。取乙醇浸膏，按質(zhì)體比1 ∶1溶解于2%鹽酸水溶液中，將不溶物濾出，再用乙酸乙酯（3倍鹽酸體積）萃取3次后，采用氨水將水相調(diào)至pH值為9～10，再用氯仿（3倍鹽酸體積）萃取，萃取至碘化鉍鉀反應(yīng)成陰性，合并萃取液再經(jīng)無(wú)水Na2SO4干燥，減壓回收溶劑后，于50 ℃的干燥至恒質(zhì)量，即得TACKI。單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn)中TACKI的提取均按照此工藝方法進(jìn)行。并按照下式計(jì)算各處理總生物堿的得率：

總生物堿得率=m0m1×100%。（1）

式中：m0為T(mén)ACKI的質(zhì)量;m1牛心樸子草粗粉的質(zhì)量。

1.2.3 單因素試驗(yàn)

1.2.3.1 不同乙醇濃度對(duì)總生物堿得率的影響

以料液比1 g ∶20 mL比例分別加入40%、50%、60%、70%、80%、90%乙醇溶液，在50 ℃下超聲提取30 min，考察乙醇濃度對(duì)TACKI得率的影響。

1.2.3.2 不同料液比對(duì)總生物堿得率的影響

分別以1 ∶10、1 ∶15、1 ∶20、1 ∶25、1 ∶30、1 ∶35（g ∶mL）料液比加入70%乙醇溶液，在50 ℃下超聲提取間30 min，考察料液比對(duì)TACKI得率的影響。

1.2.3.3 不同超聲溫度對(duì)總生物堿得率的影響

以料液比1 g ∶20 mL比例加入70%乙醇溶液，分別在20、30、40、50、60、70 ℃溫度下提取30 min，考察提取溫度對(duì)TACKI得率的影響。

1.2.3.4 不同超聲時(shí)間對(duì)總生物堿得率的影響

以料液比1 g ∶20 mL比例加入70%乙醇溶液，在50 ℃溫度下分別提取20、30、40、50、60 min，考察超聲時(shí)間對(duì)TACKI得率影響。

1.2.4 響應(yīng)面試驗(yàn)

在上述單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以總生物堿得率（Y）為響應(yīng)值，利用Design-Expert 8.0.6統(tǒng)計(jì)分析軟件，設(shè)計(jì)4因素3水平共29個(gè)點(diǎn)進(jìn)行試驗(yàn)，各因素設(shè)計(jì)水平見(jiàn)表1。

1.2.5 TACKI對(duì)細(xì)菌抑制活性測(cè)定

采用倍比稀釋法[58]測(cè)定TACKI的最小抑菌濃度（MIC）。將TACKI配制成200 mg/mL初始溶液，采用 0.22 μm濾膜過(guò)濾，為樣品原液，再將樣品原液倍比稀釋成100.00、50.00、25.00、12.50、6.25、3.13、1.56、0.78 mg/mL 8個(gè)濃度。將母液及稀釋藥液依次加入MIC板中，每孔0.1 mL;再分別加入已稀釋好的各種菌液，每孔0.1 mL，并設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照（加入 0.1 mL 菌液和0.1 mL液體培養(yǎng)基）和陰性對(duì)照（只加液體培養(yǎng)基）。將制備好的MIC板放入37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)24 h，觀察生長(zhǎng)情況，以完全沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)的TACKI最小濃度為其最小抑菌濃度（MIC）。將無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的各孔樣品分別涂布于固體培養(yǎng)基上，37 ℃繼續(xù)培養(yǎng)24 h，觀察結(jié)果，以仍不長(zhǎng)菌的最低濃度為T(mén)ACKI的MBC。

1.2.6 TACKI對(duì)植物病原真菌菌絲抑制活性測(cè)定

采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定TACKI對(duì)供試植物病原真菌菌絲生長(zhǎng)的抑制活性。將TACKI配制成初始質(zhì)量濃度為1 000 mg/L的溶液，采用0.22 μm濾膜過(guò)濾，即為樣品母液。在無(wú)菌條件下取1 mL母液于 10 mL 刻度試管內(nèi)，對(duì)照組加入1 mL無(wú)菌水，再倒入融化的PDA培養(yǎng)基定容至10 mL（即平板內(nèi)TACKI濃度為100 mg/L），搖勻后趁熱倒入培養(yǎng)皿內(nèi)。選取處于同一生長(zhǎng)勢(shì)的菌落圈，采用打孔器（直徑4 mm）制得菌餅，倒置于上述已制備好的平皿上，菌絲面朝下接入平板，每皿1個(gè)菌餅，每個(gè)處理重復(fù)3次，28 ℃恒溫倒置培養(yǎng)72 h。采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，按公式（2）和公式（3）計(jì)算抑制率。

菌落直徑（mm）=測(cè)量直徑（mm）-4.0;（2）

菌絲生長(zhǎng)抑制率=對(duì)照組菌落直徑-處理組菌落直徑對(duì)照組菌落直徑×100%。（3）

上述所有試驗(yàn)于2020年4月至10月在河南省科學(xué)院天然產(chǎn)物重點(diǎn)試驗(yàn)室完成。

1.3 數(shù)據(jù)處理

運(yùn)用Origin 7.5軟件繪制單因素試驗(yàn)數(shù)據(jù)趨勢(shì)曲線圖，采用 Design-Expert 8.0.6 軟件進(jìn)行響應(yīng)曲面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分析，所有試驗(yàn)重復(fù)3次。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)

2.1.1 不同乙醇濃度對(duì)TACKI得率的影響

由圖1可知，乙醇濃度對(duì)TACKI得率影響比較大，總生物堿得率隨乙醇濃度的升高而逐漸增加，乙醇濃度達(dá)70%后逐漸平穩(wěn)，且乙醇濃度為70%時(shí)，總生物堿得率最高，說(shuō)明TACKI在70%左右乙醇中溶解度最大，當(dāng)乙醇濃度在70%以上時(shí)，會(huì)有一些醇溶性雜質(zhì)、色素及親脂性強(qiáng)的成分溶出，影響TACKI的提取。故選取70%乙醇為生物堿最佳提取濃度。

2.1.2 不同料液比對(duì)TACKI的影響

由圖2可知，料液比對(duì)TACKI得率的影響也比較大，TACKI的提取效果隨料液比的增加而增大，且增幅較為明顯，主要是因?yàn)樵谝欢ǚ秶鷥?nèi)溶劑用量的增加，有助于生物堿的浸出。當(dāng)液料比為1 g ∶25 mL時(shí)，TACKI得率最高，繼續(xù)增大料液比時(shí)，生物堿提取量略有下降，這可能是由于TACKI的溶出在液料比1 g ∶25 mL時(shí)已達(dá)到飽和狀態(tài)，因此液比以 1 g ∶25 mL 為宜。

2.1.3 不同超聲溫度對(duì)TACKI得率的影響

由圖3可知，TACKI提取效果隨溫度呈先顯著增加后略有降低的趨勢(shì)，50 ℃時(shí)提取效果最好。這是因?yàn)闇囟壬呓档土艘后w黏度，加快了分子的運(yùn)動(dòng)速度，導(dǎo)致總生物堿類物質(zhì)快速溶出，但隨著溫度繼續(xù)升高，部分熱穩(wěn)定性小的生物堿也會(huì)隨之分解，同時(shí)也會(huì)增加雜質(zhì)的溶出，進(jìn)而影響TACKI的得率，所以選超聲溫度在50 ℃為宜。

2.1.4 不同超聲時(shí)間對(duì)TACKI得率的影響

由圖4可知，50 min時(shí)，TACKI得率達(dá)到最高，此后逐漸降低。說(shuō)明在提取約50 min時(shí)，牛心樸子草粗粉與提取溶劑充分接觸，總生物堿已充分溶出;繼續(xù)增加提取時(shí)間，可能會(huì)導(dǎo)致部分生物堿的分解和加大雜質(zhì)的溶出量，從而降低了生物堿的提取率，故生物堿的最宜提取時(shí)間為50 min。

2.2 響應(yīng)曲面法優(yōu)TACKI的提取工藝

2.2.1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

根據(jù)Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)原理，本試驗(yàn)共進(jìn)行29個(gè)點(diǎn)的響應(yīng)面試驗(yàn)，響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)和試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2.2 模型的建立及其顯著性檢驗(yàn)

采用Design-Expert 8.0.6軟件得到TACKI得率（Y）與各因素之間的二次多項(xiàng)回歸模型為：Y=0.48+0.02A+0.019B+7.408×10-3C+0.02D+0.015AB+2.5×10-4AC+8.45×10-3AD+9.525×10-3BC+0.012BD-5.9×10-3CD-0.065A2-0.061B2-0.01C2-0.018D2。

由表3可知，該回歸模型極顯著（P<0.000 1）;失擬項(xiàng)不顯著（P=0.787 1>0.05），表明該模型擬合程度良好;模型的相關(guān)系數(shù)R2=0.975 3，說(shuō)明總生物堿得率的變化有97.53%來(lái)自于所選試驗(yàn)因素，因此該模型與實(shí)際試驗(yàn)?zāi)M合度較好;校正決定系數(shù)R2Adj=0.950 6，表明生物堿得率95.06%的變異分布在方程中。

回歸方程各項(xiàng)方差表明，一次項(xiàng)A、B、D極顯著（P<0.01），C顯著（P<0.05）;二次項(xiàng)A2、B2、D2極顯著（P<0.01），C2顯著（P<0.05）;交互項(xiàng)中僅BD達(dá)到顯著水平，綜合各項(xiàng)方差分析結(jié)果可知，各具體試驗(yàn)因子對(duì)TACKI得率的影響不是簡(jiǎn)單的線性關(guān)系。試驗(yàn)因素系數(shù)的F值越大則表明該因素對(duì)響應(yīng)值的影響越大，因此影響TACKI得率由大到小的因素為D>A>B>C，即超聲時(shí)間>乙醇濃度>料液比>超聲溫度。

2.2.3 響應(yīng)面交互作用分析

由圖5可知，各響應(yīng)面圖均為開(kāi)口向下的凸形曲面，說(shuō)明響應(yīng)值均存在極大值，即在本試驗(yàn)所設(shè)計(jì)的因素水平范圍之內(nèi)可以獲得TACKI最優(yōu)提取參數(shù)。

根據(jù)回歸模型分析可知，TACKI超聲輔助提取的最優(yōu)提取工藝為：乙醇濃度72.3%、料液比 1 g ∶26.3 mL、超聲溫度 53 ℃、超聲時(shí)間 56.6 min，此條件下，TACKI得率的理論預(yù)測(cè)值為 0.493 1%。結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，將各因素進(jìn)行調(diào)整為乙醇濃度72%、料液比1 g ∶26 mL、超聲溫度 53 ℃、超聲時(shí)間57 min，在此條件下重復(fù)試驗(yàn) 3 次，實(shí)際測(cè)得的TACKI平均得率為 0.492 8%，與預(yù)測(cè)值基本吻合，表明本試驗(yàn)利用響應(yīng)曲面法優(yōu)化得到的數(shù)學(xué)模型可靠，具有良好的預(yù)測(cè)性，由該模型優(yōu)化得出的工藝參數(shù)準(zhǔn)確可靠，具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

2.3 抑菌試驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 對(duì)致病細(xì)菌抑制活性測(cè)定結(jié)果

由表4可知，TACKI對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、和化膿性鏈球菌抑制作用最強(qiáng)，最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）均在12.5 mg/mL以下。但對(duì)肺炎克雷伯氏菌、鼠傷寒沙門(mén)氏菌和都柏林沙門(mén)氏菌在供試濃度下無(wú)抑制作用。

2.3.2 對(duì)植物病原真菌菌絲抑制活性測(cè)定結(jié)果 由表5可知，在供試質(zhì)量濃度100 mg/L時(shí)，TACKI對(duì)9種農(nóng)業(yè)植物病原真菌菌絲生長(zhǎng)均有一定的抑制作用，抑制率均在62%以上，其中對(duì)玉米彎孢病菌、蘋(píng)果輪紋病菌、水稻稻瘟病菌和煙草赤星病菌菌絲生長(zhǎng)均表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，抑制率均在85%以上。

3 討論與結(jié)論

本試驗(yàn)在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面分析法確定了TACKI超聲輔助的最優(yōu)提取工藝為乙醇濃度72%、 料液比1 g ∶26 mL、 超聲溫度53 ℃、超聲時(shí)間57 min，在此優(yōu)化條件下，TACKI平均得率為0.492 8%，與模型預(yù)測(cè)值（0.493 1%）一致性良好，說(shuō)明此優(yōu)化工藝穩(wěn)定可行，可為T(mén)ACKI工業(yè)化生產(chǎn)提供指導(dǎo)。生物堿是牛心樸子草的主要活性成分，但其在牛心樸子草全株中的含量較低，因此TACKI提取分離就成為牛樸心子草開(kāi)發(fā)利用的關(guān)鍵。國(guó)內(nèi)外學(xué)者已在TACKI提取分離方面做了大量研究工作，但在TACKI得率方面的差異很大，目前文獻(xiàn)報(bào)道的TACKI最高達(dá)3.83%[52]，最低0.096%[59]，導(dǎo)致TACKI得率差異較大的原因主要在于以下幾點(diǎn)：（1）提取工藝參數(shù)（如溶劑、方法、時(shí)間、次數(shù)及提取儀器的功率等）的不同導(dǎo)致TACKI得率的差異，目前文獻(xiàn)報(bào)道的TACKI提取溶劑有不同濃度的乙醇[54]、甲醇[60]、不同pH值的工業(yè)乙醇及不同鹽酸濃度的酸水[55]，提取方法包括超聲[46]、微波[53]、熱回流、滲漉、溫浸、煎煮等[56]，其中應(yīng)用最多的溶劑為乙醇、方法為超聲波輔助提取;（2）不同的分離富集過(guò)程導(dǎo)致TACKI得率的差異，TACKI分離富集主要采用溶劑萃取[50]、大孔吸附樹(shù)脂吸附分離[57]、絮凝劑絮凝[56]等方法，每種方法中具體參數(shù)的差異也會(huì)導(dǎo)致TACKI得率的差異;（3）檢測(cè)方法的不同導(dǎo)致TACKI得率的差異，目前文獻(xiàn)報(bào)道的TACKI的檢測(cè)方法主要有重量法[46]、酸堿滴定法[56]、紫外分光光度法[55]及GC-MS分析法[59]，這些檢測(cè)方法在檢測(cè)TACKI含量方面的精密度、準(zhǔn)確度等尚未進(jìn)行研究。此外，牛心樸子草產(chǎn)地、采摘季節(jié)、提取部位及粉碎粒度也會(huì)對(duì)TACKI得率造成一定的影響。

TACKI顯示出了較強(qiáng)的廣譜抗菌作用，對(duì)多種致病細(xì)菌，如金黃色葡萄球菌、無(wú)乳鏈球菌、蠟樣芽孢桿菌、大腸桿菌等[9]，多種農(nóng)業(yè)植物病原真菌，如煙草赤星、馬鈴薯干腐、小麥根腐、玉米大斑、番茄灰霉、稻瘟病及尖孢鐮刀菌等[10，31]病原菌均具有較好的抑制作用。本研究也表明TACKI提取物具有廣譜的抑菌活性，對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和化膿性鏈球菌最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）均在12.5 mg/mL以下;在供試質(zhì)量濃度100 mg/L時(shí)，對(duì)玉米彎孢病菌、蘋(píng)果輪紋病菌、水稻稻瘟病菌和煙草赤星病菌菌絲生長(zhǎng)均表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，抑制率均在85%以上。因此，TACKI的殺菌活性值得進(jìn)一步深入研究。

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