SLE患者外周血淋巴細胞亞群、免疫球蛋白和補體變化的分析

張瑩，武麗君

(新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，新疆 烏魯木齊 830002)

0 引言

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus, SLE）是累及多系統(tǒng)和多臟器的一種典型的自身免疫性結(jié)締組織病（connective tissue disease, CTD），以育齡期女性多見，患者發(fā)病5年內(nèi)死亡率約10%[1]。SLE患者臨床表現(xiàn)多樣，早期診斷和個性化的系統(tǒng)性綜合治療，能顯著改善患者預(yù)后降低病死率。SLE明確的致病原因不明，其病理特點是患者自身免疫系統(tǒng)紊亂，尤其是T、B淋巴細胞活性紊亂，致使機體產(chǎn)生多種針對自身抗原成分的抗體[2]，自身抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后產(chǎn)生的大量免疫復(fù)合物（immune complex, IC）在組織或器官內(nèi)沉積，從而造成自身多系統(tǒng)損傷引發(fā)系統(tǒng)性疾病[3]。

本研究為探索免疫細胞及相關(guān)體液免疫失調(diào)在SLE發(fā)病機制中的作用，針對SLE活動期患者外周血中的淋巴細胞亞群（CD4+Th、CD8+Ts、CD19+B、CD16+CD56+NK、CD3+T）、免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）和補體（C3、C4）水平進行分析，以研究SLE病情活動與上述檢測項目之間的聯(lián)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

統(tǒng)計本院2019年1月至2019年12月的SLE確診的門診及住院患者共92例，均符合1997年美國風(fēng)濕病學(xué)會（ACR）推薦的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)[4]，其中SLE活動期患者46例（女39例，男7例），平均年齡（37.95±13.29）歲，SLEDAI評分平均值（8.07±3.51）分；SLE穩(wěn)定期患者47例（女43例，男4例），平均年齡（41.89±12.35）歲，SLEDAI評分平均值（1.11±1.05）分。SLE患者病史特點見表1.健康對照組為同時期于我院體檢健康人群中的20例（女16例，男4例），平均年齡（48.8±7.01）歲。

表1 SLE 患者信息及病史特點

1.2 檢測方法

淋巴細胞亞群檢測應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測淋巴亞群細胞，采用邁瑞公司生產(chǎn)的BriCyte E6流式細胞儀及原廠配套試劑。

體液免疫檢測血清免疫球蛋白和補體的檢測應(yīng)用免疫散射比濁法，采用美國貝克曼庫爾特公司開發(fā)的AU5800 特種蛋白分析儀及原廠配套試劑。

1.3 SLE患者分組方法

根據(jù)SLE疾病活動指數(shù)（SLEDAI）對患者病情活動性進行總體評估[4]，將SLEDAI評分在0-4分范圍內(nèi)的患者分為SLE穩(wěn)定組，將SLEDAI評分≧5分的患者分為SLE活動組。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均采用軟件SPSS 23.0進行統(tǒng)計學(xué)處理及分析，所有資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，兩變量間相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析。P＜0.05為有顯著差異的界限，α=0.05為檢驗水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 活動組、非活動組及健康對照組間的比較

2.1.1 淋巴細胞亞群結(jié)果的比較

SLE穩(wěn)定組和活動組中的CD3+總T細胞的百分比較健康對照組均有顯著性升高（P＜0.05）。CD4+輔助性T細胞百分比不僅在SLE穩(wěn)定組和活動組中有顯著性下降，且在SLE活動組中較在SLE穩(wěn)定組中下降更多（P＜0.05）。CD8+抑制性T細胞百分比的變化趨勢則與CD4+T細胞相反，即與健康組相比，CD8+T細胞百分比在SLE穩(wěn)定組和活動組中均顯著性升高，并且在SLE活動組中較在SLE穩(wěn)定組中升高更加顯著（P＜0.05）。CD4+/CD8+在SLE穩(wěn)定組和活動組中的比值較健康對照組均有顯著性的降低（P＜0.05）。SLE穩(wěn)定組及活動組中的CD19+B細胞和CD16+CD56+NK細胞的百分比相較于健康組均有明顯的下降（P＜0.05），見表2。

表2 SLE患者和健康人群淋巴細胞亞群檢測結(jié)果比較（±s）

表2 SLE患者和健康人群淋巴細胞亞群檢測結(jié)果比較（±s）

注：*：P＜0.05，與健康組比較； #：P＜0.05，與SLE穩(wěn)定組比較。

組別 n CD3+T（%） CD4+Th（%） CD8+Ts（%） CD4+/CD8+ CD19+B（%） NK（%）健康組 20 69.45±9.12 45.82±6.70 28.58±5.41 1.67±0.45 15.32±4.55 15.41±5.96 SLE 穩(wěn)定組 47 80.85±8.18* 40.33±9.18* 36.93±8.34* 1.16±0.47* 9.39±6.05* 7.73±5.46*SLE 活動組 46 78.88±12.37* 34.27±8.84*# 41.64±12.87*# 0.97±0.55* 10.50±9.66* 8.48±6.06*

2.1.2 體液免疫結(jié)果的比較

SLE活動組的IgA較SLE穩(wěn)定組和健康對照組有顯著性的增加（P＜0.05）。SLE穩(wěn)定組和活動組的IgM相較于健康組均顯示顯著性的降低（P＜0.05），但在SLE兩組間未顯示出統(tǒng)計學(xué)差異。IgG則在三組的比較中均未顯示出統(tǒng)計學(xué)差異。補體C3和C4在SLE穩(wěn)定組和活動組中均顯著性降低（P＜0.05），且與SLE穩(wěn)定組相比，C3和C4在SLE活動組中降低更加顯著（P＜0.05）。見表3。

表3 SLE患者和健康人群體液免疫檢測結(jié)果比較（±s）

表3 SLE患者和健康人群體液免疫檢測結(jié)果比較（±s）

注：*：P＜0.05，與健康組比較； #：P＜0.05，與SLE穩(wěn)定組比較。

組別 n IgG IgA IgM C3 C4健康組 20 11.23±2.42 2.36±1.14 1.60±0.65 1.08±0.20 0.25±0.06 SLE 穩(wěn)定組 47 11.86±3.70 2.34±1.36 0.93±0.73* 0.78±0.23* 0.17±0.08*SLE 活動組 46 12.62±4.27 2.99±1.62*# 0.86±0.65* 0.54±0.17*# 0.09±0.05*#

2.2 SLE疾病活動相關(guān)性分析

SLE患者外周血中CD4+Th百分比、補體C3和補體C4的水平均與 SLEDAI水平呈負相關(guān)關(guān)系（P＜0.05，P＜0.01），而免疫球蛋白IgA水平與SLEDAI水平呈正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。見表4。

表4 SLE患者各檢測指標(biāo)與系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動指數(shù)（SLEDAI）相關(guān)性分析

3 討論

CD4+T淋巴細胞間在體液免疫和細胞免疫中均屬于中心調(diào)控者，CD4+T淋巴細胞具有多種亞型，這些亞型能影響包括CD8+T淋巴細胞和B淋巴細胞在內(nèi)的多種免疫細胞功能，從而被認為是維持機體免疫穩(wěn)態(tài)的重要因素[5,6]。CD4+T可抑制CD8+T細胞的增殖[7]，而CD8+T淋巴細胞的活化對誘導(dǎo)SLE中CD4+T細胞的異常有重要作用[8]。還有研究發(fā)現(xiàn)，CD8+T功能障礙的活動期SLE患者會引發(fā)CD4+T細胞的活化，并且因為CD8+T的抑制性作用明顯下降，引發(fā)自身免疫耐受紊亂，從而造成針對自身抗原的免疫反應(yīng)而導(dǎo)致自身多器官、多系統(tǒng)損傷[3]。因而，研究SLE患者血清CD4+T和CD8+T淋巴細胞的功能狀態(tài)及相互作用機制對理解SLE的致病機制有重要作用。

CD4+輔助型T淋巴細胞（T-helper, Th）屬于CD4+T亞群之一，在調(diào)節(jié)自身適應(yīng)性免疫應(yīng)答反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，它可以通過釋放相關(guān)細胞因子和調(diào)節(jié)某些免疫細胞的功能而發(fā)揮效應(yīng)細胞的作用，也能輔助B淋巴細胞產(chǎn)生相應(yīng)抗體[5]。本研究發(fā)現(xiàn)，SLE活動組和穩(wěn)定組中的CD4+Th百分比較健康對照組均顯著降低，SLE活動組的CD4+Th細胞百分比較SLE穩(wěn)定組也有顯著降低，并且CD4+Th百分比與SLE疾病活動度呈負相關(guān)關(guān)系。這一結(jié)果與相關(guān)研究結(jié)果相符[8-10]。相關(guān)學(xué)者認為，CD4+Th的數(shù)目及功能缺陷在SLE的發(fā)病過程中可能有重要作用，且不同研究中CD4+T百分率在SLE患者中的變化與其使用的標(biāo)記位點不同及臨床診斷等多種因素有關(guān)[11]。

CD8+抑制型T淋巴細胞（T-suppressor, Ts）對細胞和體液免疫應(yīng)答有抑制作用，可通過其細胞毒作用（antibodydependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC）和抑制 T、B淋巴細胞活化的功能，使B淋巴細胞產(chǎn)生抗體減少[6,12]，且已有研究證實CD8+Ts細胞參與自身免疫性疾病的致病過程[13]。本研究中，SLE穩(wěn)定組和活動組的CD8+Ts百分率較健康對照組均有顯著升高，且在SLE活動組中升高更加顯著，這一結(jié)果與相關(guān)文獻認為SLE病情的活動可能與CD8+Ts抑制性功能障礙有關(guān)的研究結(jié)論相符[3,10]。有學(xué)者認為在SLE病情活動時，CD8+Ts在SLE炎性細胞因子環(huán)境的作用下，其細胞的抑制性功能下調(diào)，細胞百分比只是代償性增加[14,15]，進而導(dǎo)致T、B淋巴細胞的異常活化，使自身反應(yīng)性效應(yīng)細胞異常活化，產(chǎn)生針對自身抗原成分的抗體增加，破壞了機體免疫穩(wěn)定狀態(tài)，從而誘發(fā)或加重了SLE病情[10,13]。

CD4+/CD8+的比值能代表整個機體的免疫平衡狀態(tài)，因而CD4+/CD8+在反應(yīng)機體整體免疫狀態(tài)方面有重要意義[16]。本研究中，CD4+/CD8+比值在SLE穩(wěn)定組和活動組中均顯著降低，反應(yīng)了SLE患者機體免疫系統(tǒng)紊亂的狀態(tài)。然而有關(guān)SLE患者外周血中CD4+Th、CD8+Ts和CD4+/CD8+水平的國內(nèi)外研究存在很多矛盾性結(jié)果。在伴有感染的SLE患者中，CD4+Th百分比和CD4+/CD8+比值均顯著下降，而CD8+Ts百分比顯著升高[9]，而另有研究發(fā)現(xiàn)活動期SLE患者中這三項結(jié)果均顯著下降[17]。

CD19在B細胞分化早期至分化成熟的細胞膜上均表達，是一種強大的BCR共受體，能增強B細胞受體（B cell receptor, BCR）的信號傳導(dǎo)[18]。B細胞被抗原激活后分化為漿母細胞，產(chǎn)生大量抗體從而導(dǎo)致SLE病情進展，并且漿母細胞百分比與SLEDAI評分呈正相關(guān)[19]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)CD19+B細胞對自身免疫耐受的喪失在SLE早期發(fā)病時就已發(fā)生，這對SLE的發(fā)病有重要影響[20]。本研究中SLE穩(wěn)定組和活動組的CD4+T和CD19+B淋巴細胞百分比均有顯著下降，而B細胞活化需要CD4+T細胞的輔助[5]，同時B細胞及其分泌的細胞因子對CD4+Th細胞的活化也有重要作用[21]，因而有學(xué)者認為，B淋巴細胞的功能范圍已遠超其只作為生產(chǎn)自身抗體的效應(yīng)細胞[22]，這些研究結(jié)果提示SLE的發(fā)病與CD4+T和CD19+B的相互作用障礙及細胞免疫平衡紊亂有關(guān)。

CD16+CD56+自然殺傷細胞（natural killer cell，NK）屬于固有免疫細胞，其具有的細胞毒作用在對抗腫瘤和抗病毒感染中有重要作用[23]。有文獻報道，NK細胞對誘發(fā)自身免疫性疾病有重要作用，無論SLE患者是否處于病情活動狀態(tài)，NK細胞活性及數(shù)目均下降[24]，并且NK細胞百分比與SLE疾病活動度呈負相關(guān)關(guān)系，可作為反應(yīng)機體免疫穩(wěn)態(tài)的指標(biāo)之一[25]。本研究中，CD16+CD56+NK百分比在SLE穩(wěn)定組和活動組中均有顯著下降，但未顯示與疾病活動度有相關(guān)關(guān)系。有研究證實，SLE中NK細胞的功能障礙是由基因?qū)е碌模cT淋巴細胞的數(shù)量無關(guān)，同時還發(fā)現(xiàn)NK細胞對調(diào)節(jié)IgG水平有重要作用，而SLE患者的NK無法產(chǎn)生足夠的細胞因子來調(diào)節(jié)IgG的生成[26]，提示NK細胞與B淋巴細胞的相互作用也參與了SLE的致病過程。

SLE病情活動時，機體內(nèi)會有針對自身抗原的免疫球蛋白大量生成，形成過量的免疫復(fù)合物（ICs）而未能被吞噬細胞及時清除，未被及時清除的IC在體內(nèi)沉積，從而造成組織器官損傷，并同時激活補體系統(tǒng)而引發(fā)進一步免疫損傷，因而免疫球蛋白和補體水平的變化可以反應(yīng)SLE病情的活動狀態(tài)[27,28]。本研究中SLE活動組的C4水平較C3下降幅度更大，而有研究認為，SLE活動期時C3水平因比C4下降更明顯[27]。

本次研究未發(fā)現(xiàn)兩組SLE患者的IgG水平與健康對照組之間存在顯著差異，但SLE活動組IgA水平較健康對照組和SLE穩(wěn)定組均有顯著升高。有文獻報道SLE患者中IgG水平升高明顯[29,30]，并且發(fā)現(xiàn)SLE患者的IgG水平升高與感染狀態(tài)有關(guān)，在臨床中可作為是否使用免疫抑制劑的指標(biāo)[9]。有學(xué)者認為，SLE患者體內(nèi)B細胞功能的異常會導(dǎo)致其生成的免疫球蛋白基因異常[31]，IgG作為機體內(nèi)數(shù)量最多的免疫球蛋白，其結(jié)構(gòu)或功能的異常對SLE發(fā)病至關(guān)重要。

IgM是由B淋巴細胞分泌的，在免疫應(yīng)答過程中首先產(chǎn)生的一種抗體，以五聚體形式存在于血液中，被認為參與機體內(nèi)多種生理病理過程。IgM型抗體可通過減少炎癥性ICs的形成而對免疫穩(wěn)定有正向調(diào)節(jié)作用[32]。有文獻報道，血清IgM水平下降可能誘發(fā)自身免疫性疾病，且IgM水平降低的SLE患者發(fā)生心血管事件的風(fēng)險也可能升高[32,34,35]。本研究中，SLE穩(wěn)定組和活動組的IgM水平均顯著低于健康對照組，這一結(jié)果與有關(guān)報道符合[30,33]。

本次研究結(jié)果證實了SLE患者免疫系統(tǒng)紊亂的狀態(tài)，提示T、B淋巴細胞各亞群間的相互作用及免疫細胞功能的失調(diào)可能參與了SLE的致病過程，SLE患者血清免疫球蛋白水平并不一定都會升高。