人參黃精湯和西洋參地黃湯對腎陽虛模型動物的補腎壯陽作用和免疫調節功效

沈鴻 汪芳 孫建輝 李洪梅 霍海如 回連強 李小芹

摘要 目的：觀察人參黃精湯和西洋參地黃湯（RH和XD）對腎陽虛模型動物的補腎壯陽作用和免疫調節功效。方法：對SD大鼠60只用手術摘除大鼠雙側睪丸（去勢）的方法，建立腎陽虛動物模型。手術后3 d，隨機分為對照組、模型組、RH和XD高、低劑量組，每組10只，觀察RH和XD對去勢大鼠陰莖勃起潛伏期的影響，并比較各組動物相關的臟器系數。用小鼠肌內注射氫化可的松注射液的方法建立小鼠腎陽虛動物模型，將ICR小鼠60只，隨機分為對照組，模型組，RH和XD高、低劑量組，觀察RH和XD對腎陽虛小鼠自主活動、低溫游泳存活時間及小鼠體質量變化的影響。將ICR小鼠60只，隨機分為對照組、RH和XD高、低劑量組，連續給藥16 d，小鼠做碳廓清實驗，觀察RH和XD對小鼠網狀內皮系統（RES）吞噬廓清能力的影響，同時比較相關的臟器系數。結果：與模型組比較，RH和XD高劑量組能縮短去勢大鼠陰莖勃起時間（P<0.05）;所試劑量均能增加大鼠精液囊和前列腺的重量指數（P<0.05）;高劑量組可提高腎陽虛小鼠耐寒、抗疲勞的能力（P<0.05）。RH和XD對碳廓清小鼠的臟器系數有提升作用（P<0.05），吞噬指數表明有作用，但差異無統計學意義。結論：RH和XD具有明顯的補腎壯陽作用，及增強機體免疫力的功效。

關鍵詞 腎陽虛;補腎壯陽;免疫調節;功效;潛伏期;人參黃精湯;西洋參地黃湯

Kidney-tonifying and Yang-strengthening effects and Immune Regulation Effects

of Renshen Huangjing Decoction and Xiyangshen Dihuang Decoction

SHEN Hong， WANG Fang， SUN Jianhui， LI Hongmei， HUO Hairu， HUI Lianqiang， LI Xiaoqin

（Institute of Chinese Materia Medica， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China）

Abstract Objective：To observe the effect of Renshen Huangjing Decoction and Xiyangsen Decoction on strengthening yang and immunomodulatory effect of yang deficiency model animals. Methods：A total of 60 SD rats were surgical removal of bilateral testicles （castration） in rats. Animal model of kidney yang deficiency was established. Three days after surgery， the rats were randomly divided into a control group， a model group， a RH and XD decoction high-dose and low-dose groups， with 10 animals in each group. The effect of RH and XD decoction on penile erection latency in castrated rats were observed. Meanwhile， the organ coefficients of each group were compared. A total of 60 ICR mice were randomly divided into a control group， a model group， a RH and XD decoction high-dose and low-dose groups. Effects of RH and XD on spontaneous activity of kidney-yang deficiency， low temperature swimming on survival time and the change of body weight of mice were observed. The 60 ICR mice were randomly divided into a control group， a RH and XD high dose group and low dose group， and the drug was administered continuously for 16 days. Carbon clearance experiment was carried out in mice， to observe the effect of RH and XD decoction on the phagocytic clearance ability of reticulum endothelial system （RES） in mice， while the relevant organ coefficients were compared. Results：Compare with the model group， the high dose group of RH and XD Decoction can obviously shorten the erectile time of castrated rats penis （P<0.05）， the weight coefficient of seminal vesicle and prostate were significantly increased by the quantity of reagent （P<0.05）. The high-dose group can obviously improve the cold-tolerance and fatigue resistance ability of kidney-yang deficiency mice （P<0.05）. RH and XD can significantly increase the viscera coefficient of carbon clearance mice （P<0.05）. It has some effect on phagocytic index， but there was no statistical significance. Conclusion：RH and XD have obvious effect of tonifying kidney and strengthening yang and improving immunity

Keywords The kidney Yang deficiency; Tonifying kidney and strengthening yang; Immunomodulation; Efficacy; Incubation/latent period; Ginseng Polygonatum soup; American Ginseng Radix Rehmanniae Decoction

中圖分類號：R289.5文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.15.016

腎陽是機體生命活動的原動力，為生命之根本，腎陽虛證是中醫的基本證之一。現代醫學研究認為，腎陽與神經、內分泌、免疫等系統關系密切，是多系統和器官功能的綜合表現[1]，腎陽虛證與下丘腦-垂體-腎上腺皮質軸功能紊亂有關，還涉及性腺軸、甲狀腺軸[2-3]。臨床癥狀表現有面色咣白，畏寒肢冷，精神不振，腰膝酸痛，性欲減退、遺精尿頻，小便清長，女子帶下清稀、宮寒不孕等。人參黃精湯（RH）和西洋參地黃湯（XD）是根據臨床上不同人群的體質需求，在中醫理論及臨床驗方基礎上研制而成，主要由人參、黃精、益智仁和西洋參、熟地黃、覆盆子等中藥及新食品原料組成的復方制劑，功效為補腎陽，調腎陰，具有抗寒、抗疲勞、補腎、壯陽等作用。為進一步研究RH和XD的功效及作用，從補腎壯陽、耐寒、抗疲勞、免疫等方面進行實驗研究，并探討其可能的作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 ICR小鼠，體質量22～25 g，雌雄兼有;SD大鼠，90～110 g，雄性，均由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證號分別為SYXK（京）2013-0035和SCXK（京）2016-0011。動物飼養在屏障的實驗室常規環境，實驗動物使用許可證：SYXK（京）2008-0023。倫理審批號：2019B028。

1.1.2 藥物 受試樣品RH和XD由中國中醫科學院廣安門醫院臨床藥物實驗室提供，批號：20170607、20170608。

1.1.3 試劑與儀器 氫化可的松注射液（天津金耀藥業有限公司，批號：1512231），印度墨汁（北京索萊寶科技有限公司，批號：317NO21），碳酸鈉（北京化學試劑公司，批號：20041013），戊巴比妥鈉（Merck公司，批號：330C032）。多功能小鼠自主活動儀（濟南益延科技發展有限公司，型號：YLS—1A）;電子天平[賽多利斯科學儀器（北京）有限公司產品賽多利斯，型號：Sartorius BSA 224S-CW、Sartorius BSA 3202S-CW]，多功能酶標儀（美國熱電公司，美國，型號：JS-THERMO Varioskan Flash），梅特勒-托利多儀器[梅特勒-托利多（上海）有限公司，型號：PL203]，電子針療儀（蘇州醫療用品廠有限公司，型號：SDZ-Ⅱ型）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備

1.2.1.1 腎陽虛大鼠 選取60只SD大鼠，用3%戊巴比妥鈉溶液（1 mL/kg體質量）腹腔注射麻醉，手術摘除大鼠雙側睪丸（去勢），建立腎陽虛動物模型[4]。去勢手術后3 d，隨機分為對照組、模型組、人參黃精湯（RH）和西洋參地黃湯（XD）高、低各2個劑量組，每組10只大鼠。

1.2.1.2 腎陽虛小鼠 選取ICR小鼠60只，隨機分為對照組、模型組、RH或XD高、低各2個劑量組，每組10只小鼠。于給藥第7天開始，除對照組外，其余各組均同時肌內注射氫化可的松注射液（25 mL/kg），共計3 d[4-5]。

1.2.1.3 小鼠吞噬廓清能力 選取ICR小鼠60只，隨機分為對照組、RH或XD高、低各2個劑量組，每組12只小鼠，然后給予受試物前16～18 h禁食不禁水，然后給予受試物1 h，各組動物尾靜脈注射稀釋4倍的印度墨汁（10 mL/kg），立即計時[6]。

1.2.2 給藥方法 給藥劑量按“根據實驗動物與人按體表面積等效量換算比率”計算，對照組和模型組均給予等體積蒸餾水。RH和XD大鼠給藥劑量分別為8.0、4.0 g生藥/kg，小鼠給藥劑量分別為16.0、8.0 g生藥/kg，灌胃給藥，于分組當天開始給藥，1次/d。每只去勢大鼠給藥量為1 mL/次，連續20 d。每只小鼠給藥量為0.5 mL/次，腎陽虛的小鼠連續給藥10 d。廓清實驗的小鼠連續給藥16 d。

1.2.3 檢測指標與方法

1.2.3.1 去勢大鼠陰莖勃起潛伏期及大鼠臟器指數的測定 去勢大鼠于末次藥后1 h，用電子針療儀的刺激電極放置于大鼠陰莖部位，給予局部電刺激，電流為4 mA。記錄自刺激開始至陰莖勃起時間（潛伏期）。大鼠稱重后處死，摘取精液囊、前列腺和包皮腺稱重，計算各臟器系數。

1.2.3.2 腎陽虛小鼠體質量、自主活動次數、游泳存活時間的測定 腎陽虛小鼠在第10天末次給藥后1 h，記錄各組動物體質量、自主活動（10 min內）次數及低溫（18 ℃）游泳存活時間。

1.2.3.3 小鼠吞噬廓清能力的測定 小鼠尾靜脈注射印度墨汁，注射后2 min、12 min，各鼠眼底靜脈叢取血20 μL，立即加入預先加有2 mL 0.1%Na2CO3的試管中，充分混勻，用酶標儀600 mm處，測定光密度（OD）值，計算單位時間內血液中炭粒消除速度（K值）。處死動物，解剖，稱取肝、脾、胸腺重量，計算臟器系數及廓清吞噬系數（α）。

K值=（logOD1-logOD2）/（t2-t1），噬系數α=體質量/（肝重+脾重）×3k

臟器系數=臟器重/體質量×100%

1.3 統計學方法 采用SPSS20.0統計軟件進行數據統計，計量資料用均數±標準差（±s）表示，比較采用單因素方差法進行處理，組間兩兩比較，方差齊時用LSD分析，方差不齊時用Dunnetts方法分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對去勢大鼠陰莖勃起潛伏期及大鼠臟器指數的比較 RH和XD所試劑量組，能夠縮短去勢大鼠陰莖勃起時間，其中高劑量組作用顯著，抑制率分別為35%和43%;能明顯增加去勢大鼠精液囊和前列腺重量系數，與模型組比較，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1、2。

2.2 對腎陽虛小鼠體質量、自主活動次數、游泳存活時間的比較 RH和XD所試劑量能夠增加腎陽虛小鼠的自主活動次數、延長低溫游泳時間，與模型組比較，高劑量組作用顯著，差異有統計學意義（P<0.05）;具有延緩氫化可的松所致腎陽虛小鼠體質量下降趨勢的作用，但差異無統計學意義。見表3、4。

2.3 對小鼠吞噬廓清能力的比較 RH和XD高劑量組可明顯增加小鼠的肝系數、脾系數、胸腺系數，與對照組比較，差異有統計學意義（P<0.05）;對小鼠血液中碳粒消除速度K值差異有統計學意義（P<0.05），對吞噬系數α有升高的趨勢，但差異無統計學意義。見表5、6。

3 討論

中醫的腎在生物體五臟中占主要地位，區別于西醫的腎。中醫認為，腎為臟腑之本，十二經之根，先天之本在于腎。古書《難經》記載，腎在“男子以藏精，女子以系胞”，認為“腎”上通于腦，下連沖任二脈，系胞宮。表明“腎”對機體生殖功能的調節是通過腦-沖任-胞宮這個軸線進行的，和現代醫學中的下丘腦-垂體-靶腺軸（HPAT）概念相吻合[3]。現代研究證明，下丘腦細胞損害與功能紊亂是腎陽虛證的主要病理基礎，從而導致HPAT不同程度的功能紊亂，表現為激素水平的失調，性功能減退，以及機體的免疫功能、代謝機制分別出現功能性或病理性的改變[7]。王文健[8]檢測了臨床上10例腎陽虛患者的血清，并做了黃體素釋放激素（LRH）興奮試驗。結果發現腎陽虛患者的血清中的雌二醇、促黃體生成激素、人絨毛膜促性腺激素水平明顯升高，LRH興奮試驗有反應延遲的現象，推斷其發病環節與下丘腦功能減退和多環節功能受損有關。RH和XD根據中醫理論——陰陽氣血的轉化原理，通過氣血雙補，陰陽雙調實現補腎壯陽的作用。大鼠去勢手術后，造成動物腎陽虛模型，陰莖勃起能力減弱，經RH和XD治療后，去勢大鼠陰莖勃起時間能明顯縮短，提高了去勢大鼠陰莖對外部刺激的興奮性，并能明顯增加生殖器官精液囊和前列腺重量系數。說明RH和XD有促進性器官生長的作用，有較好的補腎壯陽功效。肌內注射氫化可的松所致動物腎陽虛模型，是一種經典的腎陽虛證動物模型[9]，它是利用外源性糖皮質激素抑制垂體前葉的促腎上腺皮質激素（ACTH）的釋放，使腎上腺皮質分泌類固醇激素減少[10]。其模型在病理方面和腎陽虛的研究理論上，在很大程度上表現一致，小鼠表現出的癥狀與腎陽虛證患者的臨床癥狀相吻合[11]。氫化可的松肌內注射小鼠所致的小鼠腎陽虛證，出現體質量減輕、活動能力減弱，耐寒耐疲勞能力下降等癥狀，經服用RH和XD后，小鼠的各項腎陽虛癥狀得到緩解，甚至基本消失，表現在可增加腎陽虛小鼠自主活動次數、延長低溫游泳存活時間及增加小鼠的耐受力等方面。說明RH和XD具有補腎陽，調腎陰的功效，能夠增強動物機體生理功能、提高其對外界不良刺激的耐受力，作用機制可能與調節HPAT的功能有關，通過調節HPAT功能，起到糾正模型小鼠腎陽虛體征的作用。此外，人參、西洋參、熟地黃的抗疲勞作用，也得到現代研究的證實，主要是增加運動后機體糖原及三磷酸腺苷（ATP）的水平，促進能量物質合成存儲，抑制乳酸及尿素氮的生成，為機體提供能量物質，從而使機體的抗疲勞能力得到提高[12-15]，人參、西洋參分別是2個湯劑的主要成分，為其抗疲勞作用的研究提供了實驗基礎和依據。腎陽虛證與免疫功能也存在著密切關系，現代研究表明，腎陽虛證患者的細胞及體液免疫，以及補體免疫能力，都表現出整體下降的趨勢[16]，出現的標志為機體各種生理功能均處于低下水平[17]。沈自尹[18]認為腎陽虛與現代醫學的神經內分泌免疫系統（NEIS）有關，主要的發病環節在于下丘腦（或更高級）調節功能的不同程度紊亂，這一理論獲得其他學者的證實[19]。鐘歷勇等[20]觀察了補腎、健脾、活血3類復方中藥對腎陽虛大鼠下丘腦促腎上腺皮質激素釋放因子（CRF）、mRNA表達的影響實驗，結果發現，只有補腎中藥能夠提高腎陽虛大鼠下丘腦CRF mRNA的表達，能對HPAT軸起作用，認為補腎類中藥的調節作用著重于神經內分泌系統，對免疫系統也有一定影響，從藥物驗證的角度說明腎陽虛證的主要調節點定位在下丘腦的理論。小鼠的廓清實驗屬于非特異性細胞免疫研究，當異物墨汁微小顆粒進入小鼠體內血循環時，可迅速被體內巨噬細胞所吞噬，主要部位在肝脾，而肝、脾、胸腺是機體中樞和外周的重要免疫器官，對機體的免疫功能具有重要的調節作用，通過測定小鼠血中異物的消除速度，來反映網狀內皮系統的吞噬功能，了解機體對抗外界異物入侵機體的免疫能力[6]。小鼠服用RH和XD后，可明顯影響小鼠的肝、脾、胸腺系數，對小鼠廓清吞噬系數有升高的趨勢，說明RH和XD具有免疫調節作用，作用機制可能與調節神經內分泌免疫系統（NEIS）有關。

綜上所述，有關腎陽虛證的機制研究是一個復雜的過程。中醫藥在腎陽虛的防治上有著獨特的效果[21-23]，受到了世人的廣泛關注。但隨著科學研究的不斷深入，醫學界將會對腎陽虛證研究有更深入而全面的新認識，本研究提示RH和XD對腎陽虛證動物具有治療作用和免疫調節功效，為臨床的應用提供依據和參考。

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（2019-12-07收稿 責任編輯：楊覺雄）

基金項目：國家自然基金青年基金項目（81303242）;北京市科學技術委員會資助項目“十病十藥”項目（Z161100001816017）

作者簡介：沈鴻（1963.02—），女，本科，副研究員，研究方向：中藥藥理及新藥研發，E-mail：hshen@icmm.ac.cn