基于高效液相色譜和紅外光譜的生三七及其炮制品的鑒別

李雨昕 邢娜 張志宏 于天穎 馬恩耀 王雪 白浩東 曾元寧 王秋紅

中圖分類號 R284 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2021）18-2194-09

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.18.04

摘 要 目的：鑒別生三七及其炮制品。方法：采用高效液相色譜法（HPLC）建立指紋圖譜。以人參皂苷Rb1為參照，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012版）》繪制15批生三七及其炮制品的HPLC指紋圖譜并進行相似度評價，通過與對照品對比確定共有峰。采用SPSS 21.0、SIMCA 14.1軟件進行聚類分析、主成分分析、正交偏最小二乘法分析，以變量重要性投影（VIP）值大于1為標準，篩選造成生三七及其炮制品質量差異的標志性成分。采用OMNIC 8.2.0軟件建立生三七及其炮制品的紅外（IR）指紋圖譜并進行相似度評價，采用雙指標序列分析法對15批生三七及其炮制品的IR指紋圖譜吸收峰進行分析。結果：15批生三七有16個共有峰，相似度為0.911～1.000;炮制品有25個共有峰，相似度為0.862～1.000;二者共有12個相同的共有峰，并指認其中3個共有峰，分別為三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1。聚類分析結果顯示，當距離為10時，15批生三七可聚為兩類，SW1～SW5聚為一類，SH1～SH5、SQ1～SQ5聚為一類;15批炮制品ZW1～ZW5、ZH1～ZH5、ZQ1～ZQ5聚為一類。當距離為5時，15批生三七可聚為3類，SW1～SW5聚為一類，SH2～SH5、SQ2聚為一類，SQ1、SQ3～SQ5、SH1聚為一類;15批炮制品可聚為兩類，ZW1～ZW5聚為一類，ZH1～ZH5、ZQ1～ZQ5聚為一類。主成分分析結果顯示，前兩個主成分的累計方差貢獻率為80.104%。正交偏最小二乘法分析結果顯示，5個峰的VIP值大于1，分別為峰H、峰G、峰J、峰F（人參皂苷Rg1）、峰I。15批生三七及其炮制品IR指紋圖譜的相似度分別為0.889 7～1.000 0、0.972 8～1.000 0;共有峰率均為80%～100%，變異峰率分別為0～17.65%、0～18.75%。經吸收峰波數(shù)對比發(fā)現(xiàn)，生三七在3 440、1 450 cm-1處，炮制品在1 530、575 cm-1處存在差異。結論：所建HPLC指紋圖譜和IR指紋圖譜的相似度均較好，能有效區(qū)分生三七及其炮制品。不同產地生三七及其炮制品的共有峰率高、變異率低，二者化學成分不同;峰H、峰G、峰J、人參皂苷Rg1、峰I為引起生三七及其炮制品質量差異的標志性成分。

關鍵詞 三七;炮制品;高效液相色譜法;紅外光譜;不同產地

Identification of Panax notoginseng and Its Processed Products Based on HPLC and IR Spectrum

LI Yuxin1，XING Na1，ZHANG Zhihong2，YU Tianying3，MA Enyao3，WANG Xue1，BAI Haodong1，ZENG Yuanning2，WANG Qiuhong1，2（1. School of Pharmacy， Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine/Key Laboratory of Foundation and Application Research of Northern Traditional Chinese Medicine， Ministry of Education/Heilongjiang Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine and Natural Medicine Pharmacodynamic Material Bases， Harbin 150040， China; 2. School of Traditional Chinese Medicine， Guangdong Pharmaceutical University， Guangzhou 510006， China; 3. Guangzhou Caizhilin Pharmaceutical Co. Ltd.， Guangzhou 510145， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To identify Panax notoginseng and its processed products. METHODS： The fingerprint was established by HPLC. Using ginsenoside Rb1 as reference， HPLC fingerprints of 15 batches of P. notoginseng and its processed products were drawn and the similarity evaluation was conducted by using the Similarity Evaluation System for TCM Chromatographic Fingerprints （2012 edition）. The common peaks were confirmed by comparing with substance control. SPSS 21.0 and SIMCA 14.1 software were used to perform cluster analysis， principal component analysis and orthogonal partial least squares-discriminant analysis; taking the variable importance projection （VIP） value greater than 1 as the standard， the differential marker components causing the quality difference between P. notoginseng and its processed products were screened. IR fingerprints? of P. notoginseng and its processed products were established by OMNIC 8.2.0 software， and the spectral similarity was evaluated; double index? sequence analysis was used to analyze absorption peaks of IR fingerprints of 15 batches of P. notoginseng and its processed products. RESULTS： There were 16 common peaks in the fingerprints of 15 batches of P. notoginseng， and the similarities were 0.911-1.000; there were 25 common peaks in the fingerprints of processed products， and the similarities were 0.862-1.000. They had 12 identical common peaks， and three of them were identified as sanchinoside R1， ginsenoside Rg1 and ginsenoside Rb1. Results of cluster analysis showed that when the distance was 10， 15 batches of P. notoginseng could be clustered into two categories， SW1-SW5 into one category， SH1-SH5 and SQ1-SQ5 into one category， ZW1-ZW5， ZH1-ZH5 and ZQ1-ZQ5 of 15 batches of processed products could be clustered into one category. When the distance was 5， 15 batches of P. notoginseng could be clustered into three categories， SW1-SW5 into one category， SH2-SH5 and SQ2 into one category， SQ1， SQ3-SQ5 and SH1 into one category. Fifteen batches of processed products could be clustered into two categories， ZW1-ZW5 into one category， ZH1-ZH5 and ZQ1-ZQ5 into one category. The results of principal component analysis showed that the cumulative variance contribution rate of the first two principal components was 80.104%. The results of orthogonal partial least squares-discriminant analysis showed that the VIP values of the five peaks were greater than 1， which were peak H， peak G， peak J， peak F （ginsenoside Rg1） and peak I. The similarity of IR fingerprints of 15 batches of P. notoginseng and its processed products were 0.889 7-1.000 0 and 0.972 8-1.000 0; the common peak rates were 80%-100%， and the variation peak rates were 0-17.65% and 0-18.75%， respectively. By comparing the wave numbers of absorption peaks， it was found that there were differences between P. notoginseng at 3 440 and 1 450 cm-1 and processed products at 1 530 and 575 cm-1. CONCLUSIONS： Established HPLC fingerprint and IR fingerprint have good similarity， and could effectively distinguish P. notoginseng and its processed products. P. notoginseng and its processed products from different habitats have high common peak rate and low variation rate， and their chemical components are different; peak H， peak G， peak J， ginsenoside Rg1 and peak I are differential marker components causing the quality difference between P. notoginseng and processed products.

KEYWORDS? ?Panax notoginseng; Processed products; HPLC; IR spectrum; Different habitats

三七為五加科植物三七Panax notoginseng（Burk.）F. H. Chen的干燥根和根莖，主產于我國云南、廣西等地，具有散瘀止血、消腫定痛的功效，常用于治療咯血、吐血、衄血、便血、崩漏、外傷出血、胸腹刺痛、跌撲腫痛等癥[1]。三七作為傳統(tǒng)名貴中藥，在中成藥處方中使用頻繁，亦是一種大眾青睞的保健食品[2]。三七有生品和熟品之分，生三七收錄于2020年版《中國藥典》（一部）[1];三七炮制方法有焙、炒、蒸、油炸、砂燙、發(fā)酵及微波等 [3-4]，其中蒸法和油炸法可見于個別地區(qū)炮制規(guī)范中，如蒸三七已被四川、安徽、廣西等地的炮制規(guī)范收錄[5]。

有研究表明，生三七功效偏于散瘀止血、消腫定痛;熟三七功效偏于補益，且其益氣補血活血作用優(yōu)于生三七[6-8]。除功效差異外，兩者的化學成分也有不同：生三七經炮制后，所含的皂苷類成分發(fā)生脫水或去糖，可產生新的皂苷類成分;氨基酸類、黃酮類成分受熱含量減少，多糖類成分含量則與炮制參數(shù)相關[3]。目前，有關生、熟三七的研究多為藥理作用差異分析，多從三七“生打熟補”特點入手，驗證熟三七的補血補益作用[6，8-9]，或以皂苷類成分為指標優(yōu)選最優(yōu)炮制工藝[10-11]，而對熟三七的質量評價較少。現(xiàn)行2020年版《中國藥典》（一部）僅對生三七藥材的性狀、顯微鑒別、薄層鑒別以及水分、總灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物、指標成分（三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1）含量測定等進行規(guī)范，但未對其炮制品作出規(guī)定[1]。雖然，有部分省份的炮制規(guī)范對熟三七的炮制方法進行了描述，但未見具體的參數(shù)要求[12]，加之熟三七使用的日益增多，因此有必要對熟三七的質量進行評價。

高效液相色譜（HPLC）作為物質特有性分析的一種方法，能夠對藥材成分進行定性、定量分析，借助化學信息反映中藥質量[13]。與采用成分含量多少來評價藥材質量的方法相比，中藥指紋圖譜技術結合聚類分析、主成分分析、正交偏最小二乘法分析等化學模式識別能更加客觀地反映藥材質量[14]。紅外（IR）光譜又稱分子指紋光譜，能夠提供較為豐富的分子結構特征性信息[15]。近年來，IR光譜在中藥材鑒別領域發(fā)揮了重要作用，可用于鑒別藥材真?zhèn)巍a地及不同藥用部位，有助于保障中藥使用的安全性[16]。雙指標分析法提高了樣品信息的獨立性、特征性;變異率與共有峰率作為兩個相互獨立的鑒別指標表示樣品兩兩比較的相似性和差異性，可構成二維指標空間，較單指標的鑒別方法，具有更強的鑒別能力，可利用藥材本身所含有的信息進行鑒別，并可通過建立多維且獨立的鑒別指標空間而將藥材共性與差異進行量化[17]。基于此，本研究建立了不同產地生、熟三七的HPLC指紋圖譜及IR指紋圖譜，同時結合化學模式識別進行分析，旨在為生、熟三七的辨別和產地的區(qū)分提供參考，亦為探討三七作用機理及炮制機制奠定基礎。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用儀器主要有Waters e2695型HPLC儀[沃特世科技（上海）有限公司]，UV-1800型紫外-可見分光光度計、FTIR-8400S型IR光譜儀（日本Shimadzu公司），SB25-12DTD型超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司），N-1300型旋轉蒸發(fā)儀（日本EYELA公司），GZX-9140MBE型電熱恒溫鼓風干燥箱、HH-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋（上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠），GZX-9140MBE型電子天平[梅特勒-托利多國際貿易（上海）有限公司]，Milli-Q Advantage A10型超純水臺式純水系統(tǒng)（德國Millipore公司）等。

1.2 藥品與試劑

人參皂苷Rb1對照品（批號RFS-R01211810029，純度98.58%）、人參皂苷Rg1對照品（批號RFS-R01511812013，純度99.16%）、三七皂苷R1對照品（批號RFS-S0021181-

1027，純度98.52%）均購自成都瑞芬思生物科技有限公司;溴化鉀（KBr，光譜純，批號C11570025）購自上海麥克林生化科技有限公司;甲醇（美國Thermo Fisher Scientific公司）為質譜純，乙腈[賽默飛世爾科技（中國）有限公司]為色譜純，水為超純水。

15批生三七藥材為廣州采芝林藥業(yè)有限公司提供的凈制藥材，分別產自云南曲靖、文山、紅河等3個地區(qū)（每產地各5批），經廣東藥科大學中藥資源系劉基柱教授鑒定均為五加科植物三七P. notoginseng（Burk.）F. H. Chen的干燥根和根莖。取三七藥材，按其質量的40%加水浸潤24 h至無白心;蒸鍋加熱至有蒸汽冒出，放入已潤制的生三七藥材，蒸制3 h后取出，趁熱將其切成厚約2～3 mm的薄片，于50 ℃烘干，即得15批炮制品（依次編號ZQ1～ZQ5、ZW1～ZW5、ZH1～ZH5），具體來源信息見表1。

2 方法與結果

2.1 HPLC指紋圖譜的建立

2.1.1 色譜條件 以Sunfire C18（250 mm×4.6 mm，5.0 μm）為色譜柱，以乙腈（A）-水（B）為流動相進行梯度洗脫（0～5 min，10%A;5～25 min，10%A→46%A;25～30 min，46%A→100%A;30～50 min，100%A）;流速為1 mL/min;檢測波長為203 nm;柱溫為25 ℃;進樣量為10 μL。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1對照品各5 mg，分別置于5 mL量瓶中，加入甲醇溶解并定容，混勻，制成質量濃度均為1 mg/mL的單一對照品溶液，經0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液即得，備用。

2.1.3 供試品溶液的制備 精密稱取生三七或其炮制品粉末（過四號篩）3.75 g，置于25 mL量瓶中，加入70%甲醇25 mL，渦旋后超聲（功率600 W，頻率40 kHz）提取30 min，于25 ℃下以13 000 r/min離心10 min，取上清液，經0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得，備用。

2.1.4 精密度試驗 取“2.1.3”項下供試品溶液（編號ZH1），按“2.1.1”項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次，以人參皂苷Rb1為參照，計算各共有峰的相對保留時間和相對峰面積。結果顯示，12個相同共有峰相對保留時間的RSD為0.04%～0.81%（n=6），相對峰面積的RSD為0.78%～2.59%（n=6），表明方法精密度良好。

2.1.5 重復性試驗 取同一炮制品樣品（編號ZH1），共6份，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項下色譜條件進樣測定，以人參皂苷Rb1為參照，計算各共有峰的相對保留時間和相對峰面積。結果顯示，12個相同共有峰相對保留時間的RSD為0.02%～0.42%（n=6），相對峰面積的RSD為1.48%～2.48%（n=6），表明方法重復性良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗 取“2.1.3”項下供試品溶液（編號ZH1），分別于室溫下放置0、2、4、8、12、16、18、24 h時按“2.1.1”項下色譜條件進樣測定，以人參皂苷Rb1為參照，計算各共有峰的相對保留時間和相對峰面積。結果顯示，12個相同共有峰相對保留時間的RSD為0.03%～0.48%（n=8），相對峰面積的RSD為0.92%～2.56%（n=8），表明上述溶液于室溫下放置24 h內穩(wěn)定性良好。

2.1.7 HPLC指紋圖譜的建立 取15批生三七及其炮制品，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項下色譜條件進樣測定，將所得色譜圖導入《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012版）》，隨機選擇以SW3為生三七的參照、ZW3為炮制品的參照，采用中位數(shù)法生成對照圖譜，設定時間窗寬度為0.1，經多點校正，得到15批生三七及其炮制品的疊加指紋圖譜和對照圖譜。結果顯示，15批生三七有16個共有峰，15批炮制品有25個共有峰;經對比，生三七與炮制品中共有12個共有峰相同，即生三七圖譜中的1、2、3、4、5、6、7、8、10、12、13、16號峰（共有峰依次編號為峰A～峰L）分別與炮制品圖譜中的1、2、4、5、7、10、11、12、22、23、24、25號峰（共有峰依次編號為峰A～峰L）對應，詳見圖1、圖2。

2.1.8 HPLC指紋圖譜的相似度評價 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012版）》對15批生三七及其炮制品進行相似度評價。結果顯示，15批生三七及其炮制品與對應對照指紋圖譜的相似度分別為0.911～1.000，0.862～1.000，表明不同產地生三七及其炮制品中含有的化學成分種類相似，藥材質量穩(wěn)定，詳見表2。

2.1.9 共有峰的指認 因人參皂苷Rb1峰形較好、含量較高，且為2020年版《中國藥典》（一部）三七藥材含量測定的指標成分，故以人參皂苷Rb1為參照峰。通過與對照品HPLC圖（取“2.1.2”項下各單一對照品溶液適量，按“2.1.1”項下色譜條件進樣測定，得到圖3）對比，指認生三七指紋圖譜中的3、4、6號峰和炮制品指紋圖譜中的4、5、10號峰分別均為三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1。

2.2 聚類分析

以生三七及其炮制品中12個相同共有峰的峰面積為變量，采用瓦爾德法以平方歐氏距離為區(qū)間[18]，使用SPSS 21.0軟件進行聚類分析，結果見圖4。由圖4可知，當距離為10時，15批生三七可聚為兩類，SW1～SW5聚為一類，SH1～SH5、SQ1～SQ5聚為一類;15批炮制品ZW1～ZW5、ZH1～ZH5、ZQ1～ZQ5聚為一類。當距離為5時，15批生三七可聚為3類，SW1～SW5聚為一類，SH2～SH5、SQ2聚為一類，SQ1、SQ3～SQ5、SH1聚為一類;15批炮制品可聚為兩類，ZW1～ZW5聚為一類，ZH1～ZH5、ZQ1～ZQ5聚為一類。

2.3 主成分分析

采用SIMCA 14.1軟件，以生三七及其炮制品中12個相同共有峰的峰面積為變量進行主成分分析[19]，結果見圖5。由圖5可知，生三七SW1～SW5位于圖的左側，SH2～SH5、SQ2位于圖的右下方，SQ1、SQ3～SQ5、SH1位于圖的左下側;炮制品ZW1～ZW5位于圖的正上方，ZH1～ZH5、ZQ1～Q5位于圖的右側，與聚類分析結果基本一致。

以主成分特征值和貢獻率為依據(jù)，采用SPSS 21.0軟件進行主成分因子分析，結果見表3。由表3可知，前兩個主成分的累計方差貢獻率為80.104%，表明前兩個主成分能夠客觀地反映樣品的質量。

根據(jù)表3中特征值，采用SPSS 21.0軟件繪制主成分分析碎石圖，結果見圖6。由圖6可知，前兩個成分較陡，后面十個成分較平緩，表示前兩個成分足以代表原來變量。在特征向量中，變量前對應系數(shù)即為該變量主成分載荷。主成分載荷的絕對值越大，表示主成分的變量代表性越大[20]。通過SPSS 21.0軟件得到兩個主成分F1、F2對應的特征向量分別為F1=0.116 4×峰A+0.292 9×? 峰B+0.293 3×峰C+0.341 4×峰D+0.298 8×峰E+0.336 2×峰F+0.336 2×峰G+0.301 1×峰H+0.342 5×峰I+0.277 6×峰J+0.248 1×峰K+0.189 2×峰L;F2=-0.057 8×峰A+0.257 3×峰B+0.266 3×峰C+0.201 5×峰D-0.155 9×峰E-0.238 7×峰F-0.231 0×峰G-0.329 2×峰H-0.089 2×峰I-0.321 5×峰J+0.441 5×峰K+0.519 2×峰L。主成分1、2對多個載荷較大的變量（峰B～峰L）具有代表性[20]，表明生三七及其炮制品質量差異為多種成分共同作用的結果，并初步推斷峰B～峰L所對應的11種成分（三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1及8種未知成分）為影響生三七及其炮制品質量的成分。

2.4 正交偏最小二乘法分析

以生三七及其炮制品中12個相同共有峰的峰面積為變量，采用SIMCA 14.1軟件進行正交偏最小二乘法分析，結果見圖7、圖8（圖8中代表變量的點距離原點越遠，表示變量對模型的影響權重越大[21]）。由圖7、圖8可知，模型累積解釋能力參數(shù)R 2X（cum）為0.845，R 2Y（cum）為0.972，模型預測度Q 2（cum）為0.943，均大于0.8，表示擬合的預測模型穩(wěn)定、可靠[22]。生三七位于圖的左側，炮制品位于右側，二者能夠明顯分開。

當變量重要性投影（VIP）值大于1，表示變量對于整體的貢獻較大[23]。采用SIMCA 14.1軟件中“VIP predictive”插件得到VIP值，選取VIP值大于1的化合物，共得到貢獻相對較大的5個峰，分別為峰H、峰G、峰J、峰F（人參皂苷Rg1）、峰I，詳見圖9。

2.5 IR指紋圖譜的建立

2.5.1 供試品的制備及測定 將15批生三七及其炮制品于60 ℃下烘干，粉碎，過九號篩，取粉末2 mg，置于瑪瑙研缽中，加入KBr粉末200 mg，充分研磨后壓制成薄片，即為供試樣品片。同法制備KBr空白片，置于IR光譜儀中進行背景掃描，再放置生三七及其炮制品供試樣品片進行掃描。

2.5.2 精密度試驗 取炮制品樣品粉末（編號ZH1），按“2.5.1”項下方法制備供試樣品片并連續(xù)測定5次，將所測得的圖譜導入OMNIC 8.2.0軟件進行相似度評價。結果顯示，IR圖譜的相似度為0.995 6～0.998 6（n=5），表明儀器精密度良好。

2.5.3 穩(wěn)定性試驗 取炮制品樣品粉末（編號ZH1），按“2.5.1”項下方法制備供試樣品片，分別于室溫下放置0、10、20、30、40、50 min時按“2.5.1”項下方法測定，將所測得的圖譜導入OMNIC 8.2.0軟件進行相似度評價。結果顯示，IR圖譜的相似度為0.988 4～0.998 7（n=6），表明樣品在室溫下放置50 min內穩(wěn)定性良好。

2.5.4 重復性試驗 取炮制品樣品粉末（編號ZH1），共6份，按“2.5.1”項下方法制備供試樣品片并測定，將所測得的圖譜導入OMNIC 8.2.0軟件進行相似度評價。結果顯示，IR圖譜的相似度為0.992 8～0.999 5（n=6），表明方法重復性良好。

2.5.5 IR指紋圖譜的相似度評價 采用OMNIC 8.2.0軟件對15批生三七及其炮制品的IR圖譜進行基線矯正、平滑，建立指紋圖譜，生三七以SW3為參照，得相似度分別為0.978 8、0.991 9、0.987 0、0.970 6、0.973 6、0.937 8、0.997 2、1.000 0、0.990 6、0.995 4、0.907 0、0.889 7、0.954 0、0.936 8、0.966 8;炮制品以ZW3參照，得相似度分別為0.972 8、0.988 5、0.994 5、0.992 9、0.974 7、0.994 3、0.998 1、1.000 0、0.993 7、0.991 2、0.990 0、0.984 0、0.986 6、0.988 8、0.983 9。IR指紋圖譜見圖10。

2.5.6 雙指標序列分析 本研究分別對15批生三七及其炮制品的IR指紋圖譜進行雙指標序列分析。共有峰率（P）=（Ng/Nd）×100%;指紋圖譜a的變異峰率（Pva）=（Na/Ng）×100%;指紋圖譜b的變異峰率（Pvb）=（Nb/Ng）×100%[24];Nd=Ng+Na+Nb。式中，Nd表示兩個IR指紋圖譜中的獨立峰總數(shù)，獨立峰指IR指紋圖譜中不同的吸收峰;Ng表示兩個IR指紋圖譜中都出現(xiàn)的吸收峰的個數(shù)，Na表示指紋圖譜a中相對于其共有峰的非共有峰數(shù)（稱為a的變異峰數(shù)），Nb表示指紋圖譜b中相對于其共有峰的非共有峰數(shù)（稱為b的變異峰數(shù)）;Pv指在該IR指紋圖譜中變異峰數(shù)與其共有峰數(shù)的比值[25]。具體結果見表4。

以SQ2 ∶ SH2（90.00，5.56，5.56）為例，其序列數(shù)據(jù)表示以SQ2為參照，SQ2與SH2之間的共有峰率為90%，SQ2與SH2的變異峰率均為5.56%，表明SQ2與SH2之間共有峰率大、變異率小。由表4可知，15批生三七及其炮制品經兩兩比對均有105組結果，生三七共有峰率為80%～100%，相似度較高;其中69組共有峰率大于90%，27組共有峰率為85%～90%，9組共有峰率小于85%。炮制品共有峰率為80%～100%，相似度較高;其中71組共有峰率大于90%，34組共有峰率為85%～90%。這表明生三七及其炮制品的IR指紋圖譜相似度較高、變異率低。

2.5.7 IR指紋圖譜數(shù)據(jù)分析 由生三七及其炮制品的IR指紋圖譜可以看出，不同產地生三七及其炮制品各自的相似度較高。生三七在3 440、3 300、2 930、2 310、? ? ?2 150、1 660、1 450、1 425、1 370、1 245、1 155、1 020、855、760、700、530 cm-1處有16個共有峰;炮制品在? 3 350、2 928、2 360、2 150、1 650、1 530、1 425、1 375、1 245、1 155、1 025、855、760、700、575、525 cm-1處有16個共有峰（具體波數(shù)數(shù)據(jù)表略）。生三七與炮制品的共有峰波數(shù)相似，僅個別峰不同，生三七體現(xiàn)在3 440、? ? ?1 450 cm-1處，炮制品體現(xiàn)在1 530、575 cm-1處。此外，生三七在3 000～3 700 cm-1處有多個中等強度的尖峰，而炮制品在此區(qū)間為一大寬峰，且炮制品的圖譜更具統(tǒng)一性，較為規(guī)整。筆者推測，生三七經蒸制后，所含化學成分發(fā)生轉化，結構不穩(wěn)定的成分發(fā)生降解，官能團種類減少[26]。

3 討論

本研究參考相關文獻[27]和2020年版《中國藥典》（一部）[1]，建立了生三七及其炮制品的HPLC指紋圖譜。通過HPLC指紋圖譜及相似度評價發(fā)現(xiàn)，15批生三七相似度為0.911～1.000，共16個共有峰;15批炮制品相似度為0.862～1.000，共25個共有峰。經對比，生三七與炮制品中共有12個共有峰相同;經與對照品對比，共指認了其中3個共有峰，分別為三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1。此外，炮制品色譜圖中的色譜峰較生三七明顯增多，表明生三七經炮制后產生了新的成分。但本研究并未對炮制后的新增成分進行確定，后續(xù)有待采用液質聯(lián)用等技術進一步辨別。

聚類分析結果顯示，當距離為10時，15批生三七可聚為兩類，SW1～SW5聚為一類，SH1～SH5、SQ1～SQ5聚為一類;15批炮制品ZW1～ZW5、ZH1～ZH5、ZQ1～ZQ5聚為一類。當距離為5時，15批生三七可聚為三類，SW1～SW5聚為一類，SH2～SH5、SQ2聚為一類，SQ1、SQ3～SQ5、SH1聚為一類;15批炮制品可聚為兩類，ZW1～ZW5聚為一類，ZH1～ZH5、ZQ1～ZQ5聚為一類。這提示云南紅河及曲靖產生三七有交叉現(xiàn)象，對于此現(xiàn)象，筆者通過查閱云南省地圖發(fā)現(xiàn)，曲靖、文山、紅河三地呈“品”字型分布，兩兩接壤，由此推測可能由于紅河與曲靖的地理環(huán)境相近，使得三七質量較為相似，亦或是藥材采購過程中，個別批次收集出現(xiàn)差錯。

主成分分析結果顯示，前兩個主成分能代表共有峰80.104%的信息，主成分分析圖與聚類分析結果一致。正交偏最小二乘法分析結果顯示，峰H、峰G、峰J、峰F（人參皂苷Rg1）、峰I的VIP值均大于1。雖然，本研究未指認出除對照品外的其余未知成分，但指紋圖譜結合化學模式識別可區(qū)分不同產地生三七及其炮制品，并初步推斷三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和其他8種未知成分為影響生三七及其炮制品質量的成分[18]，后續(xù)可結合含量測定及未知成分指認等實驗對其進行鑒定;篩選出峰H、峰G、峰J、人參皂苷Rg1、峰I為引起其質量差異的標志性成分，表明生三七及其炮制品所含成分的含量特征差異較大[28]。

IR光譜在定性鑒別研究中具有獨特優(yōu)勢，能夠提供豐富的分子結構信息，具有良好的專屬性、重現(xiàn)性，可綜合反映不同產地三七化學成分的復雜性和多樣性[29]。IR圖譜將三七不同成分中同類官能團以疊加峰的形式展示，能夠從不同角度對三七質量進行評價[14]。本建立了15批生三七及其炮制品的IR指紋圖譜，并進行相似度評價和雙指標序列分析。結果顯示，經峰位對比發(fā)現(xiàn)，生三七在3 440、1 450 cm-1處，炮制品在1 530、575 cm-1處存在差異，生三七及其炮制品吸收峰不同，表明經炮制后三七的化學成分發(fā)生變化，可以此對二者進行鑒別。雙指標序列法可通過量化關系比對出親緣關系相近的樣本[30]。本研究結果顯示，15批生三七的共有峰率為80%～100%，相似度較高;炮制品的共有峰率為80%～100%，相似度較高。這表明云南3個不同產地的三七化學種類相似，與聚類分析結果一致，但雙指標序列法雖然較精確，但計算較為繁雜，不適用于大樣本量比對[31]。

本研究采用HPLC指紋圖譜及IR指紋圖譜對生三七及其炮制品進行了鑒別，所得結果均能夠有效區(qū)分不同產地生三七及其炮制品。本研究的不足之處為僅收集了云南3個產地共15批生三七及其炮制品，樣本量較小且為同一省份產藥材;雖然通過HPLC指紋圖譜及化學模式識別能明顯鑒別生三七及其炮制品，但IR光譜在產地鑒別上有所欠缺，今后有待收集更多省份地區(qū)的三七藥材樣品進行鑒別，以確認IR光譜在產地鑒別上的價值。

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（收稿日期：2021-04-16 修回日期：2021-07-29）

（編輯：陳 宏）