TCT聯合HPV、P16檢測對早期宮頸癌病變診斷效能的影響

李瑞青（河南省安陽市衛生計生監督局,河南 安陽 455000）

宮頸癌為子宮陰道部或宮頸管出現惡性腫瘤，目前發病機制尚未明確，我國宮頸癌發病及死亡人數約占全世界的1/3。相關研究表明，早期宮頸癌治愈率高達80%-90%，因此，及早發現、診斷對患者治療及防治具有重要意義[1]。宮頸液基薄層細胞學檢測（TCT）、人乳頭狀瘤病毒（HPV）檢測在宮頸癌檢測中具有重要價值，而P16蛋白免疫組化染色異常表達與HPV感染及宮頸癌均關系密切[2]。基于此，本研究探討TCT聯合HPV、P16檢測對早期宮頸癌病變診斷效能的影響，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我門診收治的324例疑似早期宮頸癌患者（2017年3月-2019年3月），年齡20-68歲，平均（43.16±9.10）歲。

1.2 納入及排除標準 ①納入：均行TCT、HPV、P16檢查；均行陰道鏡下組織活檢；存在宮頸潰瘍、糜爛、接觸性出血等病情；簽署知情同意書。②排除：宮頸癌病史；子宮切除史；妊娠期婦女。

1.3 方法

1.3.1 TCT檢查 患者均禁止性生活、陰道塞藥，3d后先使用棉球清潔陰道，擦拭過多分泌物，再使用特制毛刷緊貼宮頸口與黏膜交界處，順同一方向旋轉5圈，采集毛刷上細胞置于保存液中備用。采用TCT檢測儀（寧波美生公司），嚴格按照操作說明進行制片。由本院2名經驗豐富婦科醫師按照國際癌癥協會制定的TBS分類標準進行診斷。其中陰性：正常或炎癥（NILM）；陽性：意義不明非典型鱗狀細胞（ASC-US）、低密度鱗狀上皮內瘤變（LSIL）、高度鱗狀上皮內瘤變（HSIL）、鱗狀細胞癌（SCC）。剩余標本置于-20℃冰箱中保存。

1.3.2 HPV檢查 取TCT樣本，采用美國Digene公司第二代雜交捕獲技術行HPV技術檢查，結果顯示標本熒光度值（RLU）/陽性定標閾值（CO）≥1.0pg/ml即為陽性。

1.3.3 P16免疫組化檢查 P16免疫組化使用鼠抗人單克隆抗體P16（上海酶聯生物研究所提供）與SP免疫組化試劑盒（上海研卉生物科技有限公司提供）檢測，將TCT、HPV檢測剩余標本制成細胞薄片，經95%乙醇固定30min、蒸餾水漂洗后，抗原熱修復。P16蛋白表達定位于細胞質或細胞核，黃色或棕黃色染色為免疫組化陽性檢出結果，后通過陽性細胞占比及分布情況分級。細胞染色數為單個，陽性細胞數＜5%為陰性；細胞染色數呈散狀或小細胞團，陽性細胞數5%-24%為弱陽性；細胞染色數呈片狀或簇狀，陽性細胞數25%-50%為陽性；細胞染色數呈彌散性細胞著色，陽性細胞數＞50%為強陽性。

1.3.4 陰道鏡檢查與宮頸活檢 對患者宮頸疑似病變位置檢查，若鏡下無明顯病灶或圖像不滿意，可再取宮頸組織檢查，所有病理學檢查均由本院2名經驗豐富的病理醫生進行診斷。

1.4 觀察指標 ①觀察TCT、HPV與陰道鏡活檢病理診斷情況。②對比P16蛋白表達與陰道鏡活檢病理診斷結果。③以陰道鏡活檢病理診斷結果為“金標準”，比較TCT、HPV、P16蛋白及三者聯合診斷宮頸癌病變準確率、敏感性、特異度。

1.5 統計學分析 采用SPSS22.0對數據進行分析，計數資料以n（%）表示，χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TCT、HPV與病理檢查診斷情況 本組324例疑似早期宮頸癌患者經陰道鏡活檢病理檢查陰性102例，陽性222例（CIN Ⅰ 111例，CIN Ⅱ 82例，CIN Ⅲ 20例，SCC 9例）；TCT檢查真陰性89例，真陽性（CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ、SCC）共157例；HPV檢查真陰性90例，真陽性（CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ、SCC）共163例，見表1。

表1 TCT、HPV與病理檢查診斷情況

2.2 P16蛋白表達與陰道鏡活檢病理診斷結果 P16蛋白表達檢查真陰性92例，真陽性129例（弱陽性、陽性、強陽性CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ、SCC），見表2。

表2 P16蛋白表達與陰道鏡活檢病理診斷結果

2.3 診斷效能 TCT+HPV+P16診斷早期宮頸癌準確率93.21%、敏感性96.85%高于TCT的75.93%、70.72%，HPV的78.09%、73.42%，P16的68.21%、58.11%（P＜0.05）；TCT+HPV+P16診斷早期宮頸癌特異度85.29%與TCT的87.25%、HPV的88.24%、P16的90.20%比較，差異不顯著（P＞0.05），見表3。

表3 不同檢查方式的診斷效能比較(%)

3 討論

宮頸癌為常見惡性腫瘤，其死亡率居于我國女性癌癥第2位，嚴重影響人們生活質量，宮頸癌為漸進性癌前病變過程，因此及早診斷、早治療對提高患者治愈率尤為重要[3]。

TCT為典型宮頸癌細胞學檢測技術，具有無創、迅速等特點，相較于病理活檢等有創檢查，更易被患者接受。然而，據相關研究統計，TCT檢測宮頸癌及癌變情況準確率僅51%，與病理活檢結果檢測準確率70%-80%存在差異[4]。本研究結果顯示，TCT檢測早期宮頸癌準確率75.93%、敏感性70.72%，與上述結果一致。可能因TCT屬形態學檢查，雖能有效分辨不同時期宮頸癌，但易受取樣、制片、染色及醫師閱片水平等主觀因素影響，且由于宮頸癌屬多中心病變，僅采用TCT篩查則易降低檢測準確率、敏感性，導致漏診、誤診率較高。HPV為宮頸癌病變主要病原體，因此采用HPV檢測早期宮頸癌病變為有效篩查方式。本研究結果顯示，HPV檢測早期宮頸癌準確率78.09%，敏感性73.42%。現代分子生物學研究表明，高危型HPV檢測宮頸癌病變較為敏感，但僅高危型HPV持續性感染才可導致宮頸癌及病變情況發生，且多數患者為一過性感染，與宮頸癌關聯性較弱，因此，HPV單獨檢測早期宮頸癌具有一定局限性，尚不能應用于初篩工作中[5]。P16基因為NK4家族重要成員，其編碼產物為P16蛋白，而P16基因突變在許多腫瘤產生、發展中起重要作用，相關研究報道，P16表達陽性率可伴隨病變程度增加而升高，表達強度也呈逐漸遞增式，因此，P16可作為診斷宮頸癌前病變及宮頸癌的重要指標[6-9]。本研究結果顯示，P16檢測早期宮頸癌準確率68.21%、敏感性58.11%，可見伴隨病變程度增加，P16陽性表達率逐漸升高。相對于單種方式診斷而言，TCT+HPV+P16聯合診斷早期宮頸癌準確率93.21%、96.85%高于單一診斷，三者聯合可有效提高檢測準確率、敏感性，取長補短，利于及早制定治療措施。

綜上所述，TCT聯合HPV、P16蛋白免疫組化利于提高臨床篩查早期宮頸癌準確率、敏感性，可有效降低漏診情況發生，有助于早發現、早診斷、早治療宮頸病變，具有較高臨床價值，值得臨床應用推廣。