瑤藥材串連珠質量標準研究

莫單丹，唐炳蘭，龔小妹，歐春麗，王碩，周小雷，趙以民*（1.廣西藥用植物園，廣西藥用資源保護與遺傳改良重點實驗室，南寧 530023；2.廣西藥用植物園，廣西壯族自治區中藥資源智慧創制工程研究中心，南寧 530023）

串連珠為茜草科植物短刺虎刺Damnacanthus giganteus（Mak.）Nakai 的干燥根，別名巖石羊（灌陽）、半球蓮（恭城）、樹蓮藕（臨桂）、大黃沙[1-5]。短刺虎刺生于山地疏林或密林下和灌木叢中，主要分布于安徽、浙江、江西、福建、湖南、廣東、廣西、貴州、云南等省區[6-7]，在廣西主要分布在恭城、陽朔、灌陽、羅城、環江、桂林、臨桂、龍勝、那坡等地[2，8]。串連珠為瑤族民間習用藥材，具有補氣收斂止血、舒筋活血、補養氣血、祛風除濕、安神止咳的功效，主要用于腎虛腰疼、遺精、貧血萎黃、瘰疬、骨結核、咳嗽、肝脾腫大、體弱血虛、月經不調、崩漏、白帶、小兒疳積、風濕痹痛、黃疸、腸風下血、肝炎、腫瘤、神經衰弱、跌打損傷等癥[2，7]。目前研究表明，串連珠主要化學成分是茜根定-1-甲醚、短刺虎刺素、8-羥基短刺虎刺素、5-羥基虎刺素-ω-乙基醚、8-羥基虎刺素-ω-乙基醚（1-甲氧基-2-乙氧甲基-3，8-二羥基蒽醌）[3，9]。現代藥理研究表明串連珠具有抗腫瘤作用[3]。桂林灌陽縣當地民間用串連珠治療頸淋巴結核，對鼻咽癌、頸轉移淋巴結有一定的療效，且具有鎮靜、鎮痛、抗炎、鎮咳的作用[10]。串連珠為瑤族民間習用藥材，但國家和地方標準均未收載，《廣西壯族自治區瑤藥材質量標準（第二卷）》擬收載該品種。因此，本研究通過對串連珠性狀、顯微及薄層色譜（TLC）進行鑒別，并對水分、總灰分、浸出物含量測定等項目進行研究，為該藥材的質量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

石蠟切片機（德國Leica RM2255）；HH-6數顯恒溫水浴鍋[邦西儀器科技（上海）有限公司]；FA2004 電子天平（上海舜宇恒平科學儀器有限公司）；電子分析天平（CP2250D，Sartorius）； 超純水儀（美國Millipore Milli-Q Academic）；DZTW 調溫電熱套（北京市永光明醫療儀器有限公司）；LEICA 生物顯微（DM2000 LEICA/Germany）。

1.2 試藥

硅膠GF254 薄層板（青島海洋化工有限公司），甲醇、石油醚（60～90℃）、三氯甲烷等均為分析純。串連珠10 個樣品分別采于廣西桂林市恭城瑤族自治縣、灌陽縣等地，經韋松基教授和黃云峰副研究員鑒定為茜草科植物短刺虎刺Damnacanthus giganteus（Mak.）Nakai，10 批樣品的詳細信息見表1。以CLZ-3 樣品作為串連株的對照藥材與其他樣品進行對比；將樣品干燥、粉碎處理，過40 目篩，備用。

表1 串連株樣品信息Tab 1 Sample source information of Damnacanthus giganteus

2 方法與結果[11-13]

2.1 藥材性狀與顯微特征

2.1.1 方法 藥材性狀通過對藥材的形狀、大小、顏色、斷面、氣、味等進行觀察并描述分析。顯微特征分別取藥材根按石蠟切片法制作切片，取藥材粉末按粉末制片法制作粉末片，在顯微鏡下觀察拍照并描述。

2.1.2 藥材性狀 本品呈圓柱形，略彎曲，自然縊縮而呈念珠狀，縊縮處常有表皮包被而不露出木部，直徑4～9 mm。表面棕褐色，有不規則縱皺紋，橫裂紋明顯。質堅脆，易折斷，斷面皮部淡紫色或黃白色，木部黃白色。氣微臭，味微甘，嚼之稍發黏（見圖1）。

圖1 串連株藥材Fig 1 Crude drug of Damnacanthus giganteus

2.1.3 根橫切面 木栓層為數列木栓細胞；皮層寬廣，內外兩側均有石細胞單個或多個成群散在，直徑30～80 μm，薄壁細胞可見草酸鈣針晶束，長達150 μm；韌皮部窄，有的細胞含細小草酸鈣針晶束，長30～50 μm；形成層呈環狀；木質部導管呈放射狀排列。（見圖2）。

圖2 串連珠根橫切面顯微圖Fig 2 Cross section of Damnacanthus giganteus root

2.1.4 粉末特征 本品粉末灰棕褐色。草酸鈣針晶束散在或存在于薄壁細胞中，針晶長30～150μm；石細胞棕黃色，類長方形、類橢圓形、或不規則形，長50～200 μm，寬15～50 μm，壁較厚，紋孔及孔溝明顯；木纖維單個散離或成束，比較薄，可見點狀紋孔；多見孔紋導管。木薄壁細胞類長方形、類橢圓形，木化，長47～200μm，寬29～34 μm，見圖3。

圖3 串連株粉末顯微圖Fig 3 Powder of Damnacanthus giganteus

2.2 薄層色譜鑒別

2.2.1 溶液的制備 取本品粉末2 g，加乙醇50 mL，超聲處理（功率200 W，頻率40 kHz）30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10 mL 使溶解，用三氯甲烷萃取兩次，每次10 mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，殘渣加甲醇2 mL 使溶解，作為供試品溶液。另取串連株對照藥材2 g，同法制成對照藥材溶液。

2.2.2 薄層色譜條件及結果 照薄層色譜法[《中國藥典》2015年版四部通則0502]試驗，吸取上述兩種溶液各2～5 μL，分別點于同一硅膠GF254 薄層板上，以石油醚（60～90℃）-三氯甲烷-甲醇-水（8∶17∶2∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品，在與對照藥材相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點（見圖4）。

圖4 串連株樣品TLC 圖Fig 4 TLC chromatogram of Damnacanthus giganteus

2.3 水分、總灰分、酸不溶性灰分及浸出物的測定

2.3.1 測定方法 水分測定參照《中國藥典》2015年版四部通則0832 水分測定法測定；總灰分、酸不溶性灰分測定參照《中國藥典》2015年版四部通則2302 灰分測定法測定；浸出物參照《中國藥典》2015年版四部通則2201 項下的冷浸法進行測定。

2.3.2 測定結果 10 批樣品的水分、總灰分、酸不溶性灰分和浸出物的測定結果見表2。10批樣品水分含量在7.91%～12.85%，總灰分含量在3.33%～5.58%，酸不溶性灰分含量在0.16%～0.76%，70%乙醇浸出物（冷浸法）含量在5.77%～11.08%。

表2 串連珠樣品水分、總灰分、酸不溶性灰分及浸出物測定結果(n ＝3，%)Tab 2 Determination of moiture，ash，acid insoluble ash and extract of Damnacanthus giganteus (n ＝3，%)

3 討論

目前，關于串連珠的化學成分、藥理作用研究較少，其主要化學成分為蒽醌類，有抗腫瘤、鎮靜、鎮痛、抗炎、鎮咳的作用。串連珠為瑤族民間習用藥材，其物質基礎及作用機制研究還未見報道。經查閱文獻和預試驗，本研究未找到合適的指標成分用于薄層鑒別和含量測定，因此采用經專家鑒定的串連珠作為對照藥材用于薄層鑒別。

薄層色譜鑒別比較了三氯甲烷-石油醚-甲醇-水（10∶5∶2∶1）、三氯甲烷-石油醚-甲醇-水（10∶5∶1∶1）、三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-水（20∶2∶1∶1）、三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-水（7∶2∶1∶1）等展開系統，經過反復試驗確定以石油醚（60～90℃）-三氯甲烷-甲醇-水（8∶17∶2∶1）為展開劑，得到的薄層色譜斑點分離度較好。同時考察了不同廠家、不同類型預制板，不同展開溫度和濕度，結果均表明本法的耐用性良好。

根據測定結果，考慮到串連珠藥材為南方所產，而南方氣候較為濕潤，因此擬訂水分不得過13.0%，總灰分不得過6.0%，酸不溶性灰分不得過1.0%；采用冷浸法和熱浸法來進行試驗，結果兩者提取率相當，浸出溶劑的選擇方面，采用不同濃度的乙醇和水作為溶劑來提取，結果不同濃度其浸出物含量不同，水溶性大于醇溶性浸出物含量，低濃度的乙醇浸出物含量較大，為了降低藥材無效成分的溶出度，重點富集瑤藥串連株蒽醌類和部分水溶性成分等主要活性成分，因此浸出物測定采用以70%乙醇作為溶劑的冷浸法，含量不得少于5.0%。本研究所建立的方法準確可靠，可為瑤藥串連珠的質量評估、監管等提供參考。