急性淋巴細(xì)胞白血病患者GLUT3、TSLC1 的表達(dá)及臨床意義

譚卡

（開封市中心醫(yī)院血液內(nèi)科，河南 開封 475000）

急性淋巴細(xì)胞白血病是起源于淋巴祖細(xì)胞的一種腫瘤性疾病，多發(fā)于兒童，成人發(fā)病占比約15～20%[1]。急性淋巴細(xì)胞白血病主要表現(xiàn)為原始淋巴細(xì)胞惡性增殖并侵入肝、脾等組織器官，嚴(yán)重影響患者的正常生理功能。研究指出，年齡、遺傳以及生活習(xí)慣等原因均會(huì)對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病的治療造成影響，也因此提升了急性淋巴細(xì)胞白血病治療的難度[2]。本研究就急性淋巴細(xì)胞白血病患者葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-3（Glucose transporter 3，GLUT3）、腫瘤抑制物1（Tumor suppressor in lung cancer 1，TSLC1）的表達(dá)及臨床意義進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年4 月至2020 年4 月期間我院診治的59 例急性淋巴細(xì)胞白血病患者作為研究對(duì)象的研究組。研究組男性31 例，女性28 例；年齡17～71 歲，平均年齡32.45±6.79 歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)形態(tài)學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)分型診斷，符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》中急性淋巴細(xì)胞白血病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]；在我院住院治療且臨床資料、實(shí)驗(yàn)室資料完整者；患者及其家屬均知曉本研究內(nèi)容和目的，同意參加本研究并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：存在心、肝、腎等嚴(yán)重病變者；存在原發(fā)性或者繼發(fā)性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變者；合并人類免疫缺陷病毒感染者或遺傳學(xué)免疫缺陷者；精神疾病或存在相關(guān)家族史者。另選取53 例同期非急性淋巴細(xì)胞白血病患者作為研究對(duì)象的對(duì)照組。對(duì)照組男性28 例，女性25 例；年齡19～70 歲，平均年齡為33.14±7.25歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)確診的缺鐵性貧血和巨幼細(xì)胞貧血患者；患者同意參加本研究并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有自身免疫疾病者；患有惡性腫瘤者；入組前3 個(gè)月內(nèi)存在感染病史者；急性淋巴細(xì)胞白血病患者；獲得性免疫缺陷綜合征患者；近期使用激素治療者。兩組患者在一般資料上差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 獲取單個(gè)核細(xì)胞

患者局麻后，于髂前上棘進(jìn)行骨髓穿刺，抽取患者骨髓液5 mL，置于抗凝試管內(nèi)，按照等體積比將其加入 Ficoll 分離液（上海根生生物科技有限公司），1500 rpm 離心15 min 后分離試管中層內(nèi)的單個(gè)核細(xì)胞，置于零下80℃超低溫冰箱保存待檢。

1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse Transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）

使用Trizol 總RNA 提取試劑盒對(duì)單個(gè)核細(xì)胞總RNA 進(jìn)行提取，并檢測純度。用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將總RNA 逆轉(zhuǎn)錄為模板鏈cDNA，以cDNA 為模板，以GAPDH 為內(nèi)參，進(jìn)行RT-PCR 檢測。TSLC1 引物：F（正向引物）：5，-GGT GAT GGG CAG AAT CTG TTT AC-3’，R（反向引物）：5，-ACC AGG ACT GTG ATG GTG GTG T-3’，PCR 反應(yīng)條件：94 ℃ 30 S，59 ℃ 30 S，55 ℃ 30 S，72 ℃1 min，連續(xù)進(jìn)行30 個(gè)循環(huán)。GLUT3 引物：F（正向引物）：5’-GTG TCT CCC ACT GCC CTA C-3’，R（反向引物）：5，-GCC CAG AAT AAA GTC CAA A-3’，PCR 反應(yīng)條件：95 ℃ 30 S，95 ℃ 30 S，60 ℃ 30 S，72 ℃ 30 S，連續(xù)進(jìn)行38 個(gè)循環(huán)。

對(duì)比不同臨床病理特征（年齡、性別、疾病分型、血紅蛋白、血小板計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)）的急性淋巴細(xì)胞白血病患者GLUT3、TSLC1 表達(dá)情況。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 GLUT3 的表達(dá)情況

采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 測定骨髓單個(gè)核細(xì)胞中 GLUT3 RNA 的表達(dá)量。GLUT3 的相對(duì)表達(dá)量≥1.9 視為GLUT3 陽性[4]。

1.3.2 TSLC1 的表達(dá)情況

采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 測定骨髓單個(gè)核細(xì)胞中TSLC1 RNA 的表達(dá)量。TSLC1 的相對(duì)表達(dá)量＞26%視為TSLC1 陽性[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究數(shù)據(jù)均采用SPSS22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)比兩組GLUT3、TSLC1 的表達(dá)情況

研究組GLUT3 的陽性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），研究組TSLC1 的陽性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組GLUT3、TSLC1 的表達(dá)情況（例（%））

2.2 對(duì)比不同臨床病理特征的急性淋巴細(xì)胞白血病患者GLUT3、TSLC1 表達(dá)情況

年齡、性別、疾病分型、血小板計(jì)數(shù)不同者GLUT3、TSLC1 的表達(dá)無明顯差異（P＞0.05）；血紅蛋白（異常）、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（異常）者GLUT3陽性率明顯高于血紅蛋白（正常）、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（正常）者（P＜0.05）。白細(xì)胞計(jì)數(shù)（異常）者TSLC1陽性率明顯高于白細(xì)胞計(jì)數(shù)（正常）者（P＜0.05）。

3 討論

急性淋巴細(xì)胞性白血病是因原癌基因、抑癌基因發(fā)生多位點(diǎn)突變，喪失對(duì)細(xì)胞生長的調(diào)控，致使B、T 淋巴細(xì)胞的克隆異常增殖。研究表明，白血病患者會(huì)因?yàn)榧顾枞毖醵鴮?dǎo)致白血病細(xì)胞的增殖，引起細(xì)胞中GLUT3 的代謝增強(qiáng)，檢查可見GLUT3 處于異常表達(dá)狀態(tài)[6]。TSLC1 為腫瘤抑制因子，研究指出TSLC1 可活化凋亡蛋白半胱天冬酶，誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡。眾多學(xué)者認(rèn)為，TSLC1與人類多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展存在關(guān)聯(lián)，可作為抑制腫瘤生物侵襲性的一種重要受體蛋白[7]。本研究中，急性淋巴細(xì)胞白血病患者GLUT3 陽性表達(dá)率高于對(duì)照組、TSLC1 陽性表達(dá)率低于對(duì)照組，表明在急性淋巴細(xì)胞白血病中，GLUT3 與TSLC1均出現(xiàn)異常表達(dá)，兩者表達(dá)情況與急性淋巴細(xì)胞白血病的發(fā)生有密切的關(guān)系。且血紅蛋白（異常）、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（異常）者GLUT3 陽性率明顯高于血紅蛋白（正常）、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（正常）者，白細(xì)胞計(jì)數(shù)（異常）者TSLC1 陽性率明顯高于白細(xì)胞計(jì)數(shù)（正常）者。這些結(jié)果提示GLUT3、TSLC1 與急性白血病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。

綜上所述，在急性淋巴細(xì)胞白血病患者骨髓單個(gè)細(xì)胞中GLUT3 陽性表達(dá)率高、TSLC1 陰性表達(dá)率高，推測GLUT3、TSLC1 參與了急性淋巴細(xì)胞白血病發(fā)生、發(fā)展的過程，并可能對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病的預(yù)后評(píng)估以及指導(dǎo)治療具有重要意義。