宮頸癌LHPP表達情況及其與預后的關系*

朱明君，陸曉媛,方月蘭

(1.徐州醫科大學附屬宿遷醫院婦產科，江蘇宿遷 223800；2.徐州醫科大學附屬醫院婦產科，江蘇徐州 221004)

宮頸癌是女性癌癥相關死亡的主要原因[1]。降低宮頸癌病死率、改善預后是臨床婦科工作重點。盡管已經提出了多種與宮頸癌進展有關的病理學機制，但仍需要進一步的研究來揭示宮頸癌的發生機制[2]。據報道，組氨酸磷酸酶(LHPP)是一種腫瘤抑制因子[3]。組氨酸磷酸化在多種生物學過程中發揮重要作用，目前LHPP表達在腫瘤發生、發展中作用成為研究熱點。既往研究發現人宮頸癌組織中的LHPP表達水平低于正常組織標本[4]，但LHPP表達與宮頸癌預后及臨床特征間關系報道較少。本研究探討LHPP蛋白在宮頸癌中表達情況，以及其臨床意義及對患者預后的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2012年1月至2014年12月徐州醫科大學附屬宿遷醫院存檔的石蠟組織標本，包括90例宮頸癌標本(A組)，90例宮頸鱗狀上皮內病變標本(B組，其中低級別鱗狀上皮內病變40例，高級別鱗狀上皮內病變50例)和90例慢性宮頸炎標本(C組)。納入標準：(1)均存在明確的病理診斷，均由兩名以上經驗豐富的病理醫師進行閱片確診；(2)宮頸癌病例按國際婦產科聯盟2018年的臨床分期標準進行分期，組織病理分級按國際婦產科聯合會(FIGO)分級方法評定為ⅠA～ⅡA期[5]，所收集的宮頸癌標本患者術前均未接受過放療、化療或免疫治療，宮頸癌患者均可獲得術后隨訪資料；(3)宮頸鱗狀上皮內病變患者標本來自電子陰道鏡下多點活檢標本和(或)宮頸錐切術后標本或全子宮切除標本；(4)慢性宮頸炎組織標本均來自同期因子宮肌瘤或其他非宮頸性病變行子宮全切術的病例；(5)患者未合并其他腫瘤。排除標準：(1)來源于其他腫瘤的轉移癌；(2)術前進行化療、放療或藥物治療；(3)合并免疫系統疾病。本研究取得徐州醫科大學附屬宿遷醫院倫理委員會批準，標本采集取得患者本人或家屬知情同意。

1.2 方法

1.2.1主要試劑及儀器

兔抗人LHPP抗體(美國Abcam公司，貨號ab254788-100 μL)，即用型高效免疫組織化學二抗試劑盒(上海愛必信生物科技有限公司，貨號abs957-5 mL)，石蠟組織切片機(Leica RM2015)，病理組織漂烘儀(PHY-Ⅲ)，電熱恒溫干燥箱(GZX-DH-400-BS)。

1.2.2LHPP檢測方法

采用免疫組織化學第二代聚合酶標兩步法(PV法)檢測LHPP在各宮頸組織中表達水平[3]。具體步驟：石蠟包埋的宮頸組織常規切片；切片烘干、脫蠟、水化；檸檬酸鈉緩沖液中高壓修復抗原15 min；加入過氧化氫孵育10 min；磷酸緩沖鹽溶液(PBS)洗2～3次各5 min；加入超級封閉液孵育5 min以減少非特異性染色；加一抗，室溫孵育20 min；PBS洗2～3次各5 min；加入一抗放大劑孵育10 min；PBS洗2～3次各5 min；加入酶標二抗聚合物孵育10 min；PBS洗2～3次各5 min；DAB顯色；蘇木素復染；常規脫水，透明，封片，閱片。

1.2.3免疫組織化學結果評定

(1)免疫組織化學結果請病理科主任醫師雙盲法閱片。免疫組織化學陽性表達為境界清晰，突出于背景的中黃或棕褐色顆粒，存在于細胞質或細胞核內為陽性細胞。(2)免疫組織化學判讀方法[3]：①根據著色強度：0分為無色，1分為淺黃色，2分為中黃色，3分為棕黃色；②根據陽性細胞比例：<25%為1分，25%～<50%為2分，50%～<75%為3分，≥75%為4分；③兩種積分相乘總分：≤3分為陰性，>3分為陽性。

1.2.4治療方法

所有患者均接受腹腔鏡手術，同步放化療：術后放療2 Gy/次，共40～60 Gy，共20～23次，順鉑40 mg/m2，每周1次，共4～5次。化療：紫杉醇135～175 mg/m2加順鉑75 mg/m2，每周3次，共4個療程。本研究中共19例術后接受單純輔助化療，71例接受同步放化療。

1.2.5隨訪方法

手術時間為隨訪開始時間，隨訪截至2020年1月。總體生存(overall survival，OS)期定義為隨訪開始時間至隨訪截止時間或死亡時間。通過電話隨訪，每半年進行1次隨訪，隨訪終點為宮頸癌相關死亡。

1.3 統計學處理

采用SPSS26.0軟件進行數據分析，計數資料以頻數或百分率表示，比較采用χ2檢驗分析，用Kaplan-Meier法和Log-rank法行生存分析并繪制生存曲線，使用單、多因素Cox分析進行預后分析，以P<0.05為差異有統計學意義

2 結 果

2.1 不同宮頸標本LHPP表達情況

A組25例(27.8%)LHPP表達陽性，B組41例(45.6%)LHPP表達陽性，其中低級別鱗狀上皮內病變24例(26.7%)LHPP表達陽性，高級別鱗狀上皮內病變17例(18.9%)LHPP表達陽性，C組69例(76.7%)LHPP表達陽性，3組LHPP表達陽性率比較，差異有統計學意義(χ2=44.089，P<0.001)。高級別鱗狀上皮內病變LHPP表達陽性率低于低級別鱗狀上皮內病變(χ2=6.057，P=0.014)，見圖1。

A：宮頸鱗狀上皮內病變LHPP陽性表達；B：慢性宮頸炎LHPP陽性表達；C：宮頸癌組織LHPP陽性表達；D：宮頸癌組織LHPP陰性表達。

2.2 不同LHPP表達情況比較

LHPP表達陽性患者腫瘤分期ⅡA比例和淋巴血管侵犯率低于LHPP表達陰性患者，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 不同LHPP表達情況比較[n(%)]

2.3 不同LHPP表達情況的宮頸癌生存曲線

隨訪時間48～75個月，平均(58.9±7.8)個月，共19例患者死亡，其中5年內死亡14例，5年OS率為84.4%。Kaplan-Meier法并Log-rank檢驗顯示，LHPP表達陽性患者累積生存率高于LHPP表達陰性患者(Log-rankχ2=4.025，P=0.040)，見圖2。LHPP表達陽性患者3年OS率為96.0%，高于對照組的78.2%(χ2=4.010，P=0.045)。

圖2 不同LHPP表達情況的宮頸癌患者生存曲線

2.4 宮頸癌OS的影響因素分析

Cox單因素分析結果顯示，腫瘤分期、淋巴血管侵犯、腫瘤等級、LHPP表達是宮頸癌患者OS的影響因素(P<0.05)。將年齡、腫瘤最大徑、腫瘤分期、淋巴血管侵犯、輔助化療、同步放化療、腫瘤等級、LHPP表達作為自變量，將OS作為因變量進行Cox多因素分析，結果顯示腫瘤分期、腫瘤等級、LHPP表達是宮頸癌患者OS的獨立影響因素(P<0.05)，見表2、3。

表2 宮頸癌OS的單因素分析

表3 宮頸癌OS的多因素分析

3 討 論

在癌癥中廣泛觀察到激酶或磷酸酶失調，如LHPP、蛋白激酶B(AKT)、蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)等。LHPP從蠕蟲到人均具有28%的同一性，最初在豬的腦組織中被發現。最近，LHPP通過靶向作用于磷脂酰肌醇三激酶(PI3K)/AKT信號通路，被鑒定為肝細胞癌等多種腫瘤的抑癌基因[6]。它在肝癌標本中低表達，其低表達與肝癌患者的不良生存相關[6]。在另一項研究中，LHPP在胰腺癌中下調，而LHPP沉默可促進胰腺癌的進展[7]。人胃腺癌組織中，LHPP表達也下調，且與胃癌的分化程度密切相關[8]。

LHPP在宮頸癌中的研究報道較少，ZHENG等[9]研究報道，LHPP在宮頸癌中低表達，下調的LHPP通過調節AKT，在宮頸癌中影響細胞增殖、轉移和細胞凋亡。本研究觀察了LHPP蛋白在宮頸癌組織中的表達情況，證實LHPP在宮頸癌組織中的表達下調，該結果與既往研究相符[9]。本研究顯示，隨著宮頸病變程度的加重，LHPP陽性表達率隨之降低，說明LHPP表達與宮頸病變程度密切相關，LHPP隨宮頸病變進展表達遞減。在宮頸癌患者中，LHPP表達陽性患者ⅡA期比例及淋巴血管侵犯率明顯低于LHPP表達陰性患者，提示LHPP表達下調可增加較高腫瘤分期及淋巴血管侵犯的風險。既往研究在其他腫瘤中觀察到LHPP表達下調增加腫瘤淋巴轉移和進展風險，如胃癌、胰腺癌、結直腸癌等[7-8,10]。

本研究證實LHPP表達陽性患者累積生存率高于LHPP表達陰性患者，且LHPP表達情況是宮頸癌患者OS的獨立影響因素，LHPP表達下調的患者死亡風險增高，預后更差，LHPP表達可能成為宮頸癌預后標志物。

LHPP基因位于10號染色體，在人腦、腎、肝和膀胱組織中普遍表達，其與腫瘤發生密切相關，被認為是抑癌基因[11-13]。目前，LHPP表達與宮頸癌進展的關系仍不明確。多數研究支持LHPP陽性表達抑制了腫瘤生長和轉移，是宮頸癌的抑制因子，過表達減少了細胞增殖、遷移和侵襲。ZHENG等[9]研究顯示，過表達的LHPP通過促進裂解的半胱氨酸蛋白酶-3和PARP誘導人宮頸癌細胞凋亡，LHPP可阻止宮頸癌細胞增殖和轉移，并觸發細胞凋亡。且ZHENG等[9]在體內通過抑制細胞增殖和轉移、誘導凋亡證實了LHPP的抗宮頸癌作用。PTEN/PI3K/AKT信號通路直接或間接參與癌癥發展，對該途徑任何成分的調節異常都會導致細胞增殖失控，細胞凋亡受到抑制，細胞代謝改變和腫瘤發生[14]。而LHPP在PTEN/PI3K/AKT信號通路的調節中具有重要作用[15]。目前LHPP在宮頸癌中發揮抑癌作用的機制尚不清楚，是否通過PTEN/PI3K/AKT信號通路發揮抗腫瘤作用仍待體外研究證實。本研究患者5年OS率為84.4%，與余淼等[16]報道的ⅠB～ⅡA2期早期宮頸癌5年OS率(84.1%)相差不大。大樣本量調查顯示，Ⅰ～Ⅱ期早期宮頸癌5年疾病特異性OS率為73.7%～97.8%，5年OS率為40.6%～84.5%[17]。由于病例數不足，本研究的OS率符合既往研究。不同研究中OS率不同可能與病理選擇、治療、分化程度、淋巴血管侵犯、年齡等有關，本研究結論仍待大樣本量研究證實。

綜上所述，LHPP表達與宮頸癌預后及病理相關，隨著陽性率降低，死亡風險及淋巴血管侵犯風險增高。