子宮內膜異位癥患者異位病灶組織FoxM、CDK表達觀察

李佩，穆丹，陳利平

監利市人民醫院婦產科，湖北監利433300

子宮內膜異位癥（EMs）指子宮內膜組織在子宮體之外部位生長，是婦科常見良性疾病，在育齡期女性中發病率為10%~15%，且呈逐年上升趨勢［1-2］，可引發月經紊亂、痛經、盆腔痛、難治性不孕等，嚴重影響患者身心健康及生活質量［3］。既往研究顯示，EMs雖然屬于良性病變，但具備局部種植、浸潤性生長、遠處轉移等類似惡性腫瘤的特點，其發病與遺傳、內分泌、免疫、炎癥等因素有關，但其確切發病機制尚不明確［4-5］，探討其發生機制是當前研究熱點課題。叉頭框轉錄因子M1（FoxM1）在細胞增殖、遷移及血管生成等過程中發揮關鍵調控作用；細胞周期蛋白依賴性激酶6（CDK6）是關鍵細胞周期相關蛋白，可誘導細胞增殖過程；兩者均與惡性腫瘤細胞增殖過程關系密切［6-8］，而EMs發生機制與惡性腫瘤存在相似之處，推測FoxM1、CDK6可能參與EMs的病理過程，既往研究中鮮有FoxM1、CDK6與EMs關系的探討。我們觀察了EMs患者異位病灶組織FoxM1、CDK6表達的變化，分析了EMs異位病灶組織中FoxM1、CDK6表達之間的關系及與患者病理分期、臨床分型的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2019年2月—2021年1月在監利市人民醫院婦產科就診的EMs患者105例（觀察組），年齡23~46（32.78±6.19）歲，體質量指數（BMI）為（23.27±2.56）kg/m2，月經周期（30.18±3.19）d，月經持續時間（5.51±0.95）d。納入標準：術后病理學結果證實為EMs；6個月內無激素類藥物使用史；月經規律；臨床資料完整。排除標準：合并內分泌疾病、免疫性疾病、其他嚴重器質性病變、惡性腫瘤者；妊娠及哺乳期女性。依據《子宮內膜異位癥的診治指南》中的分期標準［9］可分為：Ⅰ期11例，Ⅱ期27例，Ⅲ期58例，Ⅳ期9例；依據EMs病理分型可分為：卵巢型86例，深部浸潤型19例。另外選取同期行子宮切除手術的105例子宮肌瘤患者為對照組，年齡23~46（33.73±6.52）歲，BMI（23.41±2.51）kg/m2，月經周期（30.26±3.24）d，月經持續時間（5.32±1.07）d。兩組基線資料比較差異無統計學意義（P均＞0.05）。本研究經醫院倫理委員會批準（LD2018-113），研究對象均簽署知情同意書。

1.2 組織中FoxM1、CDK6檢測術中分別收集觀察組異位病灶組織及對照組健康子宮內膜組織，用生理鹽水沖洗，紗布蘸干，10%甲醛固定，常規脫水，石蠟包埋，4 μm連續切片，然后采用免疫組織化學染色法檢測組織中FoxM1、CDK6。由經驗豐富的兩名病理科醫師采用雙盲法對染色結果進行獨立評價。隨機在每張切片上選取6個視野，每個視野計數100個細胞，以出現棕黃色或深棕色顆粒判定為陽性細胞，FoxM1定位于細胞質及細胞核，CDK6定位于細胞質及細胞膜，根據陽性細胞比例以及染色程度進行評分。陽性細胞比例評分：5%以下判為0分，5%~25%判為1分，26%~50%判為2分，51%~75%判為3分，75%以上判為4分；陽性細胞染色程度評分：未著色判為0分，棕黃色判為1分，深棕色判為2分。兩項評分相乘得到總分，0~3分判為陰性表達，4分及以上判為陽性表達［10］。

1.3 統計學方法采用SPSS25.0統計軟件。計量資料以xˉ±s表示，比較采用t檢驗；計數資料以例或百分率表示，比較采用χ2檢驗或Fisher's精確檢驗。采用Spearman分析EMs患者異位病灶組織中FoxM1、CDK6表達相關性。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 觀察組與對照組組織中FoxM1、CDK6表達比較觀察組FoxM1、CDK6陽性分別為7、11例，對照組分別為34、37例，與對照組相比，觀察組異位病灶組織中FoxM1、CDK6陽性表達率高（χ2值分別為22.094、18.256，P均＜0.01）。觀察組異位病灶組織中FoxM1、CDK6表達見圖1、圖2。

圖1 觀察組異位病灶組織中FoxM1表達（免疫組織化學染色，400×）

圖2 觀察組異位病灶組織中CDK6表達（免疫組織化學染色，400×）

2.2 EMs異位病灶組織中FoxM1、CDK6表達與患者臨床分期、病理分型的關系Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期EMs患者異位病灶組織中FoxM1陽性分別為2（18.18%）、6（22.22%）、19（32.76%）、7例（77.78%），CDK6陽 性 分 別 為2（18.18%）、7（25.93%）、21（36.21%）、7例（77.78%），不同分期EMs患者異位病灶組織中FoxM1陽性表達率相比，χ2=9.658，P=0.017；CDK6陽 性 表 達 率 相 比，χ2=8.806，P=0.028。卵巢型、深部浸潤型患者異位病灶組織中FoxM1陽性分別為23（26.74%）、11例（57.89%），CDK6陽性分別為24（27.91%）、13例（68.42%），不同分型EMs患者異位病灶組織中FoxM1陽性表達率相比，χ2=6.897，P=0.000；CDK6陽性表達率相比，χ2=11.193，P=0.001。

2.3 EMs患者異位病灶組織中FoxM1、CDK6表達相關性EMs患者異位病灶組織中FoxM1、CDK6表達呈正相關（r=0.512，P=0.000）。

3 討論

EMs依據異位病灶部位可分為卵巢型、深部浸潤型、腹膜型等，其中卵巢最易被侵犯，是EMs最為典型的分型，深部浸潤型指病灶浸潤深度在5 mm及以上的特殊類型，可累及盆腔［11］。部分EMs患者無典型臨床癥狀，加之目前缺乏有效的特異性生物標志物，故臨床診斷需依靠腹腔鏡檢查，EMs患者手術治療費用高昂且術后存在復發風險。目前尚無確切有效的根治方法，以上因素導致EMs的診療極具臨床挑戰性，探究EMs的發生機制顯得尤為關鍵［12-13］。

細胞周期包括DNA合成前期的G1期、DNA合成期的S期、DNA合成后期的G2期，有絲分裂期的M期，細胞過度增殖是腫瘤的主要發生原因之一，其分子機制為細胞周期調控失常，異位的子宮內膜能夠在宮腔外種植、轉移，依賴于細胞增殖能力的增強［14-15］。在衰老及正常終末分化組織中FoxM1呈低表達或不表達，在多種惡性腫瘤中FoxM1呈高表達，參與腫瘤的侵襲、轉移，是近年來惡性腫瘤領域的熱點研究分子［16-17］。研究發現，FoxM1在細胞有絲分裂過程中發揮重要作用，其異常表達可引起紡錘體缺陷，進而使有絲分裂過程延遲，最終參與宮頸癌細胞增殖過程［18］。CDK6是G1期重要調控因子，可促進細胞周期從G1期向S期轉變，其基因定位于人染色體7q21［19］。研究發現，CDK6與子宮內膜相關疾病密切相關；子宮內膜癌病灶組織中CDK6表達較子宮肌瘤病灶組織高，CDK6可通過影響腫瘤細胞增殖過程參與子宮內膜癌的病情演變［20-21］。本研究發現，與對照組相比，觀察組異位病灶組織中FoxM1、CDK6陽性表達率較高，且不同分期、分型EMs患者異位病灶組織中FoxM1、CDK6陽性表達率存在差異，提示FoxM1、CDK6參與EMs的發生、發展，隨著EMs患者病情加重，FoxM1、CDK6表達升高，分析原因是，高表達的FoxM1可破壞細胞骨架結構完整性，促進子宮內膜細胞發生遷移、浸潤，進而增強異位子宮內膜的增殖能力，使得子宮內膜細胞能夠在肌層種植及增殖，最終導致EMs的發生［22］；CDK6可能通過影響細胞增殖過程參與EMs的發生及演變。新近研究顯示，CDK6能夠穩定并激活FoxM1，進而維持G1~S期基因的正常表達，使活性氧維持低水平，從而對細胞衰老發揮抑制作用［23］。本研究發現，EMs患者異位病灶組織中FoxM1、CDK6表達呈正相關，提示FoxM1、CDK6可能共同損傷子宮內膜基底層的防御功能，促使子宮內膜細胞侵襲肌層，導致EMs發生，并參與病情的發生發展。

綜上所述，FoxM1、CDK6在EMs患者異位病灶組織中陽性表達率較高，兩者共同參與EMs的發生及病情演變，且具正相關關系，可能為EMs的臨床診治工作提供一定參考依據。本研究也存在一定局限性，未對FoxM1、CDK6影響EMs患者病情的具體機制進行深入探究，且為小樣本研究，可能存在一定結果偏差，有待進一步研究工作的開展。