隋珠草莓組培快繁體系的建立

靳 然 楊夢夢

（南陽農業職業學院 河南南陽 473000）

草莓是薔薇科草本植物，果肉中營養價值豐富，深受廣大人民群眾喜愛。隋珠草莓植株高大，長勢強旺，成熟早，抗病能力強，產量要比紅顏草莓更高，約是紅顏草莓的1.5 倍[1]。隋珠草莓種植將成為多地經濟發展和農民增收的重要途徑。

傳統草莓繁殖方式為匍匐莖繁殖或分株繁殖，但營養繁殖育苗，體內病毒累積，導致草莓植株矮小、果實畸形，種苗退化，產量和品質嚴重下降。植物組織培養技術可有效解決這一問題[2]。

目前關于隋珠草莓組織培養快繁研究較少。為此，文章以隋珠草莓的莖尖為外植體，建立簡單易行的隋珠草莓組培快繁體系，以期為隋珠草莓的規模化工廠生產提供完整可行的技術支持，更好地促進草莓的種植發展。

1 材料與方法

1.1 材料

供試的草莓品種為隋珠，采用匍匐莖的莖尖為試驗材料，所有材料來源一致，采摘于長江路生態草莓園。

1.2 試驗方法

1.2.1 取樣

選擇生長健壯的草莓植株，剪取植株上頂芽飽滿，并且小葉尚未展開的匍匐莖放入玻璃燒杯中備用。

1.2.2 外植體的預處理和消毒

將匍匐莖莖尖放在洗潔精或洗衣粉的水溶液中浸泡3 min～5 min，用軟毛刷輕輕刷洗除去表面塵土后用自來水沖洗干凈，再用流水沖洗3 h～4 h，裝入干凈玻璃瓶放置到超凈工作臺備用。在超凈工作臺上用75%的酒精浸泡30 s，無菌水沖洗2 次～3 次，后轉入濃度為0.1%的升汞溶液中處理8 min，無菌水沖洗5 次～6 次，放入無菌盤中，用無菌吸水紙吸取表面水分，切取2 mm莖尖備用。

1.2.3 初代培養誘導不定芽

MS為基本培養基，使用不同濃度的激素配比組合誘導不定芽。添加6-BA、NAA兩種激素，設置6個處理，6-BA濃度為0.50 mg/L、1.00 mg/L，NAA濃度為0.02 mg/L、0.05 mg/L，標號A1～A6。每處理接種30 瓶，每瓶接1個消毒莖尖，后置于培養室培養，溫度25 ℃，光照強度2 000 lx～3 000 lx。30 d后觀察生長情況。

1.2.4 增殖培養

選取長勢一致的不定芽轉接入不同激素配比的增殖培養基進行增殖培養。增殖培養基添加不同濃度的6-BA、NAA、2,4-D，共設置8個處理，6-BA濃度為0.50 mg/L、1.00 mg/L，NAA濃度為0.05 mg/L、0.10 mg/L，2,4-D濃度為0.05 mg/L、0.10 mg/L，標記為B1～B8。培養基中添加30 g/L蔗糖和7 g/L瓊脂，每個處理接種30 瓶，每瓶接種2株，30 d后觀察叢生芽的生長狀況。

1.2.5 生根培養

將生長健壯、生長狀況一致3 cm～4 cm的隋珠草莓苗分株接種至生根培養基上，生根培養基可采用MS、1/2MS為基本培養基，分別添加0.10 mg/L、0.30 mg/L的IBA，共設置4個處理，標記為C1～C4，每個處理接種30 瓶，每瓶接種1 株～2 株，30 d后觀察組培苗的生根情況。

1.2.6 馴化移栽

將生根2 cm以上、長勢良好的組培苗先進行煉苗，在煉苗室放置2 d，半開封口2 d，隨后全部去除封口蓋3 d～4 d，讓組培苗逐步適應外界環境。經煉苗后把隋珠草莓苗從培養瓶中取出，清水洗凈附著在根部的培養基后用于移栽。移栽的基質選擇三種：草炭與蛭石的比例分別為2∶1、1∶1、1∶2，記為D1～D3。前期保證水分供應充足，2周后觀察統計成活率。

2 結果與分析

2.1 無菌組培苗的建立

外植體的滅菌是無菌組培苗建立的前提。75%的酒精+0.1%的升汞溶液滅菌效果良好。隋珠草莓匍匐莖莖尖污染率為42.6%，死亡率達13.7%。

2.2 初代培養

將消毒滅菌的隋珠草莓匍匐莖莖尖接種于A1～A6培養基中，接種7 d后，在生長點基部首先出現綠色芽點，隨后不斷長大，在16 d～18 d后萌發出幼芽。由表1可看出，在相同培養條件下，誘導不定芽分化的最佳培養基為MS+6-BA0.50 mg/L+NAA0.02 mg/L。當6-BA濃度為0.50 mg/L時，不定芽萌發率隨著NAA濃度的升高先上升后下降。NAA濃度一定時，6-BA濃度的升高反而使不定芽萌發率下降（如A2與A5對比，A3與A6對比），且A4和A6處理下不定芽萌發率差異不大。

表1 不定芽誘導結果

2.3 增殖培養

將隋珠草莓生長一致的不定芽轉接入增殖培養基中，表2結果可以看出，不同培養基處理的增殖倍數差異明顯，增殖培養最佳培養基為MS+6-BA0.50 mg/L+NAA0.05 mg/L，在該種激素配比下，叢生芽生長健壯。當6-BA濃度一定時，6-BA和NAA的組合促進不定芽增殖的效果要優于6-BA和2,4-D組合。在6-BA和NAA的組合中，NAA濃度一定時，隨著6-BA濃度的升高，增殖倍數反而下降，即6-BA濃度為0.50 mg/L時促進增殖的效果要優于6-BA濃度為1.00 mg/L處理組。

表2 不定芽增殖結果

2.4 生根培養

當隋珠草莓苗長至3 cm～4 cm時，移至生根培養基中誘導生根。從表3可以看出，誘導生根的最佳培養基為1/2MS+IBA0.10 mg/L。不同培養基處理對生根率影響不大，1/2MS培養基誘導生根效果稍優于MS培養基。加入IBA后更有利于根的發生，當IBA濃度為0.10 mg/L時，生根條數最大，但較高濃度IBA反而會抑制根的萌發。

表3 生根培養結果

2.5 馴化移栽

將煉苗后草莓苗移栽到不同基質，14 d后統計成活率。表4可以看出，不同移栽基質中組培苗成活率差異不明顯，最優移栽基質為草炭∶蛭石=1∶1。移栽2 周后生長達到穩定，平均株高約4.8 cm，根系發達，生長健壯。

表4 不同基質對隋珠草莓苗成活率的影響

3 結論與討論

隋珠草莓組培快繁研究中，外植體選用匍匐莖莖尖，用0.1%的升汞溶液消毒8 min，滅菌效果良好，成活率達86.3%。本試驗中，選用MS培養基，向其添加不同濃度的6-BA、NAA、2,4-D來進行隋珠草莓苗莖尖初代培養、增殖培養的研究。對于不定芽的誘導，最佳培養基是MS+6-BA0.50 mg/L+NAA0.02 mg/L，萌發率高達86.7%。在初代培養階段，以紅顏草莓為材料，鄧淵確定促進草莓萌發的6-BA最適濃度為0.50 mg/L[3]，與本試驗結果相一致。

草莓組培苗的增殖培養階段，受多種植物激素影響，6-BA與NAA的組合促進不定芽增殖的效果要優于6-BA和2,4-D組合。對于隋珠草莓，增殖培養的最適宜培養基為MS+6-BA0.50 mg/L+NAA0.05 mg/L。此外6-BA濃度升高增殖倍數反而會有所下降，在今后的研究中，可探究低濃度6-BA對增殖培養的影響，一方面可節約成本，另一方面有利于叢生芽生長健壯。

生根培養階段，選用了MS與1/2MS比較來研究基礎培養基對生根的影響，結果表明：1/2MS在生根率、生根數上都要稍優于MS培養基。同時適宜濃度的IBA能夠促進根的萌發，較低濃度能夠促進根的發生，高濃度反而抑制生根，隋珠草莓苗生根培養的最佳培養基為1/2MS+IBA0.1 mg/L。該結果與其他報道的草莓品種差異不大，說明各草莓品種對于激素誘導生根的差異較小。

馴化移栽階段，一般需要在煉苗室培育7 d左右，使組培苗逐漸適宜外界環境便于移栽。本研究中選用的移栽基質對成活率的影響差異不明顯，最適宜的移栽基質為草炭∶蛭石=1∶1，成活率高達89.3%。移栽后的管理也比較重要，初期要勤澆水，搭拱棚遮陰，1 周后可噴施營養水，2 周后可補充噴施氮肥，4 周后即可長成商品苗。