香菇種間雜交選育菌絲耐高溫菌株*

常 堃，蔡 婧，李世華，李為民，張九玲，李 軍，肖 艷，劉 杰，田繼成

（十堰市農業科學院，湖北 十堰 442000）

湖北省十堰市香菇（Lentinula edodes）栽培歷史悠久，栽培模式豐富[1]，但無論是春栽模式還是秋栽模式，均存在菌絲的高溫越夏階段。安全越夏已成為香菇栽培成功的重要保障[2]，即便是夏季出菇的反季節栽培模式，在轉潮階段，此時的菌絲恢復階段仍屬于高溫期養菌。為此選育菌絲耐高溫的香菇品種十分必要。

選用十堰本地春栽主栽品種9608、秋栽主栽品種久香4號為雙核親本，以反季節品種申香215為單核親本，利用“布勒現象”衍生而來的雙單雜交技術[3]進行雜交試驗，該雜交技術是一種目的性較強的常規育種手段。香菇的有性生殖方式為異宗結合，利用雙單雜交技術，將具有優良特性的香菇雙核菌絲，對需要改良菌株的單核菌絲進行雙單配對，形成雙核菌絲，從而選育出新的雜交菌株[4]。先對親本菌株進行雜交，再對所得雜交菌株的菌絲進行高溫處理，獲得耐高溫目的雜交菌株后，進行出菇試驗，初步篩選出具有栽培潛力的雜交菌株。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

試驗所用香菇菌種9608、久香4號以及申香215，均保存于湖北省十堰市農業科學院食用菌研究所。

1.2 培養基質

PDA培養基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g，水 1 000 mL。

栽培料：硬雜木屑選用本地栓皮櫟粉碎，顆粒度為10 mm×22 mm×（1～3）mm，含量80%，麩皮19%、石膏1%，含水量60%。

1.3 雙單雜交

采用平板稀釋法，在PDA培養基上獲得申香215菌株的單核孢子，純化培養獲得申香215的單核菌絲[5]。將其與9608和久香4號的雙核菌絲分別進行對峙培養，即于同一PDA試管中，使雙核菌絲位于試管底部，單核菌絲位于試管中部，菌絲塊之間相差4 cm～5 cm，26℃避光培養10 d～15 d后，挑取單核菌絲靠近試管前端的邊緣菌塊進行鏡檢，具有鎖狀聯合者則視為雜交成功[6]，轉接到PDA試管中26℃擴大培養。

1.4 高溫處理

待擴大培養的雜交菌株菌絲萌發并延伸至2 cm左右時，將其置于28℃培養箱培養1 d后，30℃培養1 d，再于32℃培養至菌絲長滿試管。培養箱為電熱恒溫培養箱。

1.5 雜交菌株的篩選

選擇菌絲能夠長滿試管的雜交菌株進行菌種制作，26℃避光培養30 d～40 d，將生長速度過慢或無法生長的雜交菌株淘汰。

1.6 雜交菌株生長速度測定

對篩選出的雜交菌絲使用培養皿進行培養，用打孔器對雜交子進行挑取，獲得的均勻菌塊（直徑0．8 cm）接入PDA培養皿（直徑9 cm）正中央。每3個培養皿一組，置于26℃電熱恒溫培養箱中培養，每天觀察菌絲長勢，測量菌絲長度，計算平均生長速度[7]。

1.7 雜交菌株栽培試驗

于3月初到4月底進行出菇試驗。用15 cm×30 cm×0．05 cm聚乙烯塑料袋裝料（袋料干重220 g），每個菌株接種15袋，設3個重復，即每個重復5袋，接種后培養室25℃避光培養，菌絲滿袋后刺小孔促進轉色，轉色后進入出菇房進行劃口出菇管理，第一潮菇結束，待菌絲恢復對菌袋進行12 h泡水處理，刺激轉潮出菇。

記錄各雜交菌株的出菇溫度（出菇室內上午8點至下午3點內最溫度低至最高溫度）、出菇期（第一潮菇第一個原基形成到第二潮菇最后一個菇采收的時間）、采收期（采收第一個菇到最后一個菇的時間）、單菇重、總重量及生物學效率，對每個雜交菌株子實體隨機取樣，對菌蓋厚度、菌蓋直徑、菌柄長度以及菌柄厚度進行測量。

2 結果與分析

2.1 雙單雜交

將菌株9608和久香4號分別與菌株申香215的60份單核菌絲進行雙單雜交，獲得9X2（9608與申香215雙單雜交）雜交菌株58株，獲得久X2（久香4號與申香215雙單雜交）雜交菌株41株。

2.2 高溫處理

高溫處理后共獲得21株雜交菌株。其中9X2雜交菌株有15株，久X2雜交菌株有6株。

2.3 雜交菌株篩選

制種后淘汰生長過慢及無法正常生長的菌株，共獲得10株雜交菌株。其中9X2雜交菌株有8株，久X2雜交菌株有2株。

2.4 雜交菌株生長速度測定

各雜交菌株的生長速度見表1。

表1 菌絲生長速度Tab．1 Mycelial growth rate

由表1可知，不同雜交菌株的菌絲生長速度各有不同，生長速度范圍為 0．35 cm·d-1～0．60 cm·d-1；其中久X2-31雜交菌株菌絲生長速度最快，雜交菌株9X2-28菌絲生長速度最慢；大部分雜交菌株菌絲的生長速度都在 0．40 cm·d-1以上。

2.5 雜交菌株栽培試驗結果

經過出菇試驗，10個雜交菌株的試驗結果見表2。

表2 雜交菌株菌絲生長性狀Tab．2 Mycelial growth characteristics of hybrid strains

由表2所示，供試雜交菌株第一潮出菇期范圍在15 d～23 d，采收期范圍在5 d～17 d；第二潮出菇期范圍在9 d～23 d，采收期范圍在5 d～13 d，其中雜交菌株久X2-4的出菇期和采收期均較短。供試雜交菌株久X2-4兩潮菇的平均單袋產量以及生物學效率均為最高，雜交菌株9X2-8和久X2-31第二潮均無產量，9X2-5的平均單菇重最低，僅有9．57 g。供試雜交菌株的出菇溫度范圍在8℃～26℃，其中雜交菌株9X2-19、9X2-37、久X2-4均能在26℃的高溫環境下出菇。

考察比較了供試雜交菌株出菇子實體的菌蓋直徑、菌蓋厚度、菌蓋直徑、菌柄長度等性狀，結果見表3。

表3 雜交菌株子實體特征Tab．3 Fruitbody characteristics of hybrids

如表3所示，供試雜交菌株9X2-5子實體的菇形最小，雜交菌株久X2-4、久X2-31、9X2-37的子實體菇形較大，但是雜交菌株久X2-4的菇面較黑，雜交菌株9X2-19的菌柄最短且呈上粗下細的錐子型。

3 小結

生產實際中，菌絲在高溫期生長情況一直是影響栽培成功的關鍵，為此利用高溫處理雜交菌株菌絲，并對所得雜交菌株進行出菇試驗。考慮到十堰地區3月份仍有秋栽香菇和春栽香菇出菇，同時4月份部分反季節香菇開始正式出菇，因此選擇3月初至4月底進行出菇試驗，有利于更好地觀察雜交菌株的特性。

本地春栽香菇平均產量在800 g/袋～1 000 g/袋（17 cm×58 cm×0．06 mm的袋子），生物轉化率在64．6%～86．2%。由于本研究使用小袋劃口出菇的模式，因此大部分雜交菌株第二潮表現都不理想。篩選所得雜交菌株9X2-19的產量較高，在只出兩潮的情況下生物轉化率已達到常規栽培的生物轉化率范圍，同時子實體大部分菌柄呈上粗下細的錐子型，與段木栽培的子實體菇形相似，符合市面上對段木香菇的要求，因此很適合作為段木栽培品種的替代品種進行栽培，擁有一定的市場潛力。雜交菌株久X2-4產量高，出菇呈爆發性出菇（現蕾較為一致），且出菇期較長，適合作為秋栽花菇品種，同時雜交菌株久X2-4具有菌齡較短（菌絲生長快），現蕾較一致的特點，非常符合火鍋店活體采摘香菇品種的需求。雜交菌株9X2-5的子實體菇形非常小，適合作為以加工為油炸風味香菇食品為目的的品種進行栽培。后期進行了雜交菌株9X2-19和久X2-4初步的拮抗試驗，結果表明，雜交菌株9X2-19和久X2-4均與親本產生拮抗，初步表明雜交菌株為不同于親本的菌株。下一步將對雜交菌株久X2-4進行秋栽中間試驗，雜交菌株9X2-19進行春栽及反季節中間試驗。

雜交菌株的菌絲在32℃的高溫下培養時，大部分無法正常生長；菌絲能夠生長的雜交菌株中仍有部分出現無法轉色且無法出菇的現象；還有部分雜交菌株如9X2-28表現出不易轉色，且極易在未轉色處形成畸形菇。因此，從試驗范圍內看，雜交菌株的菌絲是否耐高溫與出菇溫度沒有相關性。