50%呋蟲胺·氯蟲苯甲酰胺懸浮劑 高效液相色譜分析

王昌錦，林炳松，蘇君一，康占海，劉細平，陶 婧，徐 妍

(1.北京宇悅生物科技有限公司，北京 100085；2.河北農業大學，河北保定 200020)

呋蟲胺(dinotefuran)是一種新煙堿類殺蟲劑，其 主要作用于昆蟲煙堿乙酰膽堿受體，影響昆蟲神經傳遞系統使害蟲麻痹，從而發揮殺蟲作用。呋蟲胺主要用于玉米、小麥、水稻、果樹以及蔬菜的飛虱、粉虱、蚜蟲、蝽象、薊馬等害蟲的防治[1-2]。氯蟲苯甲酰胺(chlorantraniliprole)是杜邦公司開發的低毒、高效廣譜的魚尼丁受體殺蟲劑，對鱗翅目昆蟲有良好的控制效果，還能控制鞘翅目象甲科、葉甲科，雙翅目潛蠅科、煙粉虱等多種非鱗翅目害蟲[3-4]。目前呋蟲胺或氯蟲苯甲酰胺質量控制分析檢測方法主要有液相色譜法或液質聯用方法[5-8]，但關于呋蟲胺與氯蟲苯甲酰胺的混配制劑分析方法尚未見公開報道。基于此，本文建立了利用高效液相色譜技術開展了50%呋蟲胺·氯蟲苯甲酰胺懸浮劑的質量分析方法研究，旨在為該產品的質量分析提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司)，具有紫外檢測器和自動進樣器；Agilent色譜工作站：采用島津UV-1800紫外可見分光光度計(島津公司)；GD410DP10L型超聲波清洗機(深圳市光點超聲波設備有限公司)。

1.2 試劑

呋蟲胺標準品，質量分數98.3%(北京宇悅生物科技有限公司提供)；氯蟲苯甲酰胺標準品，質量分數99.0%(北京宇悅生物科技有限公司提供)；50%呋蟲胺·氯蟲苯甲酰胺懸浮劑(北京宇悅生物科技有限公司提供)；甲醇(色譜純)；水：新蒸二次蒸餾水。

1.3 高效液相色譜條件

采用Agilent 1260高效液相色譜儀，具有紫外檢測器和自動進樣器；色譜柱：采用ZORBAX SB C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇+水(體積比70∶30)；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：245 nm；進樣體積：5 μL。采用外標法定量。在該色譜條件下，呋蟲胺和氯蟲苯甲酰胺的保留時間分別約為1.8 min和3.8 min。混合標樣及樣品的典型液相色譜圖見圖1和圖2。

1.4 測定步驟

1.4.1 標準溶液的配制

分別稱取呋蟲胺標準品約0.05 g、氯蟲苯甲酰胺標準品約0.01 g (精確至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻備用。

1.4.2 樣品溶液的配制

稱取 50%呋蟲胺·氯蟲苯甲酰胺懸浮劑試樣約0.12 g (精確至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，超聲溶解后，過0.45 μm有機濾膜，備用。

1.4.3 測定

按上述色譜條件，連續注入數針標樣溶液，待相鄰2針的相對響應值變化小于1.5%時，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進樣測定。

1.4.4 計算

將測得的2針試樣溶液及其前后2針標樣溶液中的呋蟲胺、氯蟲苯甲酰胺峰面積分別進行平均。試樣中各有效成分的質量分數X(%)按下式計算。

式中：A1為標樣溶液中呋蟲胺或氯蟲苯甲酰胺峰面積的平均值，mAU·s；A2為試樣溶液中呋蟲胺或氯蟲苯甲酰胺峰面積的平均值，mAU·s；m1為呋蟲胺或氯蟲苯甲酰胺標樣的質量，g；m2為試樣的質量，g；P為標樣中呋蟲胺或氯蟲苯甲酰胺的質量分數。

2 結果與分析

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 流動相的選擇

以不同比例的甲醇+水、乙腈+水作為流動相，對試樣進行分離檢測，結果表明，選用乙腈和水作為流動相時分離時間長且峰型不對稱，當選用甲醇和水的體積比為70∶30時，峰形對稱，分離效果理想，出峰時間適中，故最終選定流動相為甲醇+水(70∶30，體積比)。

2.1.2 檢測波長的選擇

通過紫外可見分光光度計UV-1800在190～900 nm進行紫外掃描，呋蟲胺在210～270 nm有較大吸收，氯蟲苯甲酰胺在240～260 nm有較大吸收。考慮溶劑、助劑對吸收的影響，以及呋蟲胺、氯蟲苯甲酰胺的峰高，最終選定以245 nm為檢測波長。

2.2 特異性的測定

本試驗方法采用全波長紫外掃描檢測峰純度分析法來鑒別。呋蟲胺最小峰純度相似度為1.000 0，最小峰純度閾值為0.994 6，最小峰純度指數為正值。氯蟲苯甲酰胺最小峰純度相似度為1.000 0，最小峰純度閾值為0.999 9，最小峰純度指數為正值，說明樣品色譜峰中不含有雜質。二者的標樣液相色譜峰與試樣液相色譜峰出峰時間差均在1.0%以內，如圖1和圖2所示。制劑中呋蟲胺和氯蟲苯甲酰胺的峰純度色譜圖如圖5和圖6所示。

2.3 線性相關性測定

按1.4.1節中方法配制不同質量濃度的標樣溶液，在1.3節色譜條件下進樣，每個質量濃度重復進樣2次，求其峰面積平均值。以質量濃度為橫坐標，峰面積值為縱坐標，繪制標準曲線。呋蟲胺的線性方程為y=16 345x-88 702(圖7)，相關系數(R2)為0.999 8。氯蟲苯甲酰胺的線性方程為y=15 612x- 134 932(圖8)，相關系數(R2)為0.999 1。

2.4 精密度測定

選取有代表性的50%呋蟲胺·氯蟲苯甲酰胺懸浮劑試樣，在上述色譜操作條件下平行測定5次，結果見表1。可見，呋蟲胺的標準偏差為0.078，變異系數為0.19%，氯蟲苯甲酰胺的標準偏差為0.094，變異系數為0.93%。

表1 50%呋蟲胺·氯蟲苯甲酰胺懸浮劑精密度測定結果

2.5 準確度測定

采用標準添加法，在已知質量分數的試樣中，加入一定量的呋蟲胺、氯蟲苯甲酰胺標準品，在上述色譜操作條件下，測得2種有效成分的回收率，結果見表2。可見，呋蟲胺的平均回收率為99.94%，氯蟲苯甲酰胺的平均回收率為99.75%。

表2 50%呋蟲胺·氯蟲苯甲酰胺懸浮劑回收率測定結果

2.6 非分析物干擾的試驗

準確度的評價通常包含非分析物質的干擾，因有效成分中的任何干擾物均會導致分析方法出現系統誤差。分析時應同時測定不帶有效成份的空白樣品，或證明其無干擾。通過對溶劑(甲醇)、空白樣品(不含有效成分的助劑)、原藥等按分析方法1.3進行分析，結果表明甲醇、2種原藥及助劑對分析均無干擾，因此使用本文的分析方法未受到非分析物干擾而影響測定。

3 結 論

本文采用HPLC建立了50%呋蟲胺·氯蟲苯甲酰胺懸浮劑中有效成分的質量分析方法，該方法準確度和精密度較高，線性關系良好，操作簡便、快速、準確，適于該產品生產過程的質量檢測與控制。