免疫細胞化學染色技術在胸水病理診斷中的應用

龍爽

【中圖分類號】R446.6 【文獻標識碼】B 【DOI】10.12332/j.issn.2095-6525.2021.15.285

在疾病過程中，當胸膜腔內的液體產生過快或吸收過慢時，就會形成胸膜腔積液，即“胸水”。患者和家屬問：為什么胸水送到病理科，已經出了病理診斷，還要做免疫組化染色協助診斷？為什么免疫組化要檢查6～7個標記物？本文詳細與患者介紹免疫組織化學染色技術在胸水病理診斷中的應用價值。

1 人體正常胸膜腔的解剖學和組織學結構是什么？

人體內肺被胸膜所包繞著，包繞肺的那一層漿膜叫漿膜的臟層，臟層向外延伸到體腔壁形成漿膜的壁層。臟層和壁層互相連接形成一個完整的不與外界相通的封閉腔，即為胸膜腔。

胸膜腔起源于間質細胞胚層，胸膜內面襯以間皮，間皮由單層扁平細胞構成，被其下的結締組織、血管和神經等所支撐。在無疾病狀況時，間皮的臟層和壁層之間被一薄層潤滑液所分隔，以消除運動時兩層之間的摩擦。

2 胸膜超微結構是什么？

在透射電鏡下觀察，可發現間皮細胞由一層連續的單層細胞互相連接而成，中間有縫隙連接，表面有微絨毛向體腔伸展。在間皮細胞兩極有許多泡飲小泡。胸膜腔內潤滑液的流動由間皮細胞調節，掃描電鏡證實間皮細胞表面襯以等長的短微絨毛。正常間皮細胞的微絨毛太短以致在光鏡下無法看到;如果見到長的微絨毛，往往意味正處在疾病過程之中。

3 病理醫師將胸水如何分類以及其組成成分是什么？

引起胸水的原因很多，首要原因是炎癥性疾病，其次是腫瘤。病理醫師則將胸水分為非癌性積液（即良性積液）與癌性滲出液兩種。

良性積液其細胞成分包括團簇狀的間皮細胞、巨噬細胞、紅細胞、淋巴細胞、粒細胞、漿細胞、巨核細胞、其他造血細胞等、其他良性細胞，如阿紹夫細胞、肝細胞、呼吸道來源的細胞、鱗狀細胞、脂肪細胞和橫紋肌細胞等、色素、結晶和其他無機物等等。

一般在滲出液中的惡性腫瘤細胞可以分為三類：一是大細胞或非常大細胞，多見于各種類型轉移癌、惡性黑色素瘤、肉瘤與一些間皮瘤等;二是小細胞，大多數惡性淋巴瘤、許多幼年時期的惡性腫瘤和特殊類型的癌（如胸部的小細胞癌，燕麥細胞癌）屬于這種類型;三是中等大小的細胞，多見于各種乳腺癌、肺癌、胃癌等表現為這種類型。

有時，在滲出液中可以發現兩種腫瘤存在，有研究發現1例男性，有慢性淋巴細胞性白血病和腺癌，推測可能是肺來源的，同時在胸腔滲出液中被發現。

4 不同類型細胞制備法在免疫細胞化學中的應用？

細胞學樣本常用制備方法大致有種：（1）細胞蠟塊的制備;（2）細胞離心制片技術;（3）液基薄片細胞制片技術;（4）直接涂片技術;（5）微孔薄膜濾過技術。

病理技師根據胸水標本的性質，選擇不同的處理方法。總的原則如下圖。

靜置

↓

取液

↓

離心

↓

沉淀物的處理

↓

↓? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ↓

涂片? ? ? ?富集沉淀物，4%中性甲醛液固定

↓? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ↓

↓?   ? ? ? ? ?富集細胞，制備細胞蠟塊

↓? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ↓

常規染色? ? ? ? ? ? ? ? ? 免疫細胞化學染色

5 免疫細胞化學技術是什么？

隨著細胞學和免疫組織化學的發展，免疫細胞化學技術在細胞學領域的應用得以進一步推廣，為細胞學診斷提供了更多的信息，有助于解決細胞學疑難病例的鑒別診斷難題。

（1）免疫組織化學也稱為免疫細胞化學，是基于免疫學的理論和技術，具有特異性強，敏感性高，定位準確、形態與功能相結合等優點。用已知抗體與抗原發生特異性結合，并通過化學反應使標記在結合后的特異性抗體上的顯色劑（如熒光素、酶、金屬離子和核素）顯色，已確定組織細胞內抗原的存在對其進行定位、定性及半定量研究。

（2）免疫細胞化學的操作步驟是復雜的，包括第一抗體、第二抗體等的應用，抗體應用后還要震洗，還要設置相應的對照。它包括直接法、間接法、ABC法及酶聚合物法等。

（3）目前采用的免疫細胞化學方法大致可以分為：細胞培養免疫組化、細胞涂片免疫組化、細胞蠟塊免疫組化三種。前一種方法多用于實驗室，后兩種方法各有優點，目前國內外更多使用細胞蠟塊。

6 實際工作中，免疫細胞化學在胸水中的應用

實際工作中，細胞學病理醫師要正確鑒別腫瘤細胞和反應性間皮細胞。為了提高診斷的準確性，一般選用一組敏感性和特異性較強的抗體聯合用于診斷。一般情況下，CEA、EMA、BRST-3的組合可解決大部分細胞樣本中上皮源細胞的鑒別問題。如果需要鑒別腺癌和間皮瘤，可應用E-ca、CD15、MOC31、Calretinin、CK5/6的組合。在胸水中，常需進行良性間皮細胞、間皮瘤和轉移癌的鑒別，以及判斷胸水中腫瘤細胞的原發部位。在胸水中，乳腺癌和肺癌最多見，在腹水中，卵巢癌和消化道癌較多見。

7 常用于胸水鑒別診斷的抗體分類

常用于胸水鑒別診斷的抗體有以下兩類：

第一類是上皮標記物，包括EMA（有助于腫瘤細胞和反應性間皮的鑒別，但不能單獨應用此抗體鑒別癌和間皮瘤。）、CEA（在多種癌細胞中陽性表達，是區分癌和間皮瘤的良好標記物。）、上皮細胞粘附分子（文獻報道中，該抗體對于腺癌的敏感性在60%～100%之間，而在間皮瘤中就有4%的弱表達。）、CD15（是粒細胞相關抗原，最初認為是霍奇金淋巴瘤中R-S信保的特異性標志，后來發現其在非霍奇金淋巴瘤和多種腺癌中均表達。）、MOC31、BRST-3、E-ca、TTF-1、CA19-9、CA15-3等。

第二類是間皮標記物，包括Calretinin（是一種神經特異性鈣結合蛋白，是間皮細胞和間皮瘤較為敏感的標記，可表達于良、惡性間皮細胞;在腺癌細胞中不表達或僅表達胞漿著色。）、HBME-1（是間皮細胞抗體，一般僅表達間皮細胞，而不存在于其他正常細胞中。）、CK5/6（是一種高分子量細胞角蛋白，有研究表明在間皮瘤中的表達為90%～100%，在腺癌中的表達是0%～26%。）、WT-1、D2-40等。

通過對胸水細胞的病理診斷，可以協助臨床醫師明確診斷、設計治療方案以及預測療效等等，有利于患者獲得最佳的治療。