長鏈非編碼RNA肺腺癌轉移相關轉錄因子1表達水平與顱內動脈瘤血管內治療后復發的關系研究

王曉鋒，張立新，張曉樂

顱內動脈瘤嚴重威脅人們生命安全，血管內栓塞治療已成為主要治療方式之一，但長期隨訪發現需再次治療患者數量居高不下［1-3］。有研究報道部分栓塞的動脈瘤、大型或巨大型動脈瘤患者在接受治療17個月內復發率高達30%［4］。探究預示復發的生物標志物對于顱內動脈瘤篩查和治療均具有重要意義，但目前臨床缺乏有效的生物標志物。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一種由200個及以上核苷酸組成的RNA，廣泛參與機體病理生理活動［5］。目前有多種lncRNA被證實參與了顱內動脈瘤發生發展過程，如lncRNA ENST00000607042、lncRNA TCONS_00000200和lncRNA肺腺癌轉移相關轉錄因子（met ast asi s-associated lung adenocarcinoma transcript，MALAT）1等［6-8］。有研究顯示lncRNA MALAT1與微小RNA（miRNA）-143競爭性結合促進血管內皮細胞生長因子表達，從而誘導顱內動脈瘤發生［8］。本研究探討lncRNA MALAT1表達與顱內動脈瘤復發的關系。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2016年3月至2018年9月在杭州市第九人民醫院就診的168例顱內動脈瘤患者作為研究對象。納入標準：①DSA或CTA檢查診斷為顱內動脈瘤；②動脈瘤破裂或未破裂接受血管內栓塞治療；③凝血功能正常；④簽署手術知情同意書。排除標準：①伴煙霧病、夾層動脈瘤等疾病；②既往有腦外傷、腦卒中史；③年齡＞70歲；④接受開顱夾閉術治療；⑤隨訪失聯。168例患者中男61例，女107例；年齡36～63（50.51±5.67）歲；有吸煙史33例，糖尿病史35例，高血壓史63例；動脈瘤位于前交通動脈56例，大腦中動脈51例，后交通動脈32例，后循環動脈29例；小型動脈瘤（瘤體長徑＜5 mm）45例，中型動脈瘤（瘤體長徑5～10 mm）55例，大型動脈瘤（瘤體長徑＞10 mm）68例；動脈瘤寬頸（瘤體頸寬≥4 mm，或頸體比＞0.5）62例，窄頸（瘤體頸寬＜4 mm且頸體比≤0.5）106例；動脈瘤破裂78例，未破裂90例；術后即刻DSA顯影的動脈瘤栓塞程度（Raymond分級）Ⅰ級（完全栓塞）110例，Ⅱ級（瘤頸顯影）42例，Ⅲ級（瘤體顯影）16例。采用復診或電話方式隨訪，獲取血管內栓塞治療2年內復發情況。本研究將瘤體顯影較之前擴大或術后再次出血定義為復發。根據血管內栓塞治療2年內顱內動脈瘤是否復發，將患者分為復發組（n=31）和未復發組（n=137）。本研究已獲杭州市第九人民醫院醫學倫理委員會審查批準。

1.2 lncRNA MALAT1表達水平檢測

采用實時熒光定量聚合酶鏈反應（PCR）法［9］檢測lncRNA MALAT1表達水平。抽取顱內動脈瘤患者血管內栓塞術前和術后24 h內空腹外周靜脈血10 mL，離心后取上清液，置于－80℃冰箱中保存，待驗。TRIzol試劑（日本TaKaRa公司）提取血漿中總RNA，反轉錄試劑盒（日本TaKaRa公司）將RNA反轉錄成cDNA，PCR儀（山東博科科學儀器公司）擴增cDNA，擴增條件為93℃5 min，93℃15 s，62℃30 s，70℃30 s，35個循環。引物由上海吉瑪制藥技術公司設計，lncRNA MALAT1序列F：5′-GCAG GGAGAATTGCGTCATT-3′，R：5′-TTCTTCGCAG AATTGCGTCATT-3′；內參3-磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）序列F：5′-TCCCATCACCATCTTCCA-3′，R：5′-CATCACGCCACAGTTTTCC-3′。選擇10例與顱內動脈瘤患者年齡、性別匹配的健康體檢者血漿lncRNA MALAT1平均值作為校正對照。用2-△△Ct計算lncRNA MALAT1表達水平。

1.3 統計學方法

采用SPSS 25.0軟件進行統計學分析。符合正態分布的計量資料以±s表示，兩組間比較用獨立樣本t檢驗，組內比較用配對樣本t檢驗；不符合正態分布的計量資料以［M（QR）］表示，兩組間比較用Mann-Whitney U檢驗。計數資料以例（n）表示，組間比較用χ2檢驗。受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）評價各指標診斷效能，并計算最佳截斷點。logistic回歸分析顱內動脈瘤患者血管內栓塞治療后復發的相關因素。限制性立方樣條擬合logistic回歸分析血管內栓塞治療后lncRNA MALAT1表達水平與復發的劑量-效應關系。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

兩組年齡、性別、吸煙史、糖尿病史、高血壓史、動脈瘤位置和動脈瘤大小差異均無統計學意義（P＞0.05），復發組動脈瘤寬頸占比、動脈瘤破裂占比、Raymond分級Ⅱ/Ⅲ級占比均高于未復發組，差異均有統計學意義（P＜0.05）；對受試者進行1∶1傾向性評分匹配（最鄰近原則）后，兩組年齡、性別、吸煙史、糖尿病史、高血壓史、動脈瘤位置、動脈瘤大小、動脈瘤頸、動脈瘤破裂和Raymond分級差異均無統計學意義（P＞0.05），見表1。復發組術前和術后lncRNA MALAT1表達水平均高于未復發組，差異均有統計學意義（P＜0.05）；1∶1傾向性評分匹配后，復發組術后lncRNA MALAT1表達水平高于未復發組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。術前lncRNA MALAT1評價顱內動脈瘤患者血管內栓塞治療后復發的ROC曲線下面積（AUC）、最佳截斷點、靈敏度、特異度分別為0.693（95%CI：0.607～0.780）、2.69、83.87%、59.12%，術后lncRNA MALAT1評價復發的AUC、最佳截斷點、靈敏度、特異度分別為0.898（95%CI：0.845～0.950）、2.06、74.19%、89.78%，▲lncRNA MALAT1評價復發的AUC、最佳截斷點、靈敏度、特異度分別為0.520（95%CI：0.418～0.622）、1.11、87.10%、28.47%，術后lncRNA MALAT1評價復發的AUC高于術前lncRNA MALAT1和▲lncRNA MALAT1，差異均有統計學意義（Z=3.973、7.854，P＜0.001），見圖1。

圖1 lncRNA MALAT1評價顱內動脈瘤治療后復發的ROC曲線

表1 兩組患者臨床資料

表2 兩組患者lncRNA MALAT1表達水平比較

將顱內動脈瘤患者血管內栓塞治療后是否復發作為因變量，動脈瘤大小、動脈瘤頸、動脈瘤破裂、Raymond分級和術后lncRNA MALAT1作為自變量，納入logistic回歸分析，結果顯示動脈瘤頸、Raymond分級、術后lncRNA MALAT1均為顱內動脈瘤患者血管內栓塞治療后復發的獨立風險因素（P＜0.05），見表3。限制性立方樣條擬合logistic回歸法分析顱內動脈瘤患者血管內栓塞治療后lncRNA MALAT1表達水平與其復發的劑量-效應關系，節點個數為4時Akaike信息準則（AIC）值是102.137（呈最小），分析結果顯示術后lncRNA MALAT1與顱內動脈瘤患者血管內栓塞治療后復發有關（χ2=15.95，P=0.001），呈線性關系（非線性檢驗χ2=1.54，P=0.463）；將術后lncRNA MALAT1評價顱內動脈瘤患者血管內栓塞治療后復發的最佳截斷點作為參考點，術后lncRNA MALAT1＜2.16時復發風險低，＞2.16時復發風險高，見圖2。

圖2 術后lncRNA MALAT1與顱內動脈瘤患者血管內栓塞治療后復發的劑量-效應關系圖

表3 顱內動脈瘤患者治療后復發logistic回歸分析

3 討論

目前lncRNA MALAT1已被報道參與多種疾病如直腸癌［9］、下咽鱗狀細胞癌［10］、阿爾茨海默病［11］和顱內動脈瘤［8］等發生發展過程。Gao等［8］研究證實lncRNA MALAT1在顱內動脈瘤組織中高表達，且可通過競爭性結合miRNA-143上調血管內皮細胞生長因子水平，從而誘導顱內動脈瘤發生。基于該研究，推測lncRNA MALAT1與顱內動脈瘤血管內栓塞治療后復發有關，其表達水平或可預示顱內動脈瘤復發。本研究比較了復發組和未復發組術前和術后lncRNA MALAT1表達水平，結果顯示復發組術前和術后lncRNA MALAT1表達水平均高于未復發組，1∶1傾向性評分匹配后復發組術后lncRNA MALAT1表達水平高于未復發組；結果提示lncRNA MALAT1與顱內動脈瘤血管內栓塞治療后復發有關，或可成為預示顱內動脈瘤復發的生物標志物。

Nakamura等［12］研究證實顱內動脈瘤直徑＞10 mm是其復發的危險因素。動脈瘤瘤體大，難以實現致密栓塞，因此栓塞后復發率高。顱內動脈瘤頸寬＞4 mm常需要再次治療［13］。動脈瘤寬頸所承受的血流沖擊力大，隨時間進展可使瘤體內彈簧圈被壓縮，致密栓塞率降低，最終導致復發。動脈瘤完全栓塞患者復發率顯著低于次完全栓塞患者［14］。既往研究分析影響顱內動脈瘤血管內栓塞治療后復發的因素，多認為與動脈瘤頸、動脈瘤大小和Raymond分級有關［15-17］。還有研究證實顱內動脈瘤初始狀態與復發有關［18］，破裂動脈瘤接受血管內栓塞治療患者中首次栓塞后有高達17.4%需再次治療［19］。為避免環扎因素影響分析結果，本研究通過logistic回歸分析顱內動脈瘤患者栓塞治療后復發的相關因素，結果顯示動脈瘤頸、Raymond分級是栓塞治療后復發的風險因素，而動脈瘤大小、動脈瘤破裂均與復發無關，推測其原因與納入研究分析的樣本量小有關，后續還需開展多中心大樣本研究予以驗證。

本研究中logistic回歸分析結果還顯示，術后lncRNA MALAT1是顱內動脈瘤患者接受血管內栓塞治療后復發的獨立危險因素；限制性立方樣條擬合logistic回歸分析結果顯示，術后lncRNA MALAT1與栓塞治療后復發呈線性關系，隨其表達水平升高，復發風險亦隨之升高。推測導致上述結果的原因是lncRNA MALAT1表達水平升高，血管內皮生長因子水平亦隨之升高，進而誘發動脈瘤體增大，瘤體內彈簧圈不足以達到致密栓塞，致使動脈瘤復發。

本研究尚存在一定不足，一是僅檢測術前和術后2個時點lncRNA MALAT1表達水平，尚不能確定術后lncRNA MALAT1是評價顱內動脈瘤患者血管內栓塞治療后復發的最佳時點；二是納入研究分析的樣本量較小，使統計分析結果與已報道文獻結果存在一定出入。后續將針對上述不足再次開展研究，以充實本研究結論。

綜上所述，顱內動脈瘤患者血管內栓塞治療后lncRNA MALAT1表達水平降低。術后低lncRNA MALAT1提示顱內動脈瘤患者血管內栓塞治療后復發風險低。