高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留量的優(yōu)化分析

廣東省廣州市番禺區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測所 廣東廣州 511450

1 優(yōu)化高校液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測水產(chǎn)品孔雀石綠的實(shí)驗材料及方法

1.1 實(shí)驗材料、試劑、儀器設(shè)施

本次實(shí)驗所用的乙腈、甲醇、甲酸、色譜純均由Honeywell 公司提供，而國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司則是負(fù)責(zé)提供氨水、無水乙酸銨、分析純等，此外雅水處理技術(shù)有效公司負(fù)責(zé)提供超純水、超純水機(jī)。實(shí)驗選擇的羅非魚、鯽魚、草魚及鱖花魚全部來自當(dāng)?shù)氐霓r(nóng)貿(mào)市場及超市，并且是通過隨機(jī)抽樣而來。同時，實(shí)驗過程用到的標(biāo)準(zhǔn)孔雀石綠、隱性孔雀石綠等全部都得德國的Dr.Ehrenstorfer公司所提供。實(shí)驗中所用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測儀器由沃特公司提供，同時，其他用到的XFH 型均質(zhì)器、3-30K 型離心機(jī)、DC 型氮吹儀器皆選擇了國內(nèi)外知名企業(yè)的產(chǎn)品。

1.2 溶液配制

實(shí)驗所用的5mmol/L 乙酸銨溶液制備過程如下：在1000mL的水中加入0.3850g 的無水乙酸銨，并借助冰乙酸將完全溶解后的溶液PH 數(shù)值調(diào)整到4.5，讓其通過0.2μm 的濾膜。工作溶液的配置過程如下：使用天平準(zhǔn)確稱量孔雀石綠、隱色孔雀石綠，通過使用乙腈將之溶解之后配置成為500μg/mL 的母液，并在經(jīng)過逐級稀釋以及使用乙腈進(jìn)行定熔之后，將之制作成混合外標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，其濃度為100μg/L，隨后使用內(nèi)標(biāo)物D5 孔雀石綠及D6 隱色孔雀石綠，配置成混合標(biāo)準(zhǔn)液為100μg/L 的工作溶液，將之全部放置在-18℃避光條件下進(jìn)行保存。

1.3 樣品處理的優(yōu)化

傳統(tǒng)的樣品處理步驟如下：以GB/T19857-2005 為根據(jù)，選擇3 份陰性已知狀態(tài)下的生鮮羅非魚作為樣品并進(jìn)行加標(biāo)處理，具體孔雀石綠及隱色孔雀石綠溶液加標(biāo)數(shù)量為2.5μg/kg 和5.0μg/kg。在此之后，嚴(yán)格遵循GB/T19857-2005 標(biāo)準(zhǔn)下的針對鮮活水產(chǎn)品及加工水產(chǎn)品的處理方式要求開展檢測。經(jīng)過優(yōu)化處理之后的實(shí)驗過程步驟如下：在50mL 的離心管中加入5.0g 的勻漿樣品，并將之前制定的D5 孔雀石綠及D6 隱色孔雀石綠混合內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液選取一定數(shù)量加入其中，確保兩種工作溶液的測定最終含量結(jié)果為2.00μg/kg。在此之后，將20ml 的乙腈及5g 酸性氧化鋁物質(zhì)，隨后使用多管漩渦混合儀器，以2500r/min 的速度處理5 分鐘，在全面提取物質(zhì)之后將其中的雜質(zhì)有效清除。在此之后，以8000r/min 的速度處理5 分鐘，并在15ml 的離心管中加入混合儀器中處理完成的上清液4ml，之后將之放置在45℃的水浴環(huán)境下使用氮吹儀器進(jìn)行處理，之后使用1ml 的乙酸銨-乙腈定容液進(jìn)行定容處理，使用多管漩渦混合儀器，以2000r/min 的速度處理4 分鐘，并在通過0.22μm 濾膜之后，準(zhǔn)備進(jìn)行檢測。

1.4 氧化鋁實(shí)驗

在這一步操作中，通過使用優(yōu)化之后的實(shí)驗樣品前處理方法，使用酸性、中性及堿性的氧化鋁三種物質(zhì)開展雜質(zhì)去除凈化對比實(shí)驗，添加量均維持在5g 的水平，且每一種實(shí)驗物質(zhì)設(shè)置6 個平行樣品。除此之外，需要分別使用2g、3g、4g、5g、6g 添加量的酸性氧化鋁開展雜質(zhì)去除凈化對比實(shí)驗。同時，在具體的實(shí)驗操作中，全部使用孔雀石綠及隱色孔雀石綠的實(shí)際加標(biāo)回收率衡量不同性質(zhì)氧化鋁添加量條件下的回收率數(shù)據(jù)影響，且二者的實(shí)際加標(biāo)濃度維持在2.0μg/kg 水平上。

在此之后，使用經(jīng)過優(yōu)化的實(shí)驗樣品前處理方式針對尚未檢測出孔雀石綠及隱色孔雀石綠的羅非魚樣品處理為定熔液，并向其中加入之前制備的混合外標(biāo)工作溶液，確保標(biāo)準(zhǔn)工作曲線外標(biāo)濃度數(shù)值分為維持在0.5、1.0、2.0、5.9、6.0、10.010.0μg/L 水平上。同時，將之前制備的混合內(nèi)標(biāo)工作溶液加入其中，借此形成一個內(nèi)標(biāo)濃度為2.0μg/L 的標(biāo)準(zhǔn)性質(zhì)工作曲線。

將濃度水平100μg/L 的混合外標(biāo)工作溶液分別加入25、75、125μL 到陰性已知的羅非魚肉實(shí)驗樣品中，將之放置在4℃的環(huán)境條件下冷藏過夜之后，使用前文優(yōu)化之后的處理方式進(jìn)行檢測，并將回收率及精密度數(shù)據(jù)進(jìn)行計算。

2 結(jié)果分析

2.1 優(yōu)化之前的檢測結(jié)果

根據(jù)本次實(shí)驗結(jié)果表明，以GB/T19857-2005 為依據(jù)的測定生鮮水產(chǎn)品及加工水產(chǎn)品孔雀石綠方式進(jìn)行檢測，回收率數(shù)據(jù)基本維持在70%-120%的基本要求水平上，但多次檢測結(jié)果的穩(wěn)定性較差，不具備較為優(yōu)秀的重復(fù)性，并且耗費(fèi)的檢驗試劑數(shù)量及前處理工作時間較多。

2.2 優(yōu)化之后的回收率及精密度結(jié)果

分別將濃度為100μg/L 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液以0.025、0.075、0.125ml 的數(shù)量加入到5g 的陰性已知羅非魚產(chǎn)品樣品中，隨后以優(yōu)化之后的方式開展檢測，孔雀石綠的回收率及精密度結(jié)果分別為102.4%、103.5%、104.4%以及2.3%、10.4%、1.7%，而隱色孔雀石綠的回收率及精密度結(jié)果為91.1%、95.3%、91.6%及4.1%、2.7%、1.2%。

3 結(jié)語

傳統(tǒng)的水產(chǎn)品孔雀石綠檢測方式，在回收率數(shù)據(jù)上較為不穩(wěn)定，且樣品前處理時間過長。經(jīng)過優(yōu)化之后的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法孔雀石綠檢測方式，經(jīng)過試驗后發(fā)現(xiàn)其回收率較為穩(wěn)定且結(jié)果精密度較高，值得推廣使用。