透明質酸分析檢測

1962年 含量估算

一種改良的糖醛酸咔唑反應

TBITTER.H.M.MUIR

摘要：糖醛酸與咔唑的反應是估算色譜餾分中糖醛酸的最令人滿意的方法，但需要2小時才能完全顯色，而且對于某些化合物，顏色會被部分鹽抑制。顏色不穩定，對過熱或水稀釋較為敏感，試劑或樣品中的雜質會對其產生干擾。

與Aminoff、Morgan和Watkins測定己糖胺的發現一致，Gregory確定硼酸根離子類似地增加了糖醛酸咔唑反應的顯色率，而在5-甲基間苯二酚-硫酸反應中，它產生了一種立即出現的顏色。

本發明在濃硫酸中使用硼酸鹽進行改性既快速又定量，并具有以下優點：（a）靈敏度進一步增加，超過Gregory記錄的靈敏度（b）立即出現顏色，（c）顯著增加顏色的穩定性，（d）更好的重現性，以及（e）減少氯化物和氧化劑的干擾。其中一些結果的初步報告已經給出。

結論：描述了在硼酸鹽存在下對糖醛酸的Dische咔唑反應的改進。該方法的優點是：

（1）靈敏度提高了大約兩倍。OD是濃度在4到40 pg/ml之間的線性函數。

（2）最大顏色立即顯現。

（3）顏色穩定至少16小時。

（4）有更高的重現性和減少氯離子和氧化劑的干擾。

現已發現通過比較氯化物對兩種程序中顏色產量的影響，可以區分肝素、肝素衍生物和其他結締組織多糖苷酸。

文獻來源：T.BITTER，H.M.MUIR.A Modified Uranic Acid Carbazole Reaction[J].ANALYTICAL BIOCHEMISTRY，1962，4：330-334.

2011年 相對分子質量測試

透明質酸的黏度及相對分子質量

Shimada E，Matsumura G

摘要：用沉降平衡法確定低相對分子質量（Mr=1×104～7.2×104）及高相對分子質量（Mr=3.1×105～1.5×106）透明質酸（HA）的特性黏度（[η]）和Mr。兩種HA，其[η]對Mr的雙對數圖顯示出不同的線性。低Mr的HA，[η]=3.0×10-6×Mr 1.20，對高Mr的HA來說，[η]=5.7×10-4×Mr 0.76。兩線交叉點的HA Mr大約為1.5×105。Mr小于2.1×104的HA，其流變性（比濃黏度）與濃度無關;而大于5.7×104的HA，其流變性（比濃黏度）隨濃度的增大而增加。

結論：由方程計算得到的[η]值與繪圖法得到的[η]值比較，偏差最多±4%，這表明該方程可用于圖形法的核對以及通過單一濃度的黏度數據來計算[η]值。然而，對于U-Ⅲ和U-Ⅳ洗脫片段來說，[η]值仍需使用繪圖法來確定。

log[η]對logMr作圖，S型及U型HA在Mr1.5×105處相交，此結果與Cleland的數據一致。他們解釋為短鏈HA的非高斯行為。這也可以說明，k值較低時，k值的變化反映了聚合物鏈的構象變化。Cleland提出，不同糖胺聚糖在Mr較低時，都具有類似的流體力學特性。事實上，本次研究中，得到的低分子HA的特性黏度方程[η]=3.0×10-6×Mr1.20（Mr=1×104～7.2×104）與Wadteson研究硫酸軟骨素時得到的方程[η]=5.0×10-6×Mr1.4（Mr=2.4×103～3.6×104）吻合。

如果k與聚合物的形態以及聚合物鏈的柔性有關，那么本研究中得到的黏度數據表明，當HA的Mr在2×104～6×104，HA鏈的柔性急劇增加，當Mr達到105～2×105時，HA鏈的柔性最大，呈高斯卷曲的構象。

明確黏度方程中的常數k、k”的含義，對闡明糖胺聚糖的構象與Mr之間的關系有重要意義。

文獻來源：Shimada E，Matsumura G.透明質酸的黏度及相對分子質量[J].食品與藥品，2011（07）：301-303