雅培Alinity i全自動化學發光免疫分析儀檢測乙肝表面抗原及乙肝表面抗體的性能評價

楊 帆，張怡青，顧 暢，王 蘭

（東部戰區總醫院秦淮醫療區檢驗科，南京 210002）

0 引言

乙型肝炎病毒（HBV）感染一直是困擾中國乃至全球的世界公共衛生問題，雖然我國人群乙肝表面抗原（HBsAg）陽性率近年來已經下降至6%左右，卻仍然是世界上感染HBV人群數量最多的國家[1-2]。作為傳統的HBV血清學標志物，乙肝兩對半一直是臨床篩查疾病、反映疾病進展及分期的主要指標[3]。

作為雅培公司的新一代體外診斷產品，Alinity ci生化、免疫及整合系統于2018年3月開始在中國市場投入使用。目前國內尚未有對Alinity i全自動化學發光免疫分析儀（以下簡稱“Alinity i化學發光免疫分析儀”）基于傳染病血清標志物相關性能驗證的文獻報道。本文對Alinity i化學發光免疫分析儀對于乙肝兩對半檢測的2個定量項目HBsAg及乙肝表面抗體（HBsAb）的檢測性能進行評價如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2020年8—9月我院傳染科住院患者及體檢健康者新鮮血清標本。其中HBsAg定量結果在0．05～250 IU/mL 的陽性標本 25 例，HBsAg定量結果在 0～＜0．05 IU/mL 的陰性標本 25 例，HBsAb 定量結果在10～1000 mIU/mL的陽性標本25例，HBsAb定量結果在0～＜10 mIU/mL的陰性標本25例，經稀釋測定確定的極高濃度HBsAg及HBsAb各1例，體檢健康者血清標本20例（男10例、女10例，年齡18～69歲）。所有標本在檢測前均于-20℃保存。

1.2 儀器與試劑

美國雅培公司Alinity i化學發光免疫分析儀（出廠編號：Ai03097）及配套試劑（HBsAg，批號：12009FN01；HBsAb，批號：07494FN01），雅培 Architect i2000全自動化學發光分析儀（以下簡稱“Architect i2000 化學發光分析儀”）（機身編號：ISR51159）及其配套試劑（HBsAg，批號：08447FN01；HBsAb，批號：08455FN01）；質控品由北京康徹思坦生物公司提供，包括 HBsAg低值質控品（0．2 IU/mL）（批號：201911007），HBsAg高值質控品（2 IU/mL）（批號：201910003），HBsAb低值質控品（10 mIU/mL）（批號：202009003），HBsAb高值質控品（30 mIU/mL）（批號：201910005）；衛生部臨床檢驗中心下發的2021年度室間質評標準品 202111、202112、202113、202114、202115。

1.3 儀器性能驗證

1.3.1 精密度驗證

1.3.1.1 批間精密度

使用高、低2個濃度的質控品，每個濃度每天重復檢測4次，連續檢測5 d，收集實驗數據，計算20次檢測結果的算術平均值（）和標準差（s）以及批間變異系數（coefficient of variation，CV）。CV計算公式如下：CV=s/×100%。判斷標準：批間 CV＜15%則為驗證通過。

1.3.1.2 批內精密度

將高、低2個濃度的質控品按常規方法連續檢測20次，計算20次檢測結果的算術平均值（）和標準差（s）以及批內 CV。CV 計算公式如下：CV=s/×100%。判斷標準：批內CV＜10%為驗證通過。

1.3.2 線性范圍驗證

Alinity i化學發光免疫分析儀試劑說明書所展示的線性范圍 HBsAg 為 0．05～250 IU/mL，HBsAb 為2．0～1000 mIU/mL。各選擇 1份 HBsAg和HBsAb濃度接近試劑檢測范圍下限的患者低濃度血清標本以及試劑檢測范圍上限往下10%的患者高濃度血清標本，將患者低濃度血清（L）標本與患者高濃度血清（H）標本按比例關系倍比稀釋成下列血清濃度（5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H）。將各濃度血清樣本在Alinity i化學發光免疫分析儀上進行檢測，每個樣本重復測定3次，計算平均值。將預期值與實測值進行分析，采用Excel軟件，以預期濃度值為橫坐標、實際測得的濃度值均值為縱坐標做線性回歸圖，計算回歸方程y=ax+b及其相關系數r。判斷標準：相關系數 r2≥0．95，回歸方程斜率 a 在 0．95～1．05 范圍內則驗證通過。

1.3.3 檢出限驗證

將HBsAg和HBsAb的定值質控品分別稀釋到試劑檢測范圍下限的濃度，HBsAg為0．05 IU/mL，HBsAb為2．0 mIU/mL，在不同批內對該濃度樣本進行測定，每天檢測4次，連續檢測5 d，對得到的20次檢測結果計算和s以及批內CV。判斷標準：CV＜10%為驗證通過。

1.3.4 功能靈敏度驗證

分別用雅培HBsAg和HBsAb的專用稀釋液將 HBsAg的 0．2 IU/mL濃度質控品及 HBsAb的10 mIU/mL濃度質控品按梯度倍比稀釋成5個濃度，要求最低濃度低于試劑線性范圍的下限值。每個濃度重復測試20次，計算、s以及CV值，選取CV值最接近20%的稀釋濃度作為功能靈敏度。

1.3.5 攜帶污染率驗證

從患者和體檢健康者血清中挑選HBsAg及HBsAb的極高濃度標本（H）和低濃度標本（L）各1份，分別將極高濃度及低濃度標本混勻分成3份，按照極高濃度樣本H1、極高濃度樣本H2、極高濃度樣本H3、低濃度樣本L1、低濃度樣本L2、低濃度樣本L3的順序連續測定，收集實驗數據。極高濃度樣本由于超過試劑的線性范圍而采用稀釋推算法獲得，稀釋倍數就是推算換算的比例系數。最后按照公式攜帶污染率=（L1－L3）/（H3－L3）×100%計算攜帶污染率。判斷標準：攜帶污染率＜1．0%則驗證通過。

1.3.6 正確度驗證

使用Alinity i化學發光免疫分析儀檢測2021年度衛生部臨床檢驗中心感染性血清學標志物的室間質評樣本來判定與其他實驗室檢測結果的一致性。

1.3.7 儀器比對驗證

分別選取40例新鮮血清標本（其中陰性20例、陽性20例），用Alinity i化學發光免疫分析儀檢測HBsAg和HBsAb，再用Architect i2000化學發光分析儀進行測試，得出2組測定值。使用Excel軟件，以Architect i2000化學發光分析儀檢測的結果為橫坐標、Alinity i化學發光免疫分析儀檢測的結果為縱坐標做線性回歸圖，計算回歸方程y=ax+b及其相關系數r。判斷標準：相關系數r2≥0．95，回歸方程斜率a在 0．95～1．05 范圍內則驗證驗證通過。

1.3.8 正常參考區間驗證

收集20份不同年齡段的體檢健康者的血清標本，其中男、女各10份，排除HBsAb陽性標本，使用Alinity i化學發光免疫分析儀同步檢測HBsAg及HBsAb。判斷標準：95%的檢測結果在參考區間范圍內為驗證通過。

2 結果

2.1 精密度驗證結果

HBsAg低、高濃度的批內精密度為3．76%和1．16%，批間精密度為 6．72%和 3．89%；HBsAb 低、高濃度的批內精密度為3．81%和3．28%，批間精密度為 6．42%和 3．78%，驗證通過。詳見表1、2。

表2 HBsAb批內、批間精密度驗證結果

2.2 線性范圍驗證結果

HBsAg 線性回歸方程為 y=0．9881x+3．9337，r2=0．9958；HBsAb 線性回歸方程為 y=1．0244x+11．7530，r2=0．9950，相關系數及回歸方程斜率均在驗證范圍內（如圖1所示）。

圖1 HBsAg及HBsAb線性范圍回歸曲線

2.3 檢出限驗證結果

將HBsAg及HBsAb的定值質控品稀釋到檢出限濃度后檢測的均值分別為0．0530 IU/mL及2．0755 mIU/mL，CV 分別為 8．87%和 7．89%，驗證通過。詳見表3。

表3 HBsAg及HBsAb的檢出限驗證結果

2.4 功能靈敏度驗證結果

根據檢測結果得出HBsAg為0．025 IU/mL以及HBsAb為0．625 mIU/mL時，該濃度的CV值是最接近20%的，即為功能靈敏度，且都低于試劑線性范圍的下限。詳見表4。

表4 HBsAg及HBsAb的功能靈敏度驗證結果

2.5 攜帶污染率驗證結果

通過公式計算，HBsAg及HBsAb的攜帶污染率皆為0，符合驗證要求。詳見表5。

表5 HBsAg及HBsAb的攜帶污染率驗證結果

2.6 正確度驗證結果

將2021年度衛生部臨床檢驗中心感染性血清學標志物室間質評樣本用Alinity i化學發光免疫分析儀檢測，與室間質評回報結果一致。詳見表6。

表6 HBsAg及HBsAb的正確度驗證結果

2.7 儀器比對驗證結果

Alinity i化學發光免疫分析儀與Architect i2000化學發光分析儀檢測HBsAg結果的相關線性方程為 y=0．9568x-0．3306，r2=0．9982；HBsAb 線性方程為 y=1．0355x+0．1148，r2=0．9939。均驗證通過（如圖2所示）。

圖2 HBsAg及HBsAb儀器比對線性相關曲線

2.8 參考區間驗證結果

檢測的20例體檢健康者HBsAg均小于0．05 IU/mL，HBsAb 均小于 10 mIU/mL，皆在參考區間范圍之內，驗證通過。

3 討論

隨著高新檢測技術、互聯網信息技術的快速發展，醫學檢驗技術獲得了巨大的發展機遇，而在現代“精準醫學”的大背景下，傳染性疾病的精確診斷技術也在不斷增強[4]。雅培Architect i2000化學發光分析儀是臨床檢驗實驗室常用的檢測平臺，由于性能穩定且測定準確通常被用作其他品牌儀器的方法學比對儀器[5-6]。雅培Alinity i化學發光免疫分析儀作為新一代的化學發光免疫分析儀延續了雅培Architect i2000化學發光分析儀高靈敏性和高特異性的微粒子化學發光免疫技術[5-7]，在檢測HBsAg時對于多基因型以及突變體的檢測能力具有明顯優勢，能夠有效降低漏檢率[8]，因此雅培化學發光免疫分析儀一直是歐洲肝病學會（European Association for the Study of the Liver，EASL）、美國肝病學會（American Association for the Study of Liver Diseases，AASLD）以及亞太肝病學會（Asian Pacific Association for the Study of the Liver，APASL）指南明確提出并認可的檢測儀器[9-11]。相比臨床檢驗實驗室常用的雅培Architect i2000化學發光分析儀，Alinity i化學發光免疫分析儀整體占用空間更小，能夠在更小單位面積內實現更多的測試量。該儀器可以最多4臺聯機集成，擴展性更強；具備多種流水線軌道選項，靈活性更高，更加適合實驗室的長期規劃；可加載試劑盤容量變大，試劑耗材能夠隨時加載并不間斷進行測試，更具高效性；試劑耗材能明顯通過顏色區分，一鍵急診功能則明顯縮短了急診樣本的周轉時間，更加方便了檢驗人員的日常操作；通過互聯網可將報警等信息直接發送到雅培診斷遠程中心，維修工程師可在線了解儀器情況，及時對儀器的狀態問題采取措施，更具人性化。

本研究主要對雅培Alinity i化學發光免疫分析儀關于乙肝血清學指標HBsAg及HBsAb的檢測性能進行驗證分析。結果顯示HBsAg及HBsAb高、低濃度的批間及批內精密度均小于10%。在HBsAg及HBsAb線性回歸方程中，相關系數r2分別為0．9958和 0．9950，均大于 0．95，回歸方程斜率 a分別為 0．9881及 1．0244，在 0．95～1．05 的要求范圍內。HBsAg 及HBsAb的定值質控品稀釋到檢出限濃度后檢測的均值分別為 0．0530 IU/mL 及 2．0755 mIU/mL，CV 分別為 8．87%和 7．89%，均小于 10%，而 HBsAg及 HBsAb的功能靈敏度驗證濃度分別為0．025 IU/mL以及0．625 mIU/mL，均低于試劑線性范圍的下限，HBsAg與HBsAb的攜帶污染率均為0，驗證通過。將本年度衛生部室間質評的樣本用Alinity i化學發光免疫分析儀檢測驗證，檢測結果與質評預期結果一致，而通過Alinity i化學發光免疫分析儀與Architect i2000化學發光分析儀比對檢測的HBsAg及HBsAb的線性回歸方程可以得出相關系數r2分別為0．9982及0．9939，回歸方程斜率 a 分別為 0．9568 及 1．0355，均符合驗證要求。在健康人群參考區間的驗證中，HBsAg及HBsAb的結果100%落在正常參考范圍內。因此，Alinity i化學發光免疫分析儀能夠完全滿足臨床對乙肝血清標志物HBsAg和HBsAb的檢測需求。

綜上所述，雅培Alinity i化學發光免疫分析儀定量檢測HBsAg及HBsAb的穩定性、重復性和精確性是完全符合臨床應用要求的，同時相對于Architect i2000化學發光分析儀更具擴展性、靈活性及高效性，可以顯著提高實驗室的工作效率。