三疣梭子蟹“乳化病”病理學研究

宮春光 劉曉麗 田洋 王鳳敏 李春嶺 殷蕊 孫桂清

摘 要：為從病理學角度闡明三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）“乳化病”的致病機理，選取中度和重度感染“乳化病”的三疣梭子蟹進行了病理研究。結果顯示：河北省黃驊地區(qū)池塘養(yǎng)殖三疣梭子蟹“乳化病”的致病病原為血卵渦鞭蟲（Hematodinium sp.）;患病三疣梭子蟹的血淋巴、心臟、肝胰腺、鰓、體肌肉、螯足、第一步足和性腺等重要的組織器官均會受到不同程度的破壞。中等程度感染的病蟹多數組織器官尚存比較完整的組織結構;而重度感染的病蟹組織器官被嚴重破壞，其中肝胰腺和螯足肌肉已經失去原有組織結構，性腺也幾乎完全消失。

關鍵詞：三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）;“乳化病”;病理;血卵渦鞭蟲（Hematodinium sp.）

三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）是河北省的傳統養(yǎng)殖品種，具有較高的知名度和產業(yè)優(yōu)勢。但近幾年“乳化病”的爆發(fā)給產業(yè)帶來了巨大影響，導致養(yǎng)殖戶虧損嚴重、養(yǎng)殖面積銳減。筆者對該病進行了病理研究，以期從病理學角度闡明該病的致病機理，為尋找該病的有效防控方法提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

病蟹采樣時間為2020年10月1日，采樣地點為黃驊市南排河鎮(zhèn)北方第一漁村。發(fā)病池塘的養(yǎng)殖模式為三疣梭子蟹與日本對蝦混養(yǎng)，其中，三疣梭子蟹的雄蟹已經在9月份出塘售賣，塘中存蟹為育肥雌蟹，發(fā)病個體也均為雌蟹。發(fā)病池塘水色呈褐綠色，藻色偏淡，透明度在40～50 cm，水溫15 ℃。養(yǎng)殖業(yè)者介紹，該池塘在近幾天發(fā)病明顯（蟹的活力下降、死亡明顯增加），而隔壁池塘（也是該養(yǎng)殖戶的池塘）的蟹在前幾天已經全部死亡。這兩口池塘在出塘雄蟹時均未見發(fā)病，同池養(yǎng)殖的日本對蝦也未見發(fā)病。

取中等程度發(fā)病和重度發(fā)病的病蟹放入泡沫箱中，加少量冰塊降溫，運回實驗室進行病原、病理研究。

1.2 制作血涂片

用 75%酒精對梭子蟹步足基部擦拭消毒， 用1 mL無菌注射器于其關節(jié)膜處抽取約200 μL血淋巴，滴于載玻片上，混合等量的中性紅溶液（中性紅：PBS=0.02% w/v），在顯微鏡下進行觀察并拍照。

1.3 制作病理切片

取病蟹的鰓、肝胰腺、心臟、體肌肉、螯足、第一步足和性腺等7種組織，Bouin氏液固定24 h，自來水沖洗12 h，經70%、80%、85%、90%、95%、100%酒精逐級脫水后，二甲苯+酒精、二甲苯透明，浸蠟，石蠟切片，H.E染色，顯微觀察、拍照。

2 結果與討論

2.1 結果

2.1.1 病蟹的外觀癥狀 病蟹甲長為6.7～7.3 cm，甲寬為14.3～15.6 cm，體重為97～106 g;與同等規(guī)格健康蟹相比，病蟹體重明顯偏輕（輕約20%左右）。具體外觀癥狀見圖1（封二）?；疾€體活力差，爬行緩慢、螯足無力，體色暗淡，體表有藻類、有機物等附著物（蟹的自凈能力下降）。解剖觀察，發(fā)病嚴重的蟹體內充滿乳白色（微黃）濃稠液體，肝胰腺明顯偏小且顏色偏白，性腺嚴重萎縮或乳化（有的病蟹幾乎找不到性腺）;病蟹的螯足和步足空癟，肌纖維間有水樣物;心臟被乳白色液體包裹，心肌彈性差;鰓呈灰褐色。

2.1.2 血涂片觀察 血淋巴涂片檢查顯示，在病蟹血淋巴中有大量病原—血卵渦鞭蟲（Hematodinium sp.），該寄生蟲在血淋巴中主要以多核滋養(yǎng)體和團聚體的形態(tài)存在，見圖2（封二）。

2.1.3 組織病理變化

2.1.3.1 鰓 病蟹鰓的切片顯示，鰓絲腔內充斥著大量血卵渦鞭蟲蟲體，其中，以多核滋養(yǎng)體為主，部分鰓絲腔內出現蛛網狀滋養(yǎng)體;中度感染的病蟹鰓絲基本完整，但部分鰓小隔消失;重度感染的鰓絲管腔膨脹變形，鰓絲末端的鰓小片膨脹變形，鰓小隔完全缺失。見圖3（封二）。

2.1.3.2 肝胰腺 中度感染時，病蟹肝胰臟中有大量血卵渦鞭蟲進入肝小管間隙，肝小管間隙明顯增大，結締組織幾乎完全缺失，但肝胰臟整體結構尚在;重度感染時，肝胰臟組織結構完全被破壞，絕大部分肝小管消失，僅存少量肝小管輪廓。見圖4（封三）。

2.1.3.3 心臟 中度感染的病蟹，心臟基本組織結構完整，部分心肌纖維溶解斷裂，肌束間隙增大，肌絲纖維互相分離;重度感染的病蟹心臟，大量心肌纖維彎曲、斷裂、溶解壞死，肌絲纖維相互分離，喪失原本的條帶結構，肌纖維間結締組織完全破損缺失，心臟內充滿蟲體。見圖5（封三）。

2.1.3.4 體肌肉 中度感染血卵渦鞭蟲的病蟹體肌肉，部分組織結構完整，部分肌絲斷裂溶解，肌絲纖維排列疏松，相鄰肌絲纖維互相分離，間隙中侵入大量的血卵渦鞭蟲;重度感染的病蟹體肌肉，大量肌肉組織變性壞死，肌絲排列紊亂且相互分離，大部分肌絲纖維彎曲、斷裂、溶解，喪失正常緊密的條帶狀結構，壞死部分充滿血卵渦鞭蟲體。見圖6（封三）。

2.1.3.5 螯足 中度感染血卵渦鞭蟲的病蟹螯足肌肉，組織結構基本完整，部分肌絲斷裂溶解，間隙中侵入大量的血卵渦鞭蟲;重度感染的病蟹螯足肌肉，大量肌肉組織變性壞死，肌絲排列紊亂且相互分離，大部分肌絲纖維彎曲、斷裂、溶解，幾乎失去原有組織結構。見圖7（封三）。

2.1.3.6 第一步足 中度感染的病蟹第一步足肌肉，部分組織結構完整，部分肌絲斷裂溶解，間隙中侵入大量的血卵渦鞭蟲;重度感染的病蟹第一步足肌肉，大量肌肉組織變性壞死，肌絲排列紊亂且相互分離，大部分肌絲纖維彎曲、斷裂、溶解，留下大片空白處，幾乎失去原有組織結構。見圖8（封三）。

2.1.3.7 性腺 中度感染血卵渦鞭蟲的病蟹性腺非常小，萎縮明顯，病理切片觀察，性腺已經完全失去其原有組織結構，僅存少量卵母細胞輪廓，性腺內部充滿血卵渦鞭蟲蟲體;重度感染的病蟹已經完全找不到性腺，性腺已經完全乳化或萎縮。見圖9（封三）。

2.2 討論

本次采樣的病蟹外觀癥狀與許文軍等[1-2]、王印庚等[3]所描述的癥狀相似，該病也有 “肌肉白濁癥”“牛奶病”和“牙膏病”等稱謂，各種命名均是依據其主要癥狀（肌肉和肝胰腺等組織被乳化呈白色或淡黃色液體）而來。

血卵渦鞭蟲被認為是一類感染海水甲殼類的寄生性甲藻（parasitic dinoflagellates）[4]。本研究在病蟹血淋巴、乳化液體、鰓、肝胰臟、心臟、體肌肉、螯足肌肉、第一步足肌肉等組織器官內發(fā)現了大量血卵渦鞭蟲，觀察到了該寄生蟲的多核滋養(yǎng)體、單核滋養(yǎng)體、絲狀滋養(yǎng)體、類變形蟲滋養(yǎng)體、團聚體、蛛網狀滋養(yǎng)體和孢子前細胞等各個發(fā)育時期的蟲體，這一結果與王金鳳等[5]的研究一致。血卵渦鞭蟲在宿主體內的系統性感染增殖導致宿主的主要器官和組織均發(fā)生不同程度的病變，本研究采樣的血淋巴、心臟、肝胰腺、鰓、體肌肉、螯足、第一步足和性腺等重要的組織器官均受到不同程度的破壞。各組織器官被破壞的程度與血卵渦鞭蟲感染程度呈正相關，中等程度感染的病蟹多數組織器官尚存比較完整的組織結構，而重度感染（乳化嚴重）的病蟹體內充滿大量乳白色液體，其各組織器官受損也最為明顯，部分組織器官（肝胰腺和螯足肌肉）已經失去原有組織結構，性腺也完全消失。

從各組織器官被破壞程度看，肝胰腺、螯足肌肉和體肌肉的損傷最為明顯，其次是第一步足肌肉和心臟，鰓的損傷相對最小。性腺組織有些特殊，重度感染的病蟹完全失去了性腺（或性腺未發(fā)育），中等程度感染的病蟹僅存疑似性腺，切片顯示完全失去性腺原有結構，僅存卵母細胞輪廓。其原因有可能是血卵渦鞭蟲的感染能夠抑制三疣梭子蟹的性腺發(fā)育。本次采樣沒有雄蟹，沒有觀察到雄蟹感染后性腺的情況，血卵渦鞭蟲對三疣梭子蟹性腺的影響是溶解破壞還是抑制生長還有待于進一步研究。

參考文獻：

[1]

許文軍，徐漢祥，施惠，等.三疣梭子蟹Portunus trituberculatus（Miers） 血卵渦鞭蟲病診斷與綜合防治措施[J].現代漁業(yè)信息，2006，21（11）：27-28.

[2] 許文軍，施慧，徐漢祥，等.養(yǎng)殖梭子蟹血卵渦鞭蟲感染的初步研究[J].水生生物學報，2007，31（5）：27-32.

[3] 王印庚，楊洋，張正，等.津冀地區(qū)養(yǎng)殖三疣梭子蟹大量死亡的病原和病理分析[J].中國水產科學，2017，24（3）：596-605.

[4] 李才文，許文軍.海水甲殼類寄生性病原血卵渦鞭蟲（Hematodinium spp.）研究進展[J].海洋與湖沼，2014，45（1）：1-10.

[5] 王金鳳，李才文，李蒙，等.血卵渦鞭蟲感染三疣梭子蟹的病原形態(tài)學及組織病理學變化[J].海洋與湖沼，2015，46（4）：748-757.

（收稿日期：2021-08-05）