美洲紅點鮭和花羔紅點鮭種間單列雜交育種技術

王秀蘭 肖志國 高春山 陳偉強 張大彪 郎奎宇 陳嬋娟 李冠穎

摘 要：為培育出冷水魚新品種，開展了以美洲紅點鮭（Salvelinus fontinalis）為母本、花羔紅點鮭（S. malma）為父本的種間單列雜交試驗，試驗結果顯示，種間雜交的受精率為97.9%;發眼積溫190～214.8 ℃·d，發眼率95.6%;出苗積溫393.3～466.1 ℃·d，孵化率90%，出苗26.8萬尾;畸形率2‰，存活率95.8%，獲得雜交種仔魚25.5萬尾。在室內利用玻璃鋼水槽對稚魚進行培育，養殖成活率98%，利用水泥池在室內和室外進行幼魚培育，養殖成活率96.1%。雜交子代不僅具有部分花羔紅點鮭的生物性狀，而且生長速度是花羔紅點鮭的2.3倍，抗病力比花羔紅點鮭高70%。

關鍵詞：美洲紅點鮭（Salvelinus fontinalis）;花羔紅點鮭（Salvelinus malma）;雜交育種

花羔紅點鮭（Salvelinus malma）為中小型冷水性稀有魚類，在我國僅分布于綏芬河、圖們江和鴨綠江上游支流里[1]，珍稀名貴，市場售價高，供不應求，但生長速度較慢;美洲紅點鮭（S. fontinalis）是冷水魚產業廣泛養殖的魚類，生長速度快，但繁殖期易患癤瘡病和水霉病，死亡率高[2]，市場售價低，滯銷。雜交育種周期短，效果明顯，一般在子代即可表現出雜種優勢[3]，鮭科魚類的屬間和屬內雜交已有報道[4-8]， 本研究以市場為導向，旨在通過以美洲紅點鮭為母本、花羔紅點鮭為父本的種間雜交，培育出具有部分花羔紅點鮭形態特征，受市場歡迎，比花羔紅點鮭抗病力強、生長速度快的新的養殖品種。

1 材料與方法

1.1 試驗地點

2020年1月10日至2021年1月19日，試驗在長白山保護開發區福順祥冷水魚有限公司進行，水源為山泉水，水質清澈， pH值6.7～7.5，溶解氧8～10 mg/L。

1.2 親本來源

美洲紅點鮭雌魚來自漁場自繁體系，年齡3+齡;花羔紅點鮭雄魚采自鴨綠江上游長白江段，經漁場培育至3+齡。

1.3 親本放養

培育池為30 m2的水泥池，規格為長10 m×寬3 m×深0.8 m，水深0.5～0.6 m;進出水口設置攔魚網柵，出水口閘板控制水位。2020年1月10日進行親魚放養，且雌、雄分養，具體放養情況見表1。

1.4 親本培育

根據美洲紅點鮭比花羔紅點鮭性成熟季節早的規律，將花羔紅點鮭雄魚和美洲紅點鮭雌魚分別放養在漁場的上游和下游的魚池進行培育，每天11∶00點進行水溫監測，記錄水溫數據，花羔紅點鮭培育水溫1～10 ℃，美洲紅點鮭的培育水溫1～13 ℃。飼料采用鮭鱒魚配合飼料，每天上、下午各投喂一次，按魚體重的0.5%～1.5%投喂。及時清刷進、出水口攔魚柵和魚池。池水每2～3 h交換一次，溶解氧不低于6 mg/L。每天觀察魚的攝食和活動情況，觀察有無疾病發生。

1.5 雜交育種

1.5.1 親本性成熟的判斷 在親本培育過程中，隨著繁殖期的到來，親本會隨著性腺的成熟出現食欲顯著減退，個別成熟個體會發生水霉病，據此初步判斷親本的成熟情況。

1.5.2 親本的成熟度檢查 性成熟的美洲紅點鮭雌魚，用手輕壓腹部會有橙色或橘紅色的卵粒流出。性成熟的花羔紅點鮭雄魚，用手輕壓泄殖腔會有乳白色的精液流出。

1.5.3 雜交親本挑選 2020年10月12日上午，對美洲紅點鮭的雌魚和花羔紅點鮭的雄魚進行成熟度檢查，并挑選美洲紅點鮭雌魚92尾、花羔紅點鮭雄魚31尾。

1.5.4 等滲液配制 等滲液須現用現配，配制方法：用塑料桶取10 L蒸餾水，稱取2.4 g氯化鉀、2.6 g無水氯化鈣、90.4 g氯化鈉，充分溶解于蒸餾水中。

1.5.5 采卵、采精及人工授精 10月12日下午進行雜交試驗，繁殖水溫7.3 ℃，雌雄比3：1。采卵、采精及人工授精均在避光、防水的條件下進行。先將采卵盆擦干，盛入0.5 L等滲液，采用擠腹采卵法將6尾或9尾雌魚卵擠入，攪拌10～15 s，充分溶解擠破卵的卵黃蛋白，迅即擠入2尾或3尾雄魚的精液，再充分攪拌10～15 s，靜置5～10 min，使卵受精。

1.5.6 受精卵孵化 10月12日至11月24日進行受精卵孵化。將受精卵用清水反復清洗8～10次，洗去剩余的精液和污物，計數后盛入3個孵化桶，盛卵密度9 452粒/L;孵化水流量控制在1～2 L/min，孵化水溫5.1～5.8 ℃，溶解氧不低于6 mg/L;受精卵每天用溴硝丙二醇流水消毒30～40 min，消毒濃度為0.35～0.4 mg/L，至受精卵全部發眼。

1.5.7 發眼卵孵化 2020年11月25日至2021年1月19日進行發眼卵孵化。受精卵發眼后，挑除死卵和未發眼的卵，采用3組玻璃鋼平列槽孵化。盛卵密度約10萬粒/m2，孵化水溫4.7～5.1 ℃，孵化水流量4～5 L/min，溶解氧不低于6 mg/L。每天及時挑出死卵、死苗，并旋水4～5次，保證水流暢通，至完全出苗。

1.5.8 育種 2021年3月8日至5月22日，在室內利用4個玻璃鋼水槽進行稚魚培育，魚苗規格0.057 g/尾，放養密度5萬尾/m2，培育水溫5.5 ℃，溶解氧不低于6 mg/L，每天上、下午各投喂豐年蝦無節幼體1次、配合飼料3次、冰鮮海蚤1次。5月23日至7月25日，在室內利用2個16 m2的圓形水泥池進行前期幼魚培育，放養密度7 813尾/m2，每天上、下午各投喂海蚤1次、配合飼料3次。7月26日至8月29日，在室外利用2個20 m2的水泥池進行幼魚后期培育，放養密度5 975尾/m2，培育水溫8～12 ℃，溶解氧不低于6 mg/L，每天投喂配合飼料4次。

2 試驗結果

本試驗種間雜交的雌雄比3∶1，共獲得受精卵31.9萬粒，受精率97.9%。孵化積溫100～110 ℃·d時測得的受精率為97.9%;發眼積溫190～214.8 ℃·d，發眼率95.6%，獲得發眼卵29.8萬粒。

出苗積溫393.3～466.1 ℃·d，出苗26.8萬尾，孵化率90%，畸形率2‰，存活率95%，獲得雜交種仔魚25.5萬尾。

培育規格0.5 g/尾的稚魚25萬尾，成活率98%;培育規格3.4 g/尾的前期幼魚23.9萬尾，成活率95.5%;培育規格6.8 g/尾的后期幼魚23.1萬尾，成活率96.7%。

3 討論

3.1 通過不同水溫的親本培育，美洲紅點鮭和花羔紅點鮭能同步成熟，實現種間雜交

美洲紅點鮭和花羔紅點鮭是隸屬鮭科，鮭亞科，紅點鮭屬的不同種類，吉林省花羔紅點鮭的繁殖季節一般為每年的9月下旬至10月中上旬，而美洲紅點鮭的繁殖季節一般為每年的10月下旬至11月上旬，將培育花羔紅點鮭雄魚、美洲紅點鮭雌魚的魚池，分別選擇在近水源處和遠水源處，在培育水溫分別為1～10 ℃、1～13 ℃下進行培育，通過降低花羔紅點鮭雄魚的性腺發育積溫，增加美洲紅點鮭雌魚的性腺發育積溫，使繁殖期不同的兩種魚類，性腺同步成熟，實現種間雜交。特別是花羔紅點鮭雄魚在低溫下培育，不僅延長了成熟期，而且低溫下其精液質量好、持續時間長，有利于種間雜交。本研究受孵化設備限制，只進行了一個批次的種間雜交，事實上，隨著美洲紅點鮭的陸續成熟，至少可進行三個批次的種間雜交，進而實現規模化繁育。

3.2 美洲紅點鮭和花羔紅點鮭種間單列雜交效果分析

將卵采入等滲液中，避免其與空氣的接觸，同時，通過攪拌，能夠充分溶解破碎卵的卵黃蛋白，防止吸附精子，提高種間雜交的受精率。從試驗結果來看，種間雜交的受精率97.9%、發眼率95.6%、孵化率90%、畸形率2‰、存活率95%，說明以美洲紅點鮭為母本、花羔紅點鮭為父本的種間雜交是可行的，種間雜交效果良好。

3.3 為冷水魚產業提供了新的養殖品種

吉林省冷水魚產業養殖魚類較少，養殖結構較為單一，極大地限制了冷水魚產業的發展。雜交在魚類育種工作中對增強子代生存力、豐富遺傳結構、獲得雜種優勢有重要作用[9]，在生產中，紅點鮭種間雜交育種可獲得具有較強雜種優勢的雜交組合[10]。目前，經過我們培育，雜交種不僅具有部分花羔紅點鮭的生物性狀，而且生長速度比花羔紅點鮭快2.3倍，養殖成活率高達97%，比花羔紅點鮭高70%，充分體現了雜交種的生長優勢和抗病優勢。

美洲紅點鮭養殖廣泛，易獲得，懷卵量相對較大，花羔紅點鮭為吉林省稀缺名貴種質資源，本研究立足資源優勢，以美洲紅點鮭為母本、以花羔紅點鮭為父本，成功培育出新的養殖品種，有利于冷水魚產業調整養殖結構、滿足市場需求、提高養殖效益，前景十分遠大。

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（收稿日期：2021-09-09）