2017—2020年揚州地區住院肺炎患者呼吸道病毒監測結果分析

黃 瑤， 張秀玲， 王 艷， 孔桂美， 徐 勤

（1.揚州市疾病預防控制中心檢驗科，江蘇 揚州 225002；2.揚州大學醫學院，江蘇 揚州 225009）

發熱呼吸道病毒感染是全球范圍內引起人類發病和死亡的主要原因之一[1-4]，了解病原體對疾病診治和預防具有十分重要的作用。鑒于呼吸道病毒疫情防控的復雜性[5-10]，本研究在揚州市住院肺炎患者中主動開展了呼吸道病毒病原學監測，對住院肺炎患者進行流感病毒、呼吸道合胞病毒、人腺病毒、人腸道病毒及人副流感病毒Ⅲ型這5種常見呼吸道病毒的檢測，最大程度對呼吸道傳染疫情進行預測，以及時采取應對措施，減少疫情對社會和經濟發展的影響。

1 材料和方法

1.1 樣本來源

收集江蘇省蘇北人民醫院、揚州大學附屬醫院、揚州市第二人民醫院、高郵市人民醫院4家哨點醫院符合“采樣對象”定義的住院肺炎患者呼吸道咽拭子樣本，每家哨點醫院每周采集5人份樣本，每周采集1～2次。樣本采集后48 h內送至揚州市疾病預防控制中心病毒實驗室，2～8 ℃保存；未能及時送達的樣本，-70 ℃或以下保存，并于1周內送達；樣本應避免反復凍融。

1.2 診斷標準

納入符合以下3種情況之一的住院治療的肺炎患者作為“采樣對象”：（1）發熱（腋下體溫≥38 ℃），并具有肺炎的影像學特征，發病早期白細胞總數降低或正常（或淋巴細胞分類計數減少）；（2）符合呼吸道病毒感染臨床表現（咽部不適、咽干或咽痛，鼻塞、流涕，鼻、咽、喉明顯充血或水腫，咳嗽，咳痰，氣短，聽診呼吸音異常，胸痛）中任意1項；（3）經規范抗菌藥物治療3 d，病情無明顯改善，或呈進行性加重，或常見病原體感染不能解釋的肺炎病例。

1.3 儀器和試劑

Kingfisher96全自動核酸提取儀、ZTLJB-Y64核酸提取試劑盒（西安天隆科技有限公司）、ABI ViiA7實時熒光定量PCR儀（美國ABI公司）；磁珠法病毒（NA）提取試劑盒（RD0164D，上海醫脈賽生物科技有限公司）；甲型/乙型流感病毒、甲型H1N1流感病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒Victoria/Yamagata、副流感病毒Ⅲ型、腺病毒、呼吸道合胞病毒試劑盒和腸道病毒（通用型）核酸檢測試劑盒（熒光PCR法）（江蘇碩世生物公司）。

1.4 方法

將樣本震蕩處理后，采用Kingfisher96全自動核酸提取儀提取、純化核酸，采用ABI ViiA7實時熒光定量PCR儀進行分型檢測。對流感病毒陽性樣本進一步行亞型分型檢測。逆轉錄熒光聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）反應條件：50 ℃ 30 min，95 ℃ 5 min，95 ℃ 10 s、55 ℃延伸1 min，45個循環。熒光PCR反應條件：95 ℃ 5 min，95 ℃ 15 s、55 ℃延伸40 s，45個循環。結果判定：循環閾值（cycle threshold，Ct）≤35，且曲線呈S型為陽性；Ct>38或未檢出為陰性。

1.5 統計學方法

采用SPSS 20.0軟件及Excel 2019軟件進行統計分析，計數資料以例或率表示，組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 監測采樣情況

2017—2020年，共收到住院肺炎患者咽拭子樣本1 479例，患者男887例，女592例，年齡為<1個月～94歲。各哨點醫院各年樣本上送情況見表1。

2.2 5種呼吸道病毒檢出率

1 479例咽拭子樣本中，檢出病毒陽性195例，陽性檢出率為13.18%，其中2種病毒混合感染7例（0.47%）。195例病毒陽性樣本中，流感病毒檢出率最高（5.54%），以下依次為呼吸道合胞病毒（2.63%）、人腸道病毒（1.89%）、人副流感病毒Ⅲ型（1.62%）、人腺病毒（1.01%）。7例混合感染病例中，人腺病毒合并人腸道病毒感染2例，人副流感病毒Ⅲ型合并人腸道病毒感染1例，呼吸道合胞病毒合并人腸道病毒感染2例，呼吸道合胞病毒合并人副流感病毒Ⅲ型感染2例。見表2。

2.3 呼吸道病毒檢出時間分布

2017—2020年，各家哨點醫院樣本上送數量穩定。2017年陽性檢出率最高，達19.83%（68/343），以下依次為2018年（13.40%，43/321）、2019年（17.44%，60/344）、2020年（5.10%，24/471），不同年份病毒檢出率比較，差異有統計學意義（χ2=45.60，P<0.01）。

2017年呼吸道病毒檢出高峰時間集中在3～5月和11～12月，2018年集中在7月和9月，2019年集中在1～3月和12月，2020年僅有9月1個小高峰。2017年3～5月檢出病毒以B型Victoria流感病毒為主，11～12月則以新甲型H1N1流感病毒及人腸道病毒為主；2018年7月的高峰以呼吸道合胞病毒（12.50%）、人副流感病毒Ⅲ型（12.5%）、人腸道病毒（4.17%）和人腸道病毒與人副流感病毒Ⅲ型混合感染（4.17%）為主，陽性檢出率達到33.34%，9月的高峰則以人腸道病毒為主（37.5%），人腺病毒、人副流感病毒Ⅲ型、人腺病毒+人腸道病毒混合感染及呼吸道合胞病毒+人腸道病毒混合感染檢出率僅為4.17%，病毒陽性檢出率高達54.18%；2019年1～3月主要為新甲型H1N1流感病毒感染，12月的高峰由H1N1流感病毒，B型Victoria流感病毒及呼吸道合胞病毒構成；2020年9月小高峰主要由呼吸道合胞病毒和人副流感病毒Ⅲ型構成。

2.4 不同性別、年齡住院肺炎患者呼吸道病原檢出情況

887例男性患者中，101例病原檢測陽性，陽性檢出率為11.39%；592例女性患者中，94例病原檢出陽性，陽性檢出率為15.88%。男性、女性陽性檢出率差異有統計學意義（χ2=6.4.26，P<0.05）。

根據患者年齡進行分組，不同年齡患者呼吸道病毒陽性檢出率分別為：0～6歲組16.57%（90/543），7～18歲組18.00%（18/100），19～59歲組12.72%（44/346），≥60歲組8.78%（43/490）。不同年齡組陽性檢出率差異有統計學意義（χ2=15.87，P<0.01）。

2.5 住院肺炎患者呼吸道病毒病原譜

2017、2018、2019 、2020年住院肺炎患者病毒病原譜有所不同（χ2=72.63，P<0.01）。2017年以流感病毒、人腸道病毒、人呼吸道合胞病毒為主，分別占所有檢出病原體的54.41%、16.18%、16.18%；其中流感病毒共檢出4個亞型，以B型Victoria為優勢毒株，H1N1亞型同期共存，H7N9與H3N2亞型交替檢出。2018年病毒病原譜則以人腸道病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒Ⅲ型為主，分別占所有檢出病原體的32.56%、25.58%、13.95%，流感病毒檢出率則大大降低，僅為13.95%，甲型流感病毒僅有新甲型H1N1檢出，乙型流感病毒僅有B型Yamagata檢出，分別占4.65%與9.30%。2019年病原譜以流感病毒為主（67.60%），除H7N9亞型之外，其余4種亞型均有檢出，以新甲型H1N1與B型Victoria為主。2020年以呼吸道合胞病毒和人副流感Ⅲ型病毒為主（各占37.5%），流感病毒僅占8.34%。見表3。

2.6 不同性別患者病毒病原譜

住院肺炎患者中，男性、女性病毒病原譜差異無統計學意義（χ2=7.68，P>0.05），主要病原均為流感病毒和呼吸道合胞病毒。

2.7 不同年齡患者病毒病原譜

4個年齡組中，所占比例最大的均為流感病毒和呼吸道合胞病毒，其次為人腸道病毒和副流感病毒Ⅲ型。4個年齡組病毒病原譜構成差異具有統計學意義（χ2=27.33，P<0.05）。見表4。

表4 不同年齡患者病毒病原譜 例（%）

3 討論

本研究通過對揚州市住院肺炎患者開展常見呼吸道病毒主動監測，初步了解了揚州地區住院肺炎患者病毒病原構成及流行情況。2017—2020年，揚州地區住院肺炎患者呼吸道病毒總檢出率為13.18%，低于相關文獻中發熱呼吸道人群監測中的病毒總陽性率[11-12]，可能是住院肺炎患者病程已經進展了一段時間，多數經過了抗病毒藥物治療，導致病毒檢出率有所下降；除此之外，本研究病原學監測只針對常見的5種呼吸道病毒，病毒檢測范圍小于相關文獻的8～9種，可能會使病毒檢出率有所下降。本研究病毒檢出時間分布結果顯示，2017年住院肺炎患者中呼吸道病毒陽性檢出高峰主要集中在3～5月和11～12月，2018年集中在7月和9月，2019年集中在1～3月和12月，2020年僅有9月1個小高峰，這和相應病毒的流行高發季節基本能夠一一對應。流感病毒的流行季節以冬春季為主，人腸道病毒的流行季節為夏秋季，人副流感病毒Ⅲ型則是全年都有流行。本研究中，呼吸道合胞病毒為秋冬季流行，與相關文獻報道的流行季節為冬春季[11-12]略有不同，可能與地域、樣本來源、樣本基數不同有關。本研究由于病毒總體陽性檢出率不高，各病毒流行趨勢無法根據數據描述發病與年齡、季節等相關的流行病學特征，有待于日后進一步監測，擴充數據后進行描述。本研究結果顯示，揚州地區2020年呼吸道病毒陽性檢出率顯著下降，流感病毒在1～3月零星出現過后一直未有檢出，可能與2020年新型冠狀病毒肺炎疫情發生后采取的嚴格隔離防范措施密切相關。

本研究不同性別住院肺炎患者呼吸道病毒檢出結果顯示，男性患者病毒陽性檢出率低于女性，與相關文獻報道的男性更易感呼吸道病毒[13-15]的結論不一致，這可能是因為樣本來源不同導致的。但也有研究結果表明，女性感染呼吸道病毒，其臨床癥狀可能更為嚴重，住院肺炎患者一般處于呼吸道感染癥狀較為嚴重的階段，本研究結果是否可提示女性感染呼吸道病毒更易發展為肺炎，需要進一步的監測結果加以驗證。

本研究不同年齡患者病毒檢出率差異極顯著，0～6歲兒童的陽性檢出率最高，表明學齡前兒童免疫力較低，在幼托機構等場所容易交叉感染呼吸道病毒，與文獻報道[16-19]一致，且易進展為肺炎，而≥60歲老年患者病例數僅次于0～6歲兒童，但陽性檢出率最低，表明≥60歲老年人由于抵抗力下降，呼吸道感染容易進展為肺炎，但病毒性感染不是主要原因。

綜上所述，2017—2020年揚州地區住院肺炎患者呼吸道病毒流行季節及病原譜每年均有所不同，但主要病原為流感病毒和呼吸道合胞病毒，應加強呼吸道病毒監測，將流感病毒及呼吸道合胞病毒作為呼吸道感染防控重點。