山西某雞棚改造育肥豬場腹瀉病因診斷

鄭龍龍 潘國梅 張 黎*談小龍

（1山西農業大學動物醫學學院，山西太谷 030801；2云南省楚雄州祿豐縣動物衛生監督所，云南祿豐 652100；3安徽省六安市畜牧發展中心，安徽六安 237000）

輪狀病毒感染仔豬后常導致嘔吐、腹瀉、脫水和酸堿平衡紊亂[1]。病原體除輪狀病毒外，兒童及其他幼齡動物體內分離的輪狀病毒也可感染仔豬[2]，引起不同程度的發病癥狀，輪狀病毒是幼兒和多種新生動物重要的腸道病毒，為人獸共患病；輪狀病毒能侵害人和許多家畜，給人類健康和畜牧業的穩定帶來巨大威脅[3]。目前尚無治療輪狀病毒感染的有效藥物，當環境溫度下降和繼發大腸桿菌病時常使癥狀加重和幼畜死亡率增高[4,5]。

成年豬與育成豬多在晚秋、冬季和早春季節發病，多為隱性感染，是引起豬胃腸炎的常見病因。本病最早于1943年在患腹瀉兒童身上發現，1975年首次從豬體內分離出輪狀病毒，目前本病呈世界性流行[6]。輪狀病毒在我國呈全國性流行，其抗體陽性率最高可達95.7%，病毒陽性率最高可達68.4%，且在腹瀉和非腹瀉豬群中均可檢測到[7]。當前從各大洲分離到的輪狀病毒最流行的毒株仍是OSU，其基因型組合為G5P，我國主要流行的也是該類毒株的輪狀病毒[8]。

2020年11月晉中市太谷區2個養殖戶從同一商品母豬場分別采購500頭同批次50～70日齡12 kg仔豬，出現不同程度的腹瀉癥狀，使用抗生素效果差，豬群中40%出現脫水、昏迷癥狀，最終造成15%的傷亡率。為了探討該疾病的發生原因與相應的防控工作，開展本研究。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

無菌棉簽分別取A、B養殖戶80～100日齡架子豬肛拭子樣品各20份，置于1.5 mL EP管中4℃備用。

1.2 試驗材料

輪狀病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬瘟病毒熒光RT-PCR核酸檢測試劑盒、豬圓環病毒2型、豬偽狂犬野毒gE基因熒光PCR核酸檢測試劑盒，以上試劑盒均購自北京明日達科技發展有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 細菌分離培養與藥敏試驗

取肛拭子樣品加入1 mL無菌生理鹽水混勻，使用麥康凱、SS培養基劃線分離培養；分離菌株培養物涂片，進行革蘭氏染色，鏡檢。采用紙片擴散法涂抹在藥敏培養基上，測定抑菌圈直徑。

1.3.2 Q-PCR鑒定病毒

取1.3.1剩余樣品稀釋物4℃靜置30 min，10 000 r·min離心5 min，取上清液0.1 mL，提取總RNA或DNA；使用Q-PCR核酸檢測試劑盒分別檢測豬圓環病毒2型、豬瘟病毒、豬流行性腹瀉病毒、輪狀病毒和豬偽狂犬野毒。

2 實驗結果

2.1 細菌鑒定

40份樣品接種于伊紅美藍培養基培養24 h后，培養基上出現了大小不等、帶有金屬光澤的紫黑色圓形菌落和無色半透明菌落。通過革蘭氏染色鏡檢，顯微鏡下觀察培養基上的2種形態相似的菌體，紫黑色菌落為革蘭氏陰性著色均勻的直桿菌、無芽孢、兩端鈍圓，菌體兩端偶爾略呈深染，與大腸桿菌染色特性相符[9]；無色半透明菌落為紅色短小桿菌，與沙門氏菌的染色特性相符[10]。

2.2 藥敏結果

大腸桿菌分離株對萬古霉素、頭孢曲松敏感，對阿莫西林、新霉素、粘桿菌素、四環素、氨芐西林、丁胺卡那霉素、恩諾沙星、大觀霉素不敏感。沙門氏菌對大觀霉素、萬古霉素敏感，而對阿莫西林、新霉素、粘桿菌素、恩諾沙星、丁胺卡那霉素、四環素、氨芐西林、林可霉素、頭孢曲松鈉不敏感。

2.3 Q-PCR結果

Q-PCR相關試劑盒對豬圓環病毒2型、豬瘟病毒、豬流行性腹瀉病毒、輪狀病毒和豬偽狂犬野毒gE基因進行了檢測，結果顯示，40份樣品中輪狀病毒核酸100%呈陽性，豬圓環病毒2型核酸30%為陽性；豬瘟病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬偽狂犬野毒均為陰性。

3 討論

仔豬腹瀉是由多種因素引起的一種腸道疾病，如果要診斷腹瀉病的病原，獸醫工作者除了需要有豐富的臨床經驗外，還需要借助實驗室儀器的檢測。本研究對仔豬腹瀉中類似豬圓環病毒2型、豬瘟病毒、豬流行性腹瀉病毒、輪狀病毒和豬偽狂犬野毒等5種病毒及大腸桿菌、沙門氏菌混合感染時的發病情況、臨床癥狀病例進行實驗室診斷，為病原的診療方向提供借鑒。腹瀉豬場的架子豬在發病的3 d前更換了飼料，這可能是引發本次豬腹瀉的誘因，造成本次仔豬腹瀉的病毒性病原主要是輪狀病毒、腸炎型豬圓環病毒2型，細菌性病原是多重耐藥性大腸桿菌和沙門氏菌，多種細菌和病毒的混合感染造成豬只的巨大傷亡。此外，該豬場是由雞棚改造而成的，在生物安全方面存在消毒不徹底，存在雞源耐藥性大腸桿菌和沙門氏菌感染豬群的可能性。提示雞棚改造成豬舍后需要多次徹底的清洗和消毒，并采樣進行實驗室檢測并評價消毒效果。

成年豬血清中輪狀病毒的抗體陽性檢出率達40%～100%，且豬只一旦感染輪狀病毒，就會終生帶毒，難以凈化，且極易造成垂直傳播，帶毒仔豬受到應激因素作用時隨時可能發病[11,12]。輪狀病毒在含有機物的外環境中非常穩定，有過發病史的豬場常年存在，造成即便仔豬不攜帶病毒，也很容易被環境中的病毒所感染[13]。人工接種試驗發現，單獨接種輪狀病毒或溶血性大腸桿菌，只引起斷奶仔豬短暫的輕度腹瀉甚至呈亞臨床癥狀表現。但如果先接種輪狀病毒再接種溶血性大腸桿菌，則可發生類似自然病例的持續性嚴重腹瀉[14-16]，與本病例臨床癥狀相同。我國有關輪狀病毒流行病學方面的研究數據相對較少且重視程度不足，雖然已經有商品化疫苗可用，母豬免疫接種可以保護新生仔豬免受感染[17,18]，但在致病機理方面的研究仍有待深入。