腰痹舒膠囊對寒濕痹阻腰痛模型大鼠血液流變學等相關指標的影響*

雷 鳴 周 杰 王美元 馮瑞偉 向 珊 劉 遄 郭劍華

（1.重慶市中醫(yī)院，重慶 400021；2.重慶市中醫(yī)骨科醫(yī)院，重慶 400012）

腰痛主要表現(xiàn)為一側或者兩側疼痛，多因內傷、外感、跌傷閃挫引起。內傷由于先天稟賦不足，腎虛腰府失養(yǎng)；外感因風、寒、濕、熱等諸邪阻滯經脈，或閃腰岔氣、氣滯血瘀、經絡不通，以外感寒邪發(fā)病常見［1］。寒為陰邪，收斂凝閉、侵襲肌膚經脈、阻遏衛(wèi)陽，導致腰府氣血不暢［2］。腰痹舒膠囊是經全國名中醫(yī)郭劍華經驗方腰痹舒湯改良劑型而成，方中炮干姜、炒白術、茯苓、炙甘草、芍藥、桑寄生、獨活、牛膝散寒除濕、補益肝腎［3］。本研究在前期腰痹舒湯制作工藝、質量標準評價的基礎上，觀察了腰痹舒膠囊的鎮(zhèn)痛作用及對寒濕痹阻腰痛模型大鼠的血液流變學影響，為腰痹舒膠囊治療寒濕痹阻腰痛癥提供實驗室依據(jù)。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 C57小鼠50只，雌、雄各半，體質量250～270 g；60只SD大鼠，雌、雄各半，體質量250～270 g，均由重慶市中藥研究院動物所提供（生產廠家：湖南斯萊克景達實驗動物有限公司）。實驗大鼠于SPF屏障環(huán)境中喂養(yǎng)，采用大鼠專用飼料，保證大鼠食水充足及環(huán)境衛(wèi)生。動物實驗方案符合實驗動物福利倫理的相關規(guī)定。大、小鼠維持墊料及飼料均由重慶市中藥研究院動物所提供（生產廠家：江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責任公司）。

1.2 實驗藥物 腰痹舒膠囊提取物（重慶市中醫(yī)院，批號：20200601，20200603，20200605），由重慶市中醫(yī)院藥劑科提供；阿司匹林腸溶片（拜耳醫(yī)藥保健有限公司，國藥準字J20130078）；復方丹參片（北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠，國藥準字Z11021185）；冰醋酸（無錫陽山生化有限責任公司，批號為20200801）。

1.3 試劑及儀器 瑪福爾人工氣候培養(yǎng)箱（天津瑪福爾科技有限公司），JC-DZSJ-15型純水機（青島聚創(chuàng)環(huán)保集團有限公司），0.01 g實驗室精密分析電子天平（東莞市衡之邦有限公司），202-0S型電熱鼓風干燥箱（紹興萬力儀器有限公司），F(xiàn)ASCO-2050A型全自動血流變快測儀（重慶維多科技有限公司），奧林巴斯BX43雙目顯微鏡，萊卡ASP300S型脫水機，萊卡石蠟包埋機、切片機，CB-800V型潔凈工作臺［蘇潔醫(yī)療器械（蘇州）有限公司］，6 kg/0.2 g電子計重計數(shù)秤（上海凡展衡器有限公司），蘇木精染色液（批號：20200406）、伊紅染色液（批號：20200406）均由重慶葉脈生物技術有限責任公司提供。

1.4 小鼠鎮(zhèn)痛作用實驗［4-5］取C57小鼠50只，按照小鼠體質量分為模型組，陽性藥組，以及腰痹舒膠囊高劑量組、腰痹舒膠囊中劑量組和腰痹舒膠囊低劑量組，每組各10只。適應性飼養(yǎng)1周后，模型組灌胃等體積純化水，陽性藥組灌胃阿司匹林腸溶片61.0 mg/kg，腰痹舒膠囊高、中、低劑量組分別灌胃生藥20.8、10.4、5.2 g/kg，給藥劑量均為20 mL/kg，每日1次，連續(xù)5 d。末次給藥后1 h，各組小鼠均腹腔注射0.8%冰醋酸0.2 mL，記錄注射后20 min內小鼠出現(xiàn)扭體反應的次數(shù)及其潛伏期。

1.5 大鼠寒濕痹阻模型干預實驗 60只SD大鼠按體質量分為空白對照組、模型組、陽性藥組及腰痹舒膠囊高劑量組、中劑量組、低劑量組，每組各10只，將瑪福爾人工氣候培養(yǎng)箱設置為溫度4℃，濕度60%，進行寒濕痹阻模型造模。造模結束后，模型組取2只大鼠處死，取腰部皮下筋膜肌肉組織（2 cm×2 cm），立即放入10%甲醛溶液中固定，常規(guī)脫水后石蠟包埋切片，行HE染色，鏡下觀察病理組織變化，以確定是否成模。造模成功后，模型組灌胃等體積純化水，陽性藥組灌胃復方丹參片1.1 g/kg，腰痹舒膠囊高、中、低劑量組分別灌胃生藥10.4、5.2、2.6 g/kg，每日1次，連續(xù)7 d。末次給藥1 h后，處死全部大鼠，測定血液流變學指標，同時取腰部皮下筋膜肌肉組織進行病理觀察，方法同上。

1.6 統(tǒng)計學處理 應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，行t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 各組小鼠扭體反應潛伏期及扭體反應次數(shù)的比較 見表1。與模型組比較，陽性藥組、腰痹舒膠囊高劑量組、腰痹舒膠囊中劑量組小鼠扭體反應潛伏期延長，且扭體反應次數(shù)減少（P<0.01），腰痹舒膠囊低劑量組小鼠僅扭體潛伏期延長（P<0.05）。

表1 各組小鼠扭體反應潛伏期及扭體反應次數(shù)的比較（±s）

表1 各組小鼠扭體反應潛伏期及扭體反應次數(shù)的比較（±s）

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

images/BZ_62_1310_1564_2315_1631.png模型組陽性藥組腰痹舒膠囊高劑量組腰痹舒膠囊中劑量組腰痹舒膠囊低劑量組30.6±7.7 23.2±5.7**25.8±6.6**26.8±4.7**28.3±9.1 10 10 10 10 10 3.5±0.7 5.3±1.9**4.9±0.8**4.7±1.0**4.3±0.7*

2.2 各組大鼠血液流變學指標的比較 見表2。與空白對照組比較，模型組大鼠的血黏度、血漿黏度、血細胞比容、還原黏度、紅細胞變形指數(shù)以及紅細胞剛性指數(shù)均顯著升高（P<0.05或P<0.01）；與模型組比較，陽性藥組大鼠高切全血黏度、高切還原黏度、紅細胞聚集指數(shù)、紅細胞變形指數(shù)和紅細胞剛性指數(shù)均顯著降低（P<0.05或P<0.01）；腰痹舒膠囊高劑量組及腰痹舒膠囊中劑量組大鼠低切全血黏度和低切還原黏度均顯著降低（P<0.05或P<0.01）。

表2 各組大鼠血液流變學指標比較（±s）

表2 各組大鼠血液流變學指標比較（±s）

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與空白對照組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

images/BZ_63_165_422_2252_552.png 空白對照組模型組陽性藥組腰痹舒膠囊高劑量組腰痹舒膠囊中劑量組腰痹舒膠囊低劑量組5.85±1.19 7.61±0.74△△6.14±0.95*7.42±1.43 7.26±1.01 7.63±0.96 10 8 10 10 10 10 4.84±0.52 7.08±0.65△△6.18±0.68*7.05±0.92 6.77±0.62 6.71±0.56 10.59±0.57 13.03±0.58△12.26±0.66 11.94±0.95**12.00±0.95**12.77±0.51 1.58±0.06 1.78±0.12△1.81±0.08 1.76±0.15 1.75±0.10 1.71±0.16 0.36±0.01 0.39±0.01△△0.40±0.012 0.39±0.01 0.39±0.02 0.40±0.02 10.8±1.4 15.5±2.0△△13.2±1.7*14.3±1.8 14.6±1.7 15.4±2.5 27.0±1.7 30.8±2.5△△28.7±1.6 27.9±2.6*27.7±2.0**29.4±2.3 1.01±0.09 1.08±0.06 0.98±0.08*1.05±0.11 1.05±0.07 1.08±0.06 6.74±0.58 7.34±0.30△△6.78±0.43**6.82±0.83 6.88±0.79 7.52±0.62

2.3 各組大鼠組織病理學指標的比較 圖1～圖3示空白組皮下膠原、肌組織、脂肪組織均顯示正常，未見淋巴細胞浸潤。圖4～圖7示模型組皮下膠原、肌組織、脂肪組織，顯示肌纖維變性、壞死，纖維化伴淋巴細胞浸潤、橫紋肌灶性萎縮、壞死提示造模成功。圖9顯示灌胃1周后腰痹舒膠囊組纖維間質水腫，少許淋巴細胞浸潤；圖10顯示模型組自然愈合1周后，纖維間質水腫，少許淋巴細胞浸潤。兩組對比無明顯差異。

圖1 空白組皮下膠原

圖2 空白組正常肌組織

圖3 空白組正常脂肪組

圖4 模型組皮下膠原（400倍）

圖5 模型組肌組織（200倍）

圖6 模型組肌組織（200倍）

圖7 模型組脂肪組織（400倍）

圖8 腰痹舒膠囊組（400倍）

圖9 腰痹舒膠囊組（400倍）

圖10 模型組（100倍）

3 討 論

腰痛又稱“腰脊痛”，為臨床上常見病，多因外感六淫之邪，或因勞傷、閃挫，或因腎氣不足等導致局部氣血運行不暢，腰府失養(yǎng)、筋脈拘急，造成以椎旁或棘間、棘上疼痛為主的一類病癥［6］。重慶地處西南，陰冷潮濕，以寒濕痹阻型多見［7］。中醫(yī)藥在治療寒濕痹阻型腰痛方面具有明顯優(yōu)勢，有艾灸、電針、山火拍打法、掌擦法、火罐等中醫(yī)外治法［8-9］，此外也有以中藥腎著湯、溫經通絡湯、干姜術苓湯、薏仁蠲痹湯等療法［10-11］，并取得了可觀的療效。全國名中醫(yī)郭劍華教授擅長于頸肩腰腿痛等疑難病癥的治療，在長期的臨床實踐中逐漸形成了治療寒濕痹阻型腰痛的經驗方“腰痹舒湯”，并進一步開發(fā)成了膠囊劑，以方便患者服用［3］。腰痹舒膠囊由干姜、炒白術、茯苓、炙甘草、白芍、桑寄生、獨活、牛膝8味藥組成，干姜溫經止血、溫中止痛為君藥；炒白術、茯苓、白芍補脾益氣為臣藥，桑寄生、獨活、牛膝善于祛風除濕，通痹止痛為佐藥；炙甘草調和藥性為使藥，以上諸藥共奏祛寒濕、活血止痛之效?，F(xiàn)代研究表明，干姜中所含姜酚類化合物能抑制二甲苯致耳腫脹［12］，對二磷酸腺苷、花生四烯酸、腎上腺素、膠原引起的血小板聚集也有良好的抑制作用［13］；白術內酯Ⅰ能抑制LPS刺激的RAW264.7細胞中的炎性細胞因子［14］，白術多糖可調節(jié)巨噬細胞活性，增強特異性體液免疫應答［15］；牛膝總皂苷具有明顯抗炎鎮(zhèn)痛作用，其中廣東土牛膝乙醇提取液對蛋清致大鼠足跖腫脹、棉球肉芽腫增生的抑制作用優(yōu)于阿司匹林［16］；白芍總提物對抑制炎性水腫和炎性滲出均有很好的效果［17］。

本研究結果顯示，腰痹舒膠囊低劑量能延長冰醋酸所致小鼠扭體反應潛伏期，高、中劑量不僅能顯著延長潛伏期，還能明顯減少小鼠扭體反應次數(shù)。在大鼠血液流變學試驗中，高、中劑量能明顯降低寒濕痹阻模型大鼠的低切全血黏度和低切還原黏度，且高切還原黏度也呈降低趨勢，表現(xiàn)其具有一定的活血化瘀作用。進一步組織病理學分析發(fā)現(xiàn)，腰痹舒膠囊各組與模型組自然愈合無明顯差異。綜上所述，腰痹舒膠囊有一定的活血化瘀及鎮(zhèn)痛作用，其活血化瘀作用可能與降低低切全血黏度和低切還原黏度有關。其具體機制還有待從細胞及分子生物學水平進行深入研究。