全自動(dòng)血紅蛋白電泳在地中海貧血篩查中的應(yīng)用價(jià)值

朱國勝，邱麗影，林立鵬，方小龍

（深圳市福田區(qū)婦幼保健院，廣東 深圳 518048）

0 引言

臨床中，貧血主要指血液紅細(xì)胞總量顯著低于正常水平，屬于一種常見病癥。由于誘發(fā)貧血的原因較多且發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，所以貧血類型往往存在較大的差異[1]。對貧血患者實(shí)施治療時(shí)，多需要結(jié)合患者的臨床癥狀和體征，并與貧血的類型特點(diǎn)相結(jié)合，繼而擬定針對性的治療方案。與此同時(shí)，不同類型的貧血在實(shí)施血常規(guī)檢查時(shí)，尤其是地中海貧血和缺鐵性貧血在進(jìn)行檢查時(shí)，往往采用血常規(guī)檢測的難度較大，所以積極探尋貧血患者的診斷和鑒別措施具有重要意義[2]。地中海貧血在嬰兒中較為常見，亦被叫做海洋性貧血，屬于溶血性貧血、遺傳性貧血疾病，對患者生命健康有極大威脅[3]。臨床治療地中海貧血患者中，并無特效藥治療，為降低疾病發(fā)病率，主要通過篩查育齡夫婦方式，判斷其有無攜帶情況[4]。而在診斷方面，血紅蛋白疾病的篩查可選擇全自動(dòng)血紅蛋白電泳方式，這種診斷篩查近年來被廣泛應(yīng)用，可為臨床診療工作提供有效參考[5]。本次研究將采用回顧性分析方法，對醫(yī)院血液檢查者8950 例利用全自動(dòng)血紅蛋白電泳診斷結(jié)果進(jìn)行總結(jié)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年1 月至2019 年12 月深圳市福田區(qū)婦幼保健院就診的產(chǎn)前檢查夫婦8950 例，其中男4096 例，女4854 例。所有研究對象同時(shí)進(jìn)行血常規(guī)檢測與Hb 電泳檢測，如血常規(guī)檢查結(jié)果紅細(xì)胞容積降低，血紅蛋白成分檢測有異常，則進(jìn)行地中海貧血基因檢測。

1.2 方法

用EDTA-K2 抗凝管采集靜脈血2 管，每管2mL，用于血常規(guī)及血紅蛋白電泳檢測。

血常規(guī)檢測：采用邁瑞B(yǎng)C-6800 全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀測定。

血紅蛋白電泳：采用全自動(dòng)血紅蛋白電泳儀（生產(chǎn)廠家為Sebia 公司）及配套試劑。將標(biāo)本離心，去血漿，上電泳儀，分析血紅蛋白組分。正常成人男女參考值為2.5%≤HbA2 ≤3.5%，HbF ≤2.0%，且無異常血紅蛋白條帶。如HbA2<2.5%，則懷疑為α-地中海貧血；如HbA2>3.5%或HbF>2.0%且出現(xiàn)異常條帶，則為疑似β-地中海貧血[6]。對于血紅蛋白電泳篩查疑似地中海貧血樣本則進(jìn)行地貧基因檢測，測試主要通過α-地中海貧血基因檢測試劑盒（缺失型）以及β-地中海貧血檢測試劑盒實(shí)現(xiàn)。

2 結(jié)果

2.1 全自動(dòng)血紅蛋白電泳篩查結(jié)果

8950 例樣本中，血紅蛋白電泳檢驗(yàn)呈陽性結(jié)果的共942 例，占10.53%，疑似α-地中海貧血767 例（8.57%），疑似β-地中海貧血175 例（1.96%）。

2.2 基因診斷結(jié)果

對767例疑似α-地中海貧血患者和175例疑似β-地中海貧血患者進(jìn)行基因診斷，確診α-地中海貧血患者388 例（4.34%），Hb 電泳與基因檢測的符合率為50.59%；確診β-地中海貧血175 例（1.96%），Hb電泳與基因檢測的符合率為100%。見表1。

3 討論

地中海貧血是一組遺傳性血液病，由一個(gè)或多個(gè)血紅蛋白鏈合成缺陷引起。α-地貧是由α 珠蛋白鏈合成減少或缺乏引起的，β-地貧是由β 珠蛋白鏈合成減少或缺乏引起的[7]。球蛋白鏈的不平衡引起溶血，損害紅細(xì)胞生成。地中海貧血的沉默攜帶者和具有地中海貧血特征的人是無癥狀的，不需要治療。中間型-地中海貧血，或血紅蛋白H 病，會引起溶血性貧血；伴有巴特血紅蛋白的大地中海貧血通常會導(dǎo)致致命的胎兒水腫[8]。主要的地中海貧血在嬰兒期會引起溶血性貧血、生長不良和骨骼異常，受影響的兒童需要終身定期輸血。中間型地中海貧血病比重度地中海貧血病輕，可能需要間歇輸血[9]。輸血依賴的患者會出現(xiàn)鐵超載，需要進(jìn)行螯合治療以清除多余的鐵。骨髓移植可以治愈一些患有嚴(yán)重地中海貧血的兒童。地中海貧血患者應(yīng)接受孕前遺傳咨詢，具有α-地中海貧血特征的人應(yīng)考慮進(jìn)行絨毛膜絨毛取樣，以診斷嬰兒是否患有血紅蛋白巴特氏綜合征，這增加了毒血癥和產(chǎn)后出血的風(fēng)險(xiǎn)。具有地中海貧血特征的人有正常的預(yù)期壽命[10]，但重度地中海貧血患者通常在30 歲前死于鐵超載引起的心臟并發(fā)癥。為此，為了減少地中海貧血的影響，提高患者生存率，需要采用一種有效的方式進(jìn)行疾病篩查，及時(shí)、準(zhǔn)確地發(fā)現(xiàn)地中海貧血疾病病例，并進(jìn)行準(zhǔn)確的病情預(yù)測，制定有效治療方案。

臨床中，血液珠蛋白產(chǎn)生出現(xiàn)障礙而導(dǎo)致的貧血性疾病被稱之為地中海貧血，其中多為遺傳學(xué)貧血。換言之，地中海貧血是由于基因缺陷而導(dǎo)致的貧血性疾病，具有復(fù)雜性和多樣性等特點(diǎn)，所以導(dǎo)致合成血紅蛋白過程中珠蛋白肽鏈也存在著一定的差異性，且患者發(fā)病時(shí)均無顯著臨床癥狀[11]。具體而言，地中海貧血是臨床常見的常染色體隱性遺傳病，發(fā)病原因歸結(jié)于珠蛋白基因突變、基因缺失等，造成珠蛋白肽鏈一種或幾種合成減少或不能合成，使形成血紅蛋白的α 鏈和非α 鏈比例失衡，從而引發(fā)溶血性貧血，危及患者身心健康，且嚴(yán)重影響生活質(zhì)量[12]。我國廣西、廣東、海南等省區(qū)為高發(fā)地區(qū)，廣東省戶籍人群地貧基因平均攜帶率為16.8%，其中13.31%為α-地貧突變，4.53%為β-地貧突變[4]。由于地貧的高發(fā)生率及治療困難，故把握婚檢、孕檢、產(chǎn)檢的地貧篩查與診斷三道關(guān)是控制地貧的有效措施。目前，地中海貧血基因檢測是診斷該病的金標(biāo)準(zhǔn)，由于基因檢測的成本明顯高于其他檢測方法，不適用于常規(guī)檢查，也無法對人群進(jìn)行普查，因此，常用方便、耗時(shí)短、成本低的血常規(guī)與血紅蛋白電泳檢測進(jìn)行地中海貧血篩查[13]。全自動(dòng)血清蛋白電泳(automatic serum albumen electrophoresis),蛋白因分子大小和表面電荷的差別而以不同速度在直流電場泳動(dòng)分離稱蛋白電泳,而結(jié)果主要是根據(jù)其各類蛋白組分的高低變化，提示內(nèi)容主要包括：低γGlb 血癥的可能、低蛋白血癥的可能、肝功能障礙、肝臟疾病、高γGlb血癥的可能、急性炎癥、慢性炎癥、營養(yǎng)不良和M 蛋白等項(xiàng)[14-15]。使用全自動(dòng)血清蛋白電泳定量分析并檢測地中海貧血可以從蛋白質(zhì)的方面進(jìn)行檢測和分型，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)屬于良性電解質(zhì)，具有等電點(diǎn)，因此，蛋白質(zhì)在ph 值高于等電點(diǎn)時(shí)會帶上負(fù)電，ph 值低于等電點(diǎn)時(shí)則會帶上正電，具有差異的蛋白質(zhì)存在不一樣的等電點(diǎn)，在電泳作用下會在等電點(diǎn)處聚集，使得蛋白質(zhì)被分離出不同的種類。如此可在電泳作用后出現(xiàn)具有差異性的條帶，在進(jìn)行完條帶脫色后就可從顏色深淺上去進(jìn)行蛋白質(zhì)含量的判斷。

通過血紅蛋白電泳能夠定量分析血紅蛋白成分包括HbF、HbA 與Hb A2,還可篩查出異常血紅蛋白，根據(jù)Hb A2 含量與是否出現(xiàn)異常血紅蛋白，可對地中海貧血進(jìn)行初步分類，為地中海貧血的基因診斷與遺傳咨詢提供基礎(chǔ)[16]。

本文通過回顧8950 例樣本血紅蛋白電泳篩查結(jié)果顯示,在我院育齡人群中地中海貧血初篩陽性率為10.53%，血紅蛋白電泳檢驗(yàn)呈陽性結(jié)果的共942例，疑似α-地中海貧血767 例（8.57%），疑似β-地中海貧血175 例（1.96%），與陳忠領(lǐng)[17]關(guān)于深圳育齡人群地中海貧血初篩陽性率相近。本研究的基因診斷結(jié)果顯示，α-地貧的初篩符合率只有50.6%，β-地貧的初篩符合率達(dá)到100%。這是由于β-地中海貧血患者中，β 珠蛋白基因缺陷，β 鏈合成減少，而δ 珠蛋白基因表達(dá)產(chǎn)物相對增多，與α 珠蛋白鏈結(jié)合形成Hb A2(α2δ2)，Hb A2 含量增高明顯。α-地貧的初篩符合率低，可能是因?yàn)槿辫F使Hb A2 含量降低，或本研究只檢測缺失型α-地貧，未檢測突變型α-地貧。值得注意的是，在研究過程中，發(fā)現(xiàn)有部分樣本血常規(guī)MCV、MCH 指標(biāo)下降，但血紅蛋白電泳篩查中Hb A2 正常，這說明血紅蛋白電泳對α-地貧的篩查存在漏診的可能，王玉霞[18]的研究探討血紅蛋白A2 在靜止型和標(biāo)準(zhǔn)型α-地中海貧血篩查中的價(jià)值，也表明MCV 和MCH 兩項(xiàng)指標(biāo)篩查陽性的可疑地貧患者中靜止型和標(biāo)準(zhǔn)型α-地貧陽性率為39.96%，其中Hb A2 正常者達(dá)83.05%。血紅蛋白電泳對α-地貧，尤其是靜止型和標(biāo)準(zhǔn)型α-地貧的篩查存在假陰性或假陽性。

綜上所述，地中海貧血篩查中，全自動(dòng)血紅蛋白電泳結(jié)合血常規(guī)檢測成本低、操作簡單，可對地中海貧血進(jìn)行初步分類，為地中海貧血的診斷提供了重要依據(jù)，同時(shí)也可為婚前、產(chǎn)前優(yōu)生優(yōu)育指導(dǎo)的開展奠定基礎(chǔ)；但其對α-地貧存在一定漏診，必要時(shí)應(yīng)進(jìn)行基因檢測。