貴州半細毛羊胚胎移植效果

郭振剛, 吳 瑛, 吳 萍, 彭 華,周大榮, 吳蕊汝, 宋德榮

(畢節市畜牧獸醫科學研究所，貴州 畢節 551700)

0 引言

【研究意義】羊的MOET(Multiple Ovulationand Embyo Transfer)技術即超數排卵和胚胎移植技術，是將超數排卵與胚胎移植相結合而發展起來的一項快繁技術，能顯著提高羊的繁殖效率，在國內外羊的育種中得到廣泛應用[1]。貴州半細毛羊是以歷代羊為母本，羅姆尼羊和美利奴羊等為父本，經過 36年培育而成的肉毛兼用型綿羊新品種，該品種的培育為豐富貴州地區綿羊品種資源以及增加牧民的養殖收益、助力脫貧攻堅作出了積極貢獻[2]。但貴州半細毛羊繁殖率低，僅為117.58%，屬于秋季短日照發情綿羊品種，其生產節律為秋季配種，春季產羔，每年的2-7月為乏情期，空懷間隔時間長，嚴重影響和制約貴州半細毛羊的產業發展[3]。因此，引進繁殖率高的湖羊品種與貴州半細毛羊開展雜交，利用胚胎移植技術加快貴州半細毛羊多胎新品種培育具有積極意義?！厩叭搜芯窟M展】胚胎移植技術作為一項新的高效繁殖技術，為家畜迅速良種化提供了新的途徑，已廣泛應用于生產并發揮了巨大的商業價值[4-6]。目前，有關肉羊胚胎移植的季節因素、供受體選擇、同期發情處理方法和高繁品種利用等方面已有一定的研究報道。宮旭胤等[7]研究表明，供體羊和受體羊冬季的發情率均顯著高于春季，供體羊可利用卵子個數冬季高于春季，受體羊的受胎率冬季和春季差異不顯著，冬季受體羊的繁殖率顯著高于春季。何立雄等[8]采用PG+FSH方法對20只薩福克羊進行超數排卵處理,超排有效率為100%；采用2次PG注射法對100只哈薩克綿羊進行同期發情處理,24 h發情率為95%;胚胎移植后妊娠率為76.47%。陶薩茹拉等[9]采用遞減法注射FSH進行超排處理，經同期發情、超數排卵及人工授精等過程后,胚胎合格率達89.28%，受體羊發情率達95%，受胎率為67.03%,繁殖率為71.06%。魏立明等[10]以國外優良肉羊品種杜泊和薩福克羊為供體、甘肅高山細毛羊為受體進行肉羊胚胎移植的妊娠率、產羔率、繁殖率和繁殖成活率分別為57.29%、99.52%、52.51%和52.26%，胚胎移植肉羊生長發育良好?！狙芯壳腥朦c】關于貴州半細毛羊的胚胎移植效果與研究目前未見報道，因此，研究其胚胎移植效果可為貴州半細毛羊的同期發情、胚胎移植等技術提供應用參考?！緮M解決的關鍵問題】以貴州半細毛羊作為試驗供體和受體，采用埋置孕酮栓結合注射PMSG、FSH的方法，對供體和受體羊分別進行同期發情處理，研究發情配種后貴州半細毛關的胚胎移植效果，以期為加快其多胎新品種培育進程及胚胎移植技術的推廣應用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物 供試母羊為貴州半細毛羊，配種公羊為湖羊，均由貴州新烏蒙公司提供。 供體羊10只，遺傳能力穩定，無遺傳疾病和傳染病，體質健壯，發情周期正常，發情癥狀明顯，年齡2～4周歲；受體羊20只，體型較大，哺乳力強，母性好，健康無疾病，年齡2～4周歲。

1.1.2 試驗藥品和器械 試驗藥品包括孕馬血清促性腺激素(PMSG)、促卵泡素(FSH)、海綿陰道栓、PBS緩沖液、Holding液、生理鹽水、酒精、碘酒、青霉素及新吉爾滅等，器械設備包括顯微鏡、恒溫水浴鍋、恒溫箱、高壓滅菌鍋、手術創布、手術刀、手術剪、止血鉗、三棱針、持針鉗、手術架及鑷子等。

1.2 方法

1.2.1 羊只同期發情與超數排卵處理

1) 供體：2020年10月13日下午埋置陰道栓，放栓當天記為0 d，第10天開始注射FSH，2次/d，間隔12 h注射1次,連續注射3 d。FSH注射總量為270 U/只，按劑量遞減方式，第1天60 U，第2天45 U，第3天30 U。在第5次注射FSH的同時注射PMSG 330 U，注射后撤除陰道栓。撤栓后12 h試情，羊發情后配種，做好記錄。配種后6.5 d手術采胚。

2) 受體：2020年10月13日下午埋置陰道栓，放栓當天記為0 d。第12天上午撤栓，同時注射PMSG 330 U，12 h后試情，做好記錄。

1.2.2 供體羊發情配種與受體羊試情 配種采取人工輔助自然交配方式進行。首先采用試情法鑒定母羊發情，將腹部捆好布兜的試情公羊與試驗母羊按照1∶30的比例混群，觀察母羊的發情表現，如母羊接受試情公羊爬跨，即被認為發情。試情時間每天早上8:00和晚上18:00各 30 min。然后對發情母羊用精神旺盛、體質健壯、外生殖器官健康的湖羊公羊采取人工輔助自然交配方式配種，同時記錄羊只耳號及發情時間。受體羊試情鑒定方法同上，但不配種。

1.2.3 胚胎采集 供體羊在配種后6.5 d手術沖胚。方法：將供體母羊固定在手術架上，術部剃毛、消毒，打開術口，檢查黃體，沖胚(子宮角法)，術口縫合、消毒，下手術臺。術后觀察創口恢復情況，肌肉注青霉素1～3 d。

1.2.4 胚胎鑒定 把盛有沖胚回收液的表面皿放在立體顯微鏡下仔細觀察，收集胚胎轉移至裝有Holding液的培養皿中暫時保存，并對胚胎進行鑒定、劃分等級。

1.2.5 胚胎移植 采用手術法對受體羊進行胚胎移植。移植部位與供體母羊沖胚部位一致。觀察受體黃體發育情況，淘汰無黃體的受體羊。抽好胚胎以后，將受體羊黃體發育良好一側的子宮角取出將胚胎移植進去，移植好后將子宮輕輕塞進腹腔，將創口縫合、消毒。

2 結果與分析

2.1 供體羊超數排卵效果

由表1可見，10只供體羊全部發情配種，共收集胚胎106枚，平均沖胚10.60枚/只，可用胚胎73枚，平均可用胚胎7.3枚/只，胚胎合格率為68.87%。

表 1 貴州半細毛羊供體羊的胚胎采集數及合格率

2.2 供體和受體羊同期發情情況

同期發情共處理供體和受體羊30只，其中采用公羊試情法鑒定發情29只，同期發情率達96.67%。

2.3 胚胎移植效果

由表2可見，在可用胚胎中挑選36枚優質胚胎移植到19只受體羊，術后3個情期內共計觀察到有8只受體羊返情，返情率為42.11%，以不返情為標準確認為妊娠，妊娠率為57.89%，其中雙胚胎妊娠率為52.38%。

表 2 貴州半細毛羊胚胎移植數及妊娠率

3 討論

試驗采用的同期發情處理方案，是在貴州半細毛羊上2次優化而成。研究結果表明，貴州半細毛羊同期發情率達96.67%，高于茹婷等[11]在巴美肉羊上采取相同方法獲得的94%，也高于方案優化前郭振剛等[12]在秋季貴州半細毛羊上采用相同方法獲得的95%。10只貴州半細毛羊供體共計獲得胚胎106枚，平均沖胚10.60枚/只，平均可利用胚胎7.3枚/只，高于閆振富等[13]超排的可用胚胎6枚/只、陶薩茹拉等[9]超排的可用胚胎6.36枚/只和奧旭東等[14]超排的可用胚胎4.45枚/只，達國內平均水平?？赡苁琴F州半細毛羊的發情期集中在10月和處理方案較優所致。

試驗中，挑選優質胚胎36枚移植到19只受體羊，在術后3個情期內共計觀察到有8只受體羊返情，返情率為42.11%，以不返情為標準確認為妊娠，則妊娠率為57.89%，且雙胚胎妊娠率高達52.38%。該試驗結果低于陶薩茹拉等[15]研究的妊娠率61.83%；高于奧旭東等[14]研究的妊娠率53.67%，但是雙胚胎妊娠率低于其65.02%的結果。國內綿羊鮮胚移植妊娠率在54.4%～60.0%，此次研究的妊娠率為57.89%，試驗結果高于國內平均水平，超排效果明顯。

4 結論

采取埋置孕酮栓+PMSG法進行同期發情和遞減法注射FSH進行超數排卵、自然交配等處理后，同期發情率達96.67%，平均沖胚10.60枚/只，平均可用胚胎7.3枚/只，胚胎合格率為68.87%，在可用胚胎中挑選36枚優質胚胎移植到19只受體羊，術后3個情期內返情率為42.11%，妊娠率為57.89%，雙胚胎妊娠率為52.38%。試驗對貴州半細毛羊開展胚胎移植技術推廣提供了參考依據。