四川省兩棲類新記錄
——畢節掌突蟾

王平，劉洋，黃偉，劉傳炯

(1.四川省林業科學研究院，成都610081；2.畫稿溪國家級自然保護區管理處，四川瀘州646405)

2020年4月，在四川瀘州畫稿溪國家級自然保護區內海拔660 m的溪流附近，采集到4號(標本號:HGX2020022～HGX2020025)角蟾科Megophryidae標本(圖1)，周圍環境為苦竹Pleioblastusamarus與落葉闊葉混交林，微生境為流水崖壁下、石下以及有流水的草本植物叢中。結合分子系統發育重建及形態比較，確定該4號標本為角蟾科掌突蟾屬Leptobrachella的畢節掌突蟾Leptobrachellabijie，系四川省兩棲類新記錄種。

1 方法

根據費梁和葉昌媛(2001)的測量方法，對4號標本進行了測量與記錄，其他物種的形態數據來自Wang等(2019)。

將其中2號標本利用OMEGA試劑盒提取DNA，利用引物L3957/H4551(Simonetal.，1994)擴增16SrDNA基因序列。擴增體系為25 μL，95 ℃ 5 min；94 ℃ 40 s，53 ℃ 40 s，72 ℃ 1 min，35個循環；72 ℃ 7 min，10 ℃結束。擴增產物送蘇州金唯智公司測序，利用LaserGene.v7.1(DNASTAR Inc.，美國)及MEGA 7(Kumaretal.，2016)對獲得的序列進行處理。基于測序獲得的序列片段、在NCBI上下載的部分掌突蟾屬物種以及外群東方鋤足蟾Pelobatessyriacus、摩洛哥鋤足蟾Pelobatesvaraldii序列，利用MrBayes 3.2.2(Ronquistetal.，2012)，最佳進化模型為GTR+I+G，由Partitionfinder 2.1.1基于Akaike Information Criterion (AIC)計算所得，及RaxmlGUI 1.5(Silvestro &Michalak，2012)，模型為GTRGAMMA，bootstrap設為1 000，其他參數保持默認，分別重建所采集標本的貝葉斯法和最大似然法系統發育關系樹。同時利用MEGA 7計算物種及種群間的遺傳距離，使用模型為Kimura 2-parameter，其他參數保持默認。

2 結果

4號標本體長為30.5～33.6 mm；背部棕褐色，具小疣粒；體側具稀疏的不規則黑斑點；腿及前臂背面具3～4條褐色橫紋；前后肢腹面紫黑色，具較密集的不規則灰白色斑點；腹部白色，具淡灰色斑點；腋腺白色；指間無蹼，趾間微蹼。

獲得2條16SrDNA堿基序列，長度為564 bp。重建的貝葉斯系統發育樹和最大似然樹一致顯示，該4號標本與畢節掌突蟾的模式標本聚為一支(圖2)，并享有0.7%的遺傳距離。

3 討論

結合形態比較及分子系統發育研究，本次采自畫稿溪國家級自然保護區的4號標本均為畢節掌突蟾，為四川省兩棲類新記錄。

掌突蟾屬具有非常高的潛在物種多樣性，近幾年，我國學者至少描述了該屬17個新種(中國兩棲類，2020)。另一方面，掌突蟾屬物種形態保守性非常高，使得僅靠形態比較進行分類研究往往導致誤鑒定，不同的物種常常被鑒定為同一物種，并認為其廣泛分布。利用綜合的研究手段對掌突蟾屬物種進行分類與分布研究應該提上日程。

致謝：本工作得到了畫稿溪國家級自然保護區的支持，四川農業大學陳重光在野外工作中的幫助，宜賓學院郭鵬教授在分子實驗上的幫助，在此一并致謝！