根施硒肥對藤茶二氫楊梅素含量與硒含量的影響

張朝陽，黃光昱，陳永波，胡百順，秦 邦，劉淑琴，陳 娥，龐旭娟，譚坤林

（湖北省恩施土家族苗族自治州農業科學院，湖北 恩施445000）

藤茶，俗稱長壽藤、茅巖莓茶、龍須茶等，為葡萄科蛇葡萄屬木質藤本植物顯齒蛇葡萄［Ampelopsis grossedentata（Hand.-Mazz.）W.T.Wang］，主要分布于中國長江流域以南的湖南、湖北、江西、貴州、福建、廣東等地［1］，2013年由國家衛計委根據有關規定批準成為新食品原料。藤茶含黃酮類、酚類、氨基酸（17種）、多糖、甾體、揮發油等多類物質［2］，其中尤以二氫楊梅素含量高而出名，藥理研究表明，二氫楊梅素有抗炎、抑菌、抗氧化、降血糖血脂、保肝護肝等作用［3-12］。

近年來，藤茶中二氫楊梅素的研究一直是熱點問題。常敬芳等［13］、馮淳等［14］分別建立了HPLC測定顯齒蛇葡萄中黃酮類化合物的方法。熊偉等［15］研究了熱水浸提法同步提取藤茶中二氫楊梅素和多糖的工藝。張明生等［16］分析了江口縣顯齒蛇葡萄中二氫楊梅素和楊梅素的含量。石治敏［17］研究了顯齒蛇葡萄中二氫楊梅素的制備及其抗氧化活性。目前，對藤茶二氫楊梅素的研究主要集中在提取、測定、抗氧化活性等方面，對不同采收期藤茶二氫楊梅素含量與硒含量關系研究較少，本研究在前期根施硒肥對藤茶硒含量研究［18］的基礎上，繼續深入研究根施硒肥對藤茶二氫楊梅素的影響，以期對藤茶的生產提供理論指導。

1 材料與方法

1.1 儀器和材料

高效液相色譜儀（賽默飛世爾科技公司，UltiMate 3000）；原子熒光光度計（北京吉天儀器公司，AFS-930d）；分析天平（賽多利斯公司，SQP）。二氫楊梅素對照品（上海安譜實驗科技股份有限公司，10270010）；硒標準溶液（國家有色金屬及電子材料分析測試中心，20D3724）。藤茶采于恩施州來鳳縣綠水鎮老寨村試驗基地，干燥粉碎后過40目篩密封備用。

1.2 試驗設計

采用隨機區組試驗，試驗變量為富硒生物有機肥，共設5個處理，CK為空白對照，A、B、C、D對應的富硒生物有機肥使用量分別為750、1 500、2 250、3 000 kg/hm2；每個處理3次重復，共15個小區，每個小區面積84 m2，小區間設保護行相隔。

1.3 硒含量測定

按照GB 5009.93—2017［19］的規定執行。

1.4 二氫楊梅素含量測定

采用Kromasil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為甲醇-0.15%磷酸水溶液（55∶45），柱溫25℃，紫外檢測波長291 nm，流速1 mL/min，進樣量10 μL。

2 結果與分析

2.1 藤茶二氫楊梅素含量測定

由表1可知，不同施肥處理條件下，藤茶二氫楊梅素含量最高為8月5日AⅡ處理，達49.39%，最低為10月5日DⅡ處理（7.68%），硒含量最高為6月5日DⅡ處理，達到4.54 mg/kg，最低為6月5日CKⅢ處理（0.02 mg/kg）。二氫楊梅素測定HPLC圖譜見圖1。

圖1 二氫楊梅素對照品（左）及樣品溶液（右）HPLC圖譜

表1 藤茶二氫楊梅素含量測定結果

2.2 采收期對藤茶二氫楊梅素含量的影響

由圖2可知，同一施肥處理不同采收期藤茶二氫楊梅素含量不同，8月5日藤茶二氫楊梅素平均含量最高，10月5日藤茶二氫楊梅素平均含量最低，且除C處理6月5日藤茶二氫楊梅素平均含量略高于7月5日外，其他各處理藤茶二氫楊梅素平均含量均呈先升后降的趨勢。

圖2 不同采收期藤茶二氫楊梅素平均含量比較

2.3 不同施肥處理對藤茶二氫楊梅素的影響

由表1可知，除10月5日采收期外，其他采收期藤茶二氫楊梅素含量均大于20%。對同一采收期不同處理藤茶二氫楊梅素含量數據進行方差分析，由

表2可知，同一采收期藤茶二氫楊梅素含量組間F值分別為1.801、0.294、1.079、2.640、0.568，P均大于0.05，對各組間進行多重比較發現，各組間存在不同程度差異。由圖2可知，同一采收期不同處理藤茶二氫楊梅素平均含量不同，但基本呈先升后降的趨勢，除7月5日外，其他采收期CK、A、B、C處理藤茶二氫楊梅素平均含量均大于D處理，且所有采收期內藤茶二氫楊梅素平均含量最高處理均在A、B、C、D處理內，5個不同采收期中，二氫楊梅素平均含量最大的處理分別為C、D、A、B、A處理。

表2 藤茶二氫楊梅素含量方差分析

2.4 二氫楊梅素含量與硒含量相關性

對6月5日、7月5日藤茶二氫楊梅素含量、硒含量相同處理平均數作圖進行分析，計算相關系數。利用公式Cov（X，Y）=E［（X-E［X］）（Y-E［Y］）］計算藤茶二氫楊梅素含量、硒含量協方差，其中X、Y分別代表二氫楊梅素、硒含量測定值，［X］、［Y］分別代表二氫楊梅素、硒含量平均值。

利用下列公式計算藤茶二氫楊梅素含量、硒含量相關系數，其中Cov（X，Y）為X、Y的協方差，D（X）、D（Y）分別為X、Y的方差，經計算6月5日、7月5日藤茶二氫楊梅素含量、硒含量相關系數分別為-0.34、0.40。

相關系數絕對值均小于0.50，說明藤茶二氫楊梅素含量與硒含量間相關性不顯著，同時由圖3、圖4可知，藤茶硒含量隨硒肥施用量增加呈上升趨勢，圖3中藤茶二氫楊梅素含量隨硒肥施用量的增加呈先升后降的趨勢，且A、B、C處理二氫楊梅素含量高于CK處理，CK處理二氫楊梅素含量高于D處理。圖4中藤茶二氫楊梅素含量隨硒肥施用量的增加呈先升后降再升的趨勢，且A、B、C、D處理二氫楊梅素含量均高于CK處理，結合相關分析，說明適量硒肥對藤茶二氫楊梅素含量升高有促進作用。

圖3 6月5日藤茶二氫楊梅素含量和硒含量

圖4 7月5日藤茶二氫楊梅素含量和硒含量

3 小結與討論

不同采收期對藤茶二氫楊梅素含量有不同程度影響。黃建華等［20］研究表明，藤茶二氫楊梅素含量呈月遞減趨勢，4月最高，6月最低。雷華平等［21］研究表明，4—5月藤茶中總黃酮和二氫楊梅素含量最高，然后回落，8月有小高峰。本研究發現，6—10月藤茶二氫楊梅素含量呈先升后降的趨勢，8月達最高值，10月含量降至最低。因本試驗采集的藤茶樣品來自當年扦插苗，4—5月藤茶龍須較少，10月后溫度降低葉片脫落無龍須可采，故本研究只采集了6—9月的龍須、10月的普葉，不同部位對藤茶二氫楊梅素含量有影響［22，23］，可能是造成本研究與上述研究存在差異的原因。

同時，本研究分析了6月5日、7月5日藤茶二氫楊梅素含量與硒含量關系，發現適量硒肥對藤茶二氫楊梅素含量升高有促進作用，故藤茶在富硒栽培時需合理控制硒肥濃度。本研究只進行了根施硒肥對當年扦插藤茶二氫楊梅素含量與硒含量的影響，后期將繼續對多年生藤茶二氫楊梅素含量及抗氧化活性等方面進行研究，以期推動藤茶特色產業健康發展。