種禽場禽白血病和雞白痢監測與分析

文│趙明 梁建波 何宇乾 張嚴琦 尹斐斐 李彥（山東省青島市動物疫病預防控制中心）

禽白血病是由禽白血病病毒（Avirus leukosis virus， ALV）引起的禽的淋巴細胞白血病、成紅細胞白血病、髓性細胞白血病等多種腫瘤性疫病。宿主范圍廣，不同品種和品系的禽對病毒的感染差別較大。主要流行A、B、C、D、J、K和E亞群禽白血病，且外源性病毒較內源性病毒傳染性和致病性強。目前我國很多地方品種雞均有不同程度的單獨或混合感染A、B、J、K亞群禽白血病。

沙門氏菌既可引起人食源性疾病，也可對養禽業造成嚴重的威脅。雞白痢既可以水平傳播也可以垂直傳播，不同日齡的雞均可感染，雛雞發病率和死亡率較高，感染后可引起嚴重的敗血癥。成年雞常呈隱性感染，沒有明顯臨床癥狀，慢性或隱性帶菌雞長期排毒。

目前，禽白血病和雞白痢是種禽場主要的凈化疫病，部分種雞場存在禽白血病和雞白痢混合感染情況，而且兩種病具有協同致病作用，同時開展兩種疫病的凈化對提升雞場生產性能以及健康水平具有重要意義。本研究對青島市部分種禽場抽樣進行了禽白血病P27抗原和雞白痢抗體檢測，以了解青島市部分種禽場禽白血病和雞白痢感染和流行情況，為種禽場禽白血病和雞白痢凈化提供數據支持。

一、材料和方法

1.材料。

（1）血清樣品。來源于山東省青島市5個父母代白羽肉雞場，1個原種雞場。每個雞場采集種雞血清樣品200份，共計1200份，血清樣品用于雞白痢抗體的檢測。每只雞血清獨立放于無菌EP管中，冷藏保存，運輸至實驗室。

（2） 蛋液樣品。來源于4個父母代種雞場，每個種雞場采集蛋液樣品200份，共計800份。各吸取種蛋蛋液3～5毫升于無菌EP管中冷藏，運輸至實驗室。

（3）泄殖腔棉拭子樣品。來源于1個父母代種雞場，采集泄殖腔棉拭子200份。每只雞的泄殖腔棉拭子獨立保存于無菌EP管中，避免污染，冷藏運送至實驗室。蛋液和泄殖腔棉拭子用于禽白血病P27抗原ELISA的檢測。

2.試劑和儀器。

禽白血病抗原（P27）檢測試劑盒購于BioChick，雞白痢、雞傷寒多價染色平板凝集試驗抗原、（弱）陽性血清、（強）陽性血清購于北京中海生物科技有限公司，SPF雞陰性血清購于青島立見診斷技術發展中心。酶標儀NanoQuant購置Tecan公司。

3.方法。

（1）禽白血病抗原（P27）檢測方法。蛋液在使用前進行兩次凍融處理，試驗步驟參照說明書進行。

蛋清樣品禽白血病抗原（P27）S/P≥0.2，判定為陽性，S/P＜0.2認為陰性；棉拭子樣品禽白血病抗原（P27）S/P≥0.3，判定為陽性，S/P＜0.3認為陰性。

（2）雞白痢、雞傷寒多價染色平板凝集試驗方法，采用平板凝集試驗檢測種雞血清中雞白痢、雞傷寒抗體，具體操作和結果判定參照說明書進行。

二、結果

1.禽白血病抗原（P27）檢測結果。抽檢的5個種雞場中，場群陽性率為20%，個體陽性率為0.3%；共有1個雞場檢出陽性，該場禽白血病P27抗原ELISA檢測陽性率為1.5%（表1）。

表1 種雞場禽白血病抗原（P27）檢測結果

2.雞白痢多價染色平板凝集試驗結果。抽檢的6個種雞場中，場群陽性率為16.67%，個體陽性率為0.17%；共有1個雞場檢出陽性，該場陽性率為1%（表2）。

表2 雞白痢多價染色平板凝集試驗結果檢測結果

三、結論與討論

我國于1999年，首次在肉雞中分離到ALV-J病毒，2002年首次在蛋雞中發現J亞群禽白血病。當今不同品系的白羽肉用型和蛋用型種雞基本凈化了不同亞群的外源禽白血病。目前禽白血病主要影響我國地方品種場和黃羽肉雞場。2012年，在地方品種雞中分離鑒定出新的亞群ALV-K。

通過對4個父母代白羽肉雞場和1個白羽肉雞蛋用型雞場抽樣進行禽白血病抗原（P27）ELISA檢測，個體陽性率為0.3%，場群陽性率為20%。P27抗原為群特異性抗原，在不同亞群之間無明顯區別，檢測出陽性無法區分是內源性和外源性病毒感染。疫病凈化主要針對外源性病毒，內源性禽白血病病毒雖然危害不大但會干擾P27抗原檢測的結果。檢測到的3份陽性樣品，未做進一步進行亞群的鑒定，因此不能確定屬于內源性和外源性ALV的感染。可增加每個世代檢測的樣本類型和數量，采取不同的方法檢測，最大程度檢測出陽性雞進行淘汰，加快凈化速度。

目前對于雞白痢無疫苗用于防治，藥物治療易產生耐藥性，凈化是該病最主要的防控手段。本研究通過雞白痢平板多價染色平板凝集抗體檢測，抽檢到的樣品兼顧了白羽肉雞肉用型和蛋用型雞場、地方品種場以及原種雞場，個體陽性率為0.17%。結果顯示，抽檢到的場雞白痢感染率較低。雞白痢平板多價染色平板凝集抗體檢測作為傳統雞白痢檢測方法，操作門檻和靈敏度偏低，該抗原含有09抗原，易與其他D群沙門氏菌發生反應，且陽性率還與個體感染的時間以及體內抗體水平有關。建議使用分離鑒定、ELISA、免疫磁珠等多種方法進行鑒別診斷，防止漏檢，造成同群的污染。

開展種雞場疫病凈化，選擇凈化工作開展較好的公司引進種源，進行隔離檢疫監測，降低引種引入風險的發生；加強飼養管理，孵化階段注意禽白血病等疫病的橫向感染問題；盡量在每個世代增加檢測數量和次數，堅持檢測淘汰；避免使用被免疫抑制性病毒污染的疫苗免疫，增加疫病凈化的難度。疫病的凈化是一個長期和復雜的過程，養殖場要根據實際制定適合本場的疫病凈化方案，堅持檢測淘汰，以加快凈化進程。