基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技術的6-姜酚在大鼠體內代謝產物的鑒定及代謝途徑的分析

孫 志，周 霖，禹明洋，王振輝，喬高星，薛 鵬，趙紅宇，康 建，張曉堅，左莉華*

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技術的6-姜酚在大鼠體內代謝產物的鑒定及代謝途徑的分析

孫 志1, 2, 3，周 霖1, 2, 3，禹明洋1，王振輝5，喬高星1，薛 鵬4，趙紅宇4，康 建1, 2, 3，張曉堅1, 2, 3，左莉華1, 2, 3*

1. 鄭州大學第一附屬醫院藥學部，河南 鄭州 450052 2. 河南省精準醫學臨床質譜工程研究中心，河南 鄭州 450052 3. 鄭州市臨床質譜重點實驗室，河南 鄭州 450052 4. 鄭州大學第一附屬醫院 口腔急診科，河南 鄭州 450052 5. 河南理工大學醫學院，河南 焦作 454000

采用超高效液相色譜-四極桿-靜電場軌道阱高分辨質譜（UHPLC-Quadrupole-Orbitrap high resolution mass spectrometry，UHPLC-Q-Orbitrap HRMS）技術對6-姜酚在大鼠血漿、尿液和糞便中的代謝產物進行鑒定分析。SD大鼠ig給藥6-姜酚羧甲基纖維素鈉混懸液后，收集其血漿、尿液、糞便以及膽汁樣品。樣品前處理后，采用Waters Acquity UPLC?BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）為流動相，梯度洗脫。在電噴霧電離源（ESI源）正、負離子模式下采集生物樣品的質譜數據。對代謝產物的質譜數據進行結構鑒定分析，檢測到大鼠體內6-姜酚相關代謝產物共21個，其中血漿樣品中5個代謝產物，尿液樣品中9個代謝物，糞便樣品中12個代謝產物，膽汁樣品中8個代謝產物。通過液質聯用技術闡明了6-姜酚在大鼠體內的代謝產物及其代謝途徑，為今后相關研究提供重要的理論依據，同時也為藥物代謝鑒定研究提供一種綜合研究方法。

6-姜酚；UHPLC-Q-Orbitrap HRMS；代謝產物；代謝途徑；血漿；尿液；糞便；膽汁

姜為姜科（Zingiberaceae）植物姜Rosc. 的干燥根莖。株高0.5～1.0 m，根莖肥厚，多分枝，有芳香及辛辣味。根莖供藥用，鮮品或干品可作烹調配料或制成醬菜、糖姜。莖、葉、根莖均可提取芳香油，用于食品、飲料及化妝品香料中。其中藥性表現為發散風寒、化痰止咳，又能溫中止嘔、解毒等，常常用于外感風寒及胃寒嘔逆等癥的治療[1-2]。

姜的化學成分繁雜，主要歸屬3大類：揮發油類（萜類化合物）、二苯基庚烷類（1,7-二取代苯基庚烷骨架）和姜辣素類。姜辣素是姜中辣味成分的總稱，其中6-姜酚在姜的辣味成分中含量最高，也是姜的主要活性成分[2-5]。6-姜酚具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎、強心、降壓、調血脂、降血糖、抗凝等多種生物學活性。其中6-姜酚在抗腫瘤方面具有良好的應用前景[6]，還具有保肝利膽、消炎、鎮咳、防暈止吐、抑制中樞神經等多種功效，殺蟲、抗病原微生物和殺菌防腐作用[7-9]。目前，對于6-姜酚的提取分離方法、分析測定方法和生物活性研究較為全面，而且藥代動力學研究顯示，6-姜酚在機體內快速吸收并迅速消除，且這一變化規律與給藥途徑及給藥劑量沒有顯著的關聯性[10]，但對6-姜酚的體內代謝過程和代謝產物尚不明確[11-13]，亟需進一步研究。本研究采用超高效液相色譜-四極桿-靜電場軌道阱高分辨質譜（UHPLC-Q-Orbitrap HRMS）建立了一種靈敏度高、準確性好的鑒定藥物體內代謝產物的研究方法，對大鼠血漿、尿液和糞便中6-姜酚的主要代謝產物進行鑒定分析，為6-姜酚的進一步藥用開發奠定基礎。

1 材料

1.1 藥物與試劑

6-姜酚對照品（批號MUST-18090710，質量分數＞98%，購自成都曼思特生物科技有限公司）；甲醇、乙腈（色譜純，美國Fisher公司）；水為超純水，其他試劑均為分析純。羧甲基纖維素鈉（CMC-Na），購于天津市科密歐化學試劑科技有限公司。

1.2 儀器

UHPLC-Q-Orbitrap液相色譜-質譜聯用系統：Ultimate 3000超高效液相色譜儀（美國Dionex公司），Q Exactive型高分辨質譜（美國Thermo Fisher Scientific公司）；Waters Acquity UPLC?BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；BX7200HP臺式超聲波清洗器（上海新苗醫療器械制造有限公司）；AL104型萬分之一分析天平（瑞士Mettler Toledo上海有限公司）。

1.3 動物

SD大鼠18只，雄性，體質量（230±20）g，購于鄭州大學動物實驗中心。合格證號SCXK（豫）2019-0002。動物于恒溫恒濕房飼養，保持12 h光照循環，期間自由飲水進食，提供實驗室標準動物飼料，所有實驗操作按照河南省鄭州大學第一附屬醫院動物倫理委員會的要求進行。給藥前禁食12 h，自由飲水。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱為Waters Acquity UPLC?BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）為流動相，梯度洗脫：0～2.0 min，5% B；2.0～2.5 min，5%～10% B；2.5～20 min，10%～25% B；20～35 min，25%～65% B；35～45 min，65%～100% B；45～50 min，100% B；體積流量0.2 mL/min；進樣量5 μL；柱溫40 ℃。

2.2 質譜條件

UHPLC-Q-Exactive液質聯用儀：離子源采用HESI源（heated ESI），輔助氣體積流量為10 μL/min，輔助氣溫度為300 ℃，離子傳輸管溫度320 ℃；正離子模式：鞘氣體積流量40 μL/min，噴霧電壓3.50 kV；負離子模式：鞘氣體積流量38 μL/min，噴霧電壓2.80 kV。掃描方式采用正、負離子Full MS/dd-MS2模式，其中包括1次一級全掃描（分辨率為70 000 FWHM）和1次數據依賴的二級掃描（分辨率為17 500 FWHM）2個事件，質荷比窗口寬度設置為2，碰撞能梯度為20、40、60 eV，掃描范圍/80～1200。

2.3 樣品的制備

稱取250 mg 6-姜酚的對照品，加入25 mL 0.5% CMC-Na，搖勻，制成質量濃度為10 mg/mL的混懸液[14-15]，作為給藥樣品。

2.4 給藥及樣品采集

實驗前，將SD大鼠隨機分為3組（采血組、集尿組、膽汁組），每組6只，再將各組分為空白組（3只）和6-姜酚給藥組（3只），在動物房內適應性喂養1周，飼養環境溫度控制在20 ℃。

受試前1天，將大鼠置于代謝籠中，禁食不禁水12 h。給藥組以10 mg/kg的劑量大鼠ig給予6-姜酚CMC-Na混懸液，空白組大鼠ig等體積0.5% CMC-Na溶液。分別于ig給藥前和給藥后5、10、15、30 min和1、2、4、6、10 h眼眶取血300 μL，置于1.5 mL肝素鈉抗凝EP管中，輕搖3下，4 ℃、3000 r/min離心10 min，取上清液，?20 ℃保存，備用；收集0～24 h 2組大鼠的尿液，濾過，置于EP管中，?20 ℃保存，備用；收集0～24 h 2組大鼠的糞便，置于EP管中，?20 ℃保存，備用。膽汁組大鼠采用5 mg/kg ip烏拉坦（20%）進行麻醉，對大鼠實施膽管插管手術。給藥組大鼠以10 mg/kg的劑量ig給予6-姜酚CMC-Na混懸液，收集0～24 h膽汁樣品，?20 ℃保存，備用。若實驗過程取血不足，則可在給藥1 h后ig適量生理鹽水[14-15]。

2.5 樣品前處理

精密稱定6-姜酚對照品適量，置10 mL量瓶，甲醇定容，配制成0.1 mg/mL儲備液。稀釋100倍后，取200 μL置進樣瓶，進樣；甲醇、乙腈、水按1∶1∶1各取100 μL，渦旋混合30 s，作為空白溶劑，取200 μL置進樣瓶，進樣。

取所有不同采血點血漿各100 μL均勻混合，進行甲醇沉淀（1∶3），渦旋3 min，4 ℃、13 000 r/min離心10 min。取上清，濃縮至干；用50%甲醇水80 μL復溶，渦旋30 s，超聲10 s，4 ℃、13 000 r/min離心5 min，上清液置進樣瓶，進樣[16]；取尿液200 μL和200 μL甲醇置EP管，渦旋2 min，4 ℃、13 000 r/min離心10 min，取上清液，濃縮至干；取50%甲醇水80 μL復溶，渦旋30 s，超聲10 s，4 ℃、13 000 r/min，離心5 min，取上清液置進樣瓶，進樣；取膽汁樣品100 μL，甲醇（1∶3）沉淀蛋白，渦旋3 min，4 ℃、13 000 r/min離心10 min。取上清，濃縮至干，用50%甲醇80 μL復溶，渦旋30 s，超聲10 s，4 ℃、 13 000 r/min離心5 min，上清液置進樣瓶，進樣；取糞便樣品，晾干，研磨，精密稱定0.15 g，加入1.5 mL的80%甲醇水，超聲提取20 min，4 ℃、5000 r/min離心10 min，取上清，經0.22微孔濾膜濾過，取200 μL置進樣瓶，進樣。

2.6 質譜分析

對處理后的血漿、尿液、糞便樣品進行質譜分析，扣除空白背景后，依據質譜提供的準分子離子和加荷離子等信息推測并得到一級質譜的精確相對分子質量，經Xcalibar 2.0軟件擬合分子式，誤差范圍在1×10?5并與數據庫信息對比，對代謝物結構進行初步推測，再依據對照品的ESI-MS2譜和相關參考文獻[3,13,16]，進一步推斷代謝物的化學結構。

3 結果與分析

3.1 6-姜酚對照品的質譜裂解途徑分析

在正離子模式下，實驗結果中未提取到6-姜酚對照品（C17H26O4）的離子流色譜圖，僅能提取到C17H24O3的離子流色譜圖，其產生/277.179 32 [M＋H]+的準分子離子峰（R＝17.87 min）。推測6-姜酚對照品在未受到粒子沖撞前已經發生了結構變化，丟失了1分子H2O，見圖1。M0的R＝17.87 min，/277.179 32，將M0準確鑒定為6-姜酚原型丟失1分子H2O。在其ESI-MS2譜中，/277經碰撞誘導裂解后產生一系列二級碎片離子/259、189、177、162、145等。其中，/277中性丟失1分子H2O形成的/259，繼續丟失長鏈烷基（C5H10）形成/189；/189脫掉1個甲基形成的/177，繼續脫甲基形成/163；/145由/162中性丟失1分子H2O而形成。由此，可推測6-姜酚經碰撞誘導裂解易脫水，并且易產生脫烷基的碎片離子峰，尤其易產生丟失甲基的碎片離子峰。這可能與6-姜酚母核中存在烷基長鏈有關[16]。

A-一級譜圖 B-二級碎片離子圖

3.2 6-姜酚在大鼠體內代謝產物的分析鑒定

基于UHPLC-Q-Orbitrap技術分析給藥后的大鼠血漿、尿液和糞便，通過對比給藥前后的生物樣品圖譜，結合色譜保留時間、精確相對分子質量、多級碎片離子等信息的分析，共鑒定了原型在內的22個代謝產物，其中大鼠血漿中鑒定代謝產物5個、尿液中鑒定代謝產物9個、糞便中鑒定代謝產物12個、膽汁中鑒定代謝產物8個，具體代謝產物質譜信息見表1。

3.2.1 大鼠血漿中代謝產物的鑒定 大鼠血漿中共鑒定代謝產物5個，分別為M1～M5。M1的相對分子質量比6-姜酚母核少34，其準分子離子峰為/261.147 98 [M＋H]+（C16H20O3）。其分子式較6-姜酚母核少1個C、1個O和6個H，對比M0的裂解規律，推測其脫去了苯環上的甲氧基（CH2O），但實際相對分子質量又缺少4，推測同時又脫去長鏈上H形成2個雙建。因此，M1可鑒定為6-姜酚的去甲氧基和雙脫飽和（脫H）代謝產物。

在正離子模式下，檢測到2個色譜峰M2（C17H24O3，R＝18.23 min）、M3（C17H24O3，R＝14.86 min）。兩者的實驗相對分子質量均與M0相同，推測二者同樣由6-姜酚母核中性丟失1分子H2O而得到，且都產生了/259、189、177、163等碎片離子，得到的碎片離子與M0裂解產生的碎片離子基本相同，進一步驗證了上述推斷。因此，可將兩者鑒定為6-姜酚的脫水產物。

M4的準分子離子峰為/281.246 86 [M＋H]+（C18H32O2），其分子式較6-姜酚少2個O、多1個C和6個H。在ESI-MS2譜中，得到了6-姜酚對照品的/295、249、177碎片離子，而M4在二級裂解過程中產生的/263較/249多14，推測母核發生甲基化；產生的/263較/295少32，推測母核發生硝基還原；產生的/179較/177多2，推測母核發生還原（雙建加H）。因此，推測M4是由6-姜酚母核發生還原（雙建加H）、硝基還原、甲基化得到的代謝產物。

M5的準分子離子峰為/289.215 18 [M＋H]+（C19H28O2）。對比其與M15、M16的實驗相對分子質量和二級譜圖，發現M5在發生乙酰化和硝基還原反應的同時又脫去1分子H2O。由此，推測M5是由6-姜酚乙酰化、硝基還原和脫水而得到的代謝產物。

3.2.2 大鼠尿液中代謝產物的鑒定 大鼠尿液中共鑒定代謝產物9個，分別為M1、M2、M3和M6～M11。代謝產物M6～M11的鑒定結果如下。

在正離子模式下，M6的準分子離子峰為/493.203 34 [M＋Na]+（C23H34O10）。其相對分子質量較6-姜酚多176，推測是6-姜酚葡萄糖醛酸結合反應產物。由其二級裂解產生的/317產物離子（丟失了1分子葡萄糖醛酸），可進一步確認上述推斷[14]。M7的準分子離子峰為/463.192 84 [M＋Na]+（C22H32O9）。其相對分子質量較M6少30，并且其二級裂解產生的碎片離子/287，是由/463脫去1分子葡萄糖醛酸產生的。因此，可將M7鑒定為6-姜酚單去甲氧基和葡萄糖醛酸結合產物。

M8的準分子離子峰為/259.168 61 [M＋H]+，其分子式為C17H22O2。其相對分子質量比M0少18，推測其由6-姜酚母核中性丟失2分子H2O形成。因此，可將M8鑒定為6-姜酚的雙脫水產物。

M9的準分子離子峰為/261.184 48 [M＋H]+（C17H24O2）。M9比6-姜酚母核的相對分子質量同樣少34，對比其分子式較6-姜酚母核少2個O和2個H，并且在其二級裂解過程中產生了/229的碎片離子，推測該碎片離子為/243丟失甲氧基上的甲基（-CH2）形成，進而推測M9未脫去苯環上的甲氧基，而是脫去2分子H2O，但由于其實際相對分子質量數并未減少36，推測是6-姜酚母核長鏈上的羰基還原后以羥基形式脫去。由此，推測M9是由6-姜酚發生還原反應（還原羰基）、雙脫水反應而得到的代謝產物。

M10的準分子離子峰為/423.248 14 [M＋H]+（C22H34N2O6）。依據其分子式C22H34N2O6，初步推測6-姜酚母核發生了谷氨酰胺結合，在其ESI-MS2譜中產生的/362由6-姜酚母核脫去基團CH9NO2得到，從而進一步驗證了M10中含有谷氨酰胺結構。再對比M10與6-姜酚母核的分子式，發現其結構還缺少1個O，推測6-姜酚母核還發生了單去羥基化反應。由此，推測M10是6-姜酚的谷氨酰胺結合和單去羥基化產物。

M11的準分子離子峰為/495.218 72 [M＋Na]+（C23H36O10）。依據其分子式，初步推測6-姜酚母核發生了葡萄糖苷結合和氧化反應。在其二級裂解的過程中，M11產生了/319的碎片離子，其由/495脫去C6H8O6大基團而得到，從而進一步驗證了上述推測，并且推測6-姜酚氧化部位在葡萄糖苷部分。由此，推測M11是6-姜酚的葡萄糖苷結合和氧化反應產物。

表1 大鼠血漿、尿液和糞便中6-姜酚的代謝產物質譜信息

“+”代表樣品中檢測到，“?”代表樣品中未檢測到

"+" means detected in the sample, and "?" means not detected in the sample

3.2.3 大鼠糞便中代謝產物的鑒定 大鼠糞便中共鑒定代謝產物12個，分別為M1、M4、M5、M9、M11和M12～M18。代謝產物M12～M18的鑒定結果如下。

在正離子模式下，M12的準分子離子峰為/297.241 73 [M＋H]+（C18H32O3）。在其二級裂解過程中，得到/279、261碎片離子，與M4的碎片離子/281、263對比推測出M12在6-姜酚母核的結構上同樣發生了硝基還原和甲基化反應，但未發生還原反應（雙建加H）。根據實驗相對分子質量計算，在進行上述反應后得實驗相對分子質量仍較6-姜酚母核多18，推測M12又發生了水合反應，在M12的二級裂解過程中/279 由/297脫去1分子H2O得到，進一步證明了上述推測。由此，推測M12是6-姜酚的甲基化、硝基還原、水合作用的代謝產物。

M13的準分子離子峰為/289.179 17 [M＋H]+（C18H24O3）。其分子式較6-姜酚母核多1個C，少1個O和2個H。推測6-姜酚在大鼠體內發生了甲基化反應和脫水反應，在M13的ESI-MS2譜中，/289較6-姜酚甲基化產物的實驗相對分子質量少20，再推測6-姜酚在大鼠體內發生甲基化和脫水反應，并且脫去2個H形成1個雙鍵。由此，推測M13為6-姜酚的甲基化、脫水、脫飽和產物。

M14的準分子離子峰為/329.171 54 [M＋Na]+（C18H26O4）。M14的實驗相對分子質量較6-姜酚母核多12，分子式較6-姜酚多1個甲基，推測M14是由6-姜酚母核甲基化和脫飽和（脫去2個H）而得到的產物。

M15的準分子離子峰為/329.210 33 [M＋Na]+（C19H30O3）。其分子式較6姜酚母核多2個C、少1個O，并依據其一級譜圖、二級譜圖初步推測M15是由6-姜酚母核發生乙酰化和硝基還原得到的代謝產物，在其ESI-MS2譜中，/285可能為M15脫落乙酰基得到的離子碎片，進一步驗證了上述推測。由此，推測M15是6-姜酚乙酰化和硝基還原而得到的代謝產物。同理，M16的準分子離子峰為/331.225 77 [M＋Na]+（C19H32O3）。M16的實驗相對分子質量僅比M15多2，并結合其分子式以及一級譜圖和二級譜圖推測M16是由6-姜酚發生乙酰化、硝基還原和還原反應而得到代謝產物。M17的準分子離子峰為/411.249 66 [M＋H]+（C21H34N2O6）。依據其分子式C21H34N2O6，初步推測6-姜酚母核發生了谷氨酰胺結合，在其ESI-MS2譜中產生的/352由6-姜酚母核脫去基團CH9NO2得到，從而進一步驗證了M17中含有谷氨酰胺結構。再對比M17與6-姜酚母核的分子式，發現還缺少1個C和1個O，推測6-姜酚母核還發生了去甲基和還原反應（還原羰基）。由此，推測M17是6-姜酚發生谷氨酰胺結合、去甲基化反應和還原反應得來的代謝產物。M18的準分子離子峰為/356.260 99 [M＋H]+（C20H37NO2S）。依據其分子式C20H37NO2S，初步推測6-姜酚母核發生了半胱氨酸結合，在其二級裂解過程中得到了/121離子碎片，從而驗證了上述推測；得到了/339離子碎片，/339由/356脫去1分子NH3得到的，進一步說明了半胱氨酸羧基端與6-姜酚結合，并且進一步對比M18與6-姜酚的分子式發現，M18較6-姜酚母核缺少3個O，推測其又進行了硝基還原和還原反應（還原羰基）。由此，推測M18是6-姜酚在大鼠體內發生半胱氨酸結合、硝基還原和還原反應（羰基還原）的代謝產物。

3.2.4 大鼠膽汁中代謝產物的鑒定 大鼠膽汁中共鑒定代謝產物8個，分別為M3、M6、M8、M11、M14和M19～M21。代謝產物M19～M21的鑒定結果如下。

在正離子模式下，M19的準分子離子峰為/299.127 44 [M＋Na]+（C16H20O4）。其分子式較6-姜酚母核少1個C，6個H，初步推測6-姜酚母核脫去了亞甲基基團（CH2），但其分子式又缺少4個H，進一步推測6-姜酚母核又發生了2次脫飽和反應（脫H）。因此，可將M19鑒定為6-姜酚母核發生去甲基化反應和雙脫和反應（脫H）而得到的代謝產物。

M20的準分子離子峰為/365.192 47 [M＋Na]+（C18H30O6）。其分子式較6-姜酚母核多1個C、2個O、4個H。對比其與6-姜酚母核的二級裂解碎片，推測M20由6-姜酚母核脫去甲基基團（CH2）并進行2次氧化反應而得到。M21的準分子離子峰為/365.192 47 [M＋Na]+（C19H30O5）。在M21的ESI-MS2譜中，得到了/285碎片離子，推測由/327脫去乙酰基基團而得到，初步推測6-姜酚母核發生了乙酰基結合反應。但M21的分子式又較6-姜酚母核多2個H，因此可將M21鑒定為6-姜酚的乙酰基結合反應和還原反應的代謝產物。

3.3 5-姜酚在大鼠體內的代謝位置及途徑分析

從大鼠的血漿、尿液、糞便和膽汁中共鑒定了6-姜酚原型在內的22個代謝產物，其主要的體內代謝反應有脫水、去甲氧基、去甲基化、乙酰化、硝基還原、葡萄糖醛酸化以及它們的復合反應等。其中少數代謝產物發生了谷氨酰胺結合、半胱氨酸結合等結合反應。6-姜酚較容易較易發生去甲氧基、去甲基化、乙酰化和硝基還原等反應。其主要代謝途徑見圖2。

圖2 6-姜酚在大鼠體內的主要代謝途徑

4 討論

本實驗采用UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技術對6-姜酚在正常SD大鼠血漿、尿液、糞便和膽汁中的代謝產物進行鑒定分析。結果表明，6-姜酚在大鼠體內的主要代謝反應有脫水、去甲氧基、乙酰化、硝基還原、葡萄糖醛酸化、去羥基化以及相關的復合反應等。通過分析這些代謝產物的精確相對分子質量、質譜裂解規律以及特征碎片離子等，篩選鑒定了包括6-姜酚原型在內的22個代謝產物，探討了6-姜酚的在大鼠體內的代謝途徑和裂解規律，為進一步研究6-姜酚的代謝產物及作用機制提供參考。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 中國藥典 [S]. 一部. 2020: 14.

[2] Mamoru S, Hideko S, Iwao S,. Pharmacological studies on ginger. V Pharmacological comparison between (6)-shogaol and capsaicin [J]., 1986, 88(5): 339.

[3] 薛文靜, 張燕, 楊龍華, 等. UPLC-MS/MS測定姜辣素中的6-姜酚 [J]. 中國衛生檢驗雜志, 2010, 20(9): 2178-2178.

[4] 張科衛, 宋珅, 崔小兵, 等. 全國主要產區生姜中6-姜酚、6-姜醇含量的測定 [J]. 中國藥學雜志, 2009, 44(22): 1692-1694.

[5] Suekawa M, Ishige A, Yuasa K,. Pharmacological studies on ginger. I. Pharmacological actions of pungent constituents, (6)-gingerol and (6)-shogaol [J].-, 1984, 7(11): 836-848.

[6] 劉鑫, 張宏偉, 傅若秋, 等. 生姜中姜酚類活性成分的抗腫瘤作用及其機制 [J]. 第三軍醫大學學報, 2017, 39(9): 884-890.

[7] 渠柳, 楊淑, 馬開, 等. 基于脾胃虛寒模型的生姜、干姜、炮姜姜辣素部位組織分布與歸經的相關性研究 [J].世界中醫藥, 2020, 15(21): 3199-3222.

[8] 吳英智, 傅強, 嚴全能, 等. 姜酚在心血管疾病中的藥理作用研究進展 [J]. 中國臨床藥理學雜志, 2017, 33(18): 1824-1827.

[9] 營大禮. 干姜化學成分及藥理作用研究進展 [J]. 中國藥房, 2008, 19(18): 1435-1436.

[10] 耿彤, 吳曉磊, 王志偉. 姜活性成分6-姜酚藥代動力學研究進展 [J]. 藥學研究, 2017, 36(4): 231-235.

[11] 蔣蘇貞, 王寧生. 姜酚的提取分離及6-姜酚含量測定 [J]. 中藥新藥與臨床藥理, 2007, 18(3): 222-224.

[12] 馬龍利, 李崗, 葉菲菲, 等. 6-姜酚的分離純化及抗氧化能力研究 [J]. 食品科技, 2016, 41(8): 206-209.

[13] 許玲玲, 安睿, 王新宏. 液質聯用技術在中藥分析中的應用 [J]. 中成藥, 2006, 28(2): 239-246.

[14] Jiang S Z, Wang N S, Mi S Q. Plasma pharmacokinetics and tissue distribution of [6]-gingerol in rats [J]., 2008, 29(9): 529-537.

[15] Wang W, Li C Y, Wen X D,. Plasma pharmacokinetics, tissue distribution and excretion study of 6-gingerol in rat by liquid chromatography- electrospray ionization time-of-flight mass spectrometry [J]., 2009, 49(4): 1070-1074.

[16] Nakazawa T, Ohsawa K. Metabolism of [6]-gingerol in rats [J]., 2002, 70(18): 2165-2175.

Metabolites and metabolic pathway analysis of 6-gingerol in rats based on UHPLC-Q-Orbitrap HRMS

SUN Zhi1, 2, 3, ZHOU Lin1, 2, 3, YU Ming-yang1, WANG Zhen-hui5, QIAO Gao-xing1, XUE Peng4, ZHAO Hong-yu4, KANG Jian1, 2, 3, ZHANG Xiao-jian1, 2, 3,ZUO Li-hua1, 2, 3

1. Department of Pharmacy, The First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China 2. Henan Engineering Research Center of Clinical Mass Spectrometry for Precision Medicine, Zhengzhou 450052, China 3.Zhengzhou Key Laboratory of Clinical Mass Spectrometry, Zhengzhou 450052, China 4. Oral Emergency Department, The First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China 5. College of Medicine, Henan Polytechnic University, Jiaozuo 454000, China

To identify the metabolites of 6-gingerol in plasma, urine, feces and bile in rats by using UHPLC-Q-Orbitrap HRMS method.The plasma, urine, fecal and bile samples were collected and processed after ig administration of 6-gingerol CMC-Na suspension. A Waters ACQUITY UPLC BEH C18column (100 mm × 2.1 mm, 1.7 μm) was applied and 0.1% formic acid (A)-acetonitrile (B) solution were as the mobile phase for gradient elution. The mass spectrometry data of biological samples was acquired under the both positive and negative electrospray ion mode.A total of 21 metabolites of 6-gingerol were identified in rats by analyzing the mass spectrometry data, including five metabolites in plasma, nine metabolites in urine, 12 metabolites products in feces, eight metabolites in bile samples.The study expounded metabolites and metabolic pathways of 6-gingerol in rats based on UHPLC-Q-Orbitrap HRMS method and provided an important basic for future studies. In addition, this paper could offer a comprehensive research method for drug metabolism identification.

6-gingerol; UHPLC-Q-Orbitrap HRMS; metabolites; metabolic pathway; plasma; urine; feces; bile

R284.1

A

0253 - 2670(2021)24 - 7420 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.24.003

2021-05-16

國家自然科學基金資助項目（81703666）；河南省高等學校重點科研項目基礎研究計劃（18A310036，19A360008，19A320070）

孫 志，博士，研究方向為中藥藥物代謝。Tel: (0371)66862570 E-mail: sunzhi2013@163.com

左莉華，博士，副主任藥師，研究方向為中藥藥效物質基礎。Tel: (0371)66862570 E-mail: zuolihua2013@126.com

[責任編輯 王文倩]