閩南野生白桂木組培快繁體系研究

黃玲

（福建省林業(yè)科技試驗中心，福建漳州 363600）

白桂木（Artocarpus hypargyreus） 是?？疲∕oraceae） 波羅蜜屬（Artocarpus） 常綠喬木，零星分布在福建、江西、湖南、廣東、云南等地，現(xiàn)已被列為國家三級保護樹種[1]。白桂木樹形優(yōu)美，枝葉繁茂，枝和葉柄有銹色柔毛，葉革質(zhì)，花為單性，雌雄同株，與盾形苞片混生于花序托上，聚花果為球形。白桂木木材堅硬，紋理通直，是建筑、家具的制作良材，具有祛風(fēng)除濕、舒筋活血、抗炎鎮(zhèn)痛等功效[2-5]，其乳汁也可提取硬性膠，果實可生食或作調(diào)味用等，因此白桂木具有較好的經(jīng)濟價值和應(yīng)用前景。由于野生白桂木種子休眠期長，發(fā)芽率低，造成其種群數(shù)量少，瀕臨滅絕。野生白桂木組培與快繁是保護白桂木種質(zhì)資源和恢復(fù)白桂木種群數(shù)量的重要手段。同時，基于組培快繁技術(shù)的白桂木優(yōu)質(zhì)種苗培育和推廣對于推進鄉(xiāng)土適生樹種的開發(fā)具有重要意義。目前，國內(nèi)有關(guān)野生白桂木組培和快繁方面的報道較少[6,7]。以野生白桂木優(yōu)樹當(dāng)年生幼嫩枝條為試驗材料，研究白桂木組培快繁各階段的最佳培養(yǎng)基及激素濃度，建立白桂木組培快繁體系，以期為白桂木種苗繁育及開發(fā)利用提供科學(xué)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料來源于福建省南靖縣和溪鎮(zhèn)聯(lián)橋村選擇的一株白桂木優(yōu)樹，2020 年3 月取白桂木當(dāng)年生的半木質(zhì)化枝條為外植體。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體不同消毒時間

剪去白桂木木質(zhì)化枝條的葉片，每段帶1 個芽剪成3 cm 左右莖段，新芽上有絨毛，先用洗衣粉水溶液輕柔刷洗表面，后將材料放在自來水龍頭下沖洗1 h 去除切口處溢出的白色乳汁。清潔后的莖段用75%酒精浸泡并輕微振蕩10 s 后用無菌水清洗3 次，再分別用0.1%升汞溶液浸泡振蕩5 min、10 min、15 min，再用無菌水清洗5 次。將消毒好的外植體，斜插在培養(yǎng)基中，每處理20 瓶，重復(fù)3 次。15 d 后分別統(tǒng)計污染率和存活率。

1.2.2 誘導(dǎo)培養(yǎng)基

利用上述試驗最佳處理結(jié)果，將消毒好的外植體，斜插于不同處理誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每處理20 瓶，重復(fù)3 次。

以不同基本培養(yǎng)基和不同的激素（6-BA、NAA），采用3 因素3 水平的正交設(shè)計L9(34)（見表1），設(shè)9 個處理，每個處理添加蔗糖30 g·L-1、卡拉膠7.5 g·L-1，pH 5.8，30 d 后統(tǒng)計萌芽率。培養(yǎng)環(huán)境溫度25±2 ℃，光照強度為2500 ～4000 lx，光照時間10 h·d-1。

表1 外植體誘導(dǎo)試驗設(shè)計

1.2.3 增殖培養(yǎng)基

基礎(chǔ)培養(yǎng)基為MS，添加的6-BA 濃度為0.4 mg·L-1、0.6 mg·L-1、0.8 mg·L-1，添加的NAA 濃度為0.1 mg·L-1、0.2 mg·L-1，按照完全隨機試驗設(shè)計。

1.2.4 生根培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基為MS，添加的IBA 濃度為0 mg·L-1、0.5mg·L-1、1.0 mg·L-1，添加的IAA 濃度為0.1 mg·L-1、0.2 mg·L-1，按照完全隨機試驗設(shè)計。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用GPS 分析軟件進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計和LSD 多重比較分析。

2 結(jié)果和分析

2.1 不同消毒時間處理外植體的效果

表2 是白桂木的外植體消毒時間處理的效果。從表2 可看出，在污染率和存活率指標(biāo)上，不同消毒時間處理間存在顯著差異，使用0.1%升汞溶液消毒15 min 的污染率最低，為36.67%，但存活率也最低。綜合污染率和存活率指標(biāo)，使用0.1%升汞溶液消毒時間10 min 效果較佳，存活率最高為26.67%。

表2 外植體不同消毒時間效果

2.2 不同培養(yǎng)基對外植體誘導(dǎo)的影響

不同培養(yǎng)基、激素濃度對外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響結(jié)果如表3 所示，三個因素對試驗結(jié)果影響的主次順序為6-BA ＞NAA ＞基本培養(yǎng)基。由表3 可知，三種基本培養(yǎng)基中以MS 培養(yǎng)基萌芽率最高，6-BA激素以0.2 mg·L-1水平的萌芽率最高，NAA 以0.2 mg·L-1水平的萌芽率最高，因此，通過極差分析白桂木外植體誘導(dǎo)的最適宜培養(yǎng)基為：MS+ 6-BA 0.2 mg·L-1+ NAA 0.2 mg·L-1。方差分析結(jié)果（表4） 表明，基本培養(yǎng)基、6-BA 和NAA 對白桂木外植體萌芽率的影響均達極顯著水平。

表3 不同培養(yǎng)基及激素濃度對白桂木外植體誘導(dǎo)的極差分析

表4 正交試驗方差分析表

2.3 增殖培養(yǎng)基的篩選

從表5 可知，相比不加NAA 的增殖培養(yǎng)基，相同6-BA 濃度時添加0.1 mg·L-1NAA 能顯著提高白桂木增殖倍數(shù)和生長狀況。當(dāng)NAA 濃度為0.1 mg·L-1時，添加0.6 mg·L-16-BA 可獲得最高的增殖倍數(shù)。同時，該條件下，不定芽長勢良好，葉深綠、莖較粗（圖1）。因此，白桂木增殖最適宜培養(yǎng)基為：MS+6-BA 0.6 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1。

表5 不同激素水平對白桂木增殖及生長的影響

圖1 白桂木的繼代苗

2.4 生根培養(yǎng)基的篩選

表6 不同激素水平對白桂木生根的影響

高，達91.67%。綜合得出，白桂木生根最適宜培養(yǎng)基為：1/2 MS+IBA 0.5 mg·L-1+IAA 0.1 mg·L-1+活性炭0.5 g·L-1，其根數(shù)為3 ～4 條，生根苗生長健壯（圖2）。

圖2 白桂木的生根苗

3 小結(jié)與討論

通過試驗，篩選出白桂木外植體使用0.1%升汞溶液最佳消毒時間10 min，存活率最高為26.67%；外植體誘導(dǎo)的適宜培養(yǎng)基為：MS+6-BA 0.2 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1，萌芽率較高；增殖適宜培養(yǎng)基為：MS+6-BA 0.6 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1，增殖倍數(shù)達3.22；生根適宜培養(yǎng)基為：1/2 MS+IBA 0.5 mg·L-1+IAA 0.1 mg·L-1+活性炭0.5 g·L-1，生根率達91.67%。

目前國內(nèi)有關(guān)白桂木組培育苗技術(shù)的研究仍較少。黎國運等[7]綜合探討了以白桂木種子和幼嫩枝條為外植體的組培育苗技術(shù)，本試驗中的培養(yǎng)基中激素濃度更低，且組培苗生根率也更高，這可能與白桂木品種差異以及激素種類等有關(guān)。同時，在研究過程中還發(fā)現(xiàn)白桂木幼嫩枝條組織培養(yǎng)過程中的增殖階段容易褐化，因此建議在降低光照強度下進行培養(yǎng)。此外，白桂木生根苗的植株單株葉片面積偏大，在組培瓶中空間占比大，增加了組培苗培育成本，有關(guān)優(yōu)化組培苗移植和煉苗等技術(shù)規(guī)程有待進一步研究。