大花君子蘭愈傷組織誘導及分化成苗研究

江皓 張藝纖

摘要：本次試驗完成了大花君子蘭分化成苗的研究。結果表明，2，4-D 2mg/L+NAA 1mg/L+KT 2mg/L外植體愈傷誘導最好，分化培養NAA 0.5mg/L +6-BA2mg/L+ KT 1mg/L出苗效果最好，生根培養不需要添加植物激素。君子蘭組織培養的成功，意識著君子蘭工廠化的可行性，加速君子蘭行業的發展。

關鍵詞：大花君子蘭，組織培養，誘導，分化

大花君子蘭（Clivia miniata）是石蒜科植物。其植株有君子風采，開花如蘭，所以有君子蘭的美稱。君子蘭花色一般為橘紅色。花、葉并美。美觀，耐陰，大方，非常適合室內擺設。其花朵常在冬春兩季以及圣誕節、元旦、春節期間開放，象征喜慶、吉祥、富貴，成為布置會場、裝飾廳堂、友情饋贈的理想花卉，被譽為“花之君子”、“中國室內花卉的皇后”。

目前君子蘭主要采用分株和播種繁殖，分株繁殖雖然可以保持母體的優良性狀，但是效率極低，播種繁殖雖然可以大量繁殖，但是子代基因不確定性很大。而組織培養可以保持母體的優良性狀并且可以快速的大量繁殖，現有的文獻在君子蘭初代培養、繼代培養和生根煉苗等方面開展了大量研究，如君子蘭組織培養多選擇花梗、子房、葉片、胚珠等作為外植體，基本培養基多選擇MS或1/2MS，初代培養誘導愈傷組織常用的激素為6-BA、2，4-D、NAA，也有選擇ZT等作為初代培養激素;，增殖分化培養基多為6-BA，KT，生根煉苗培養多采用1/2MS，降低細胞分裂素濃度，適當添加NAA等生長素即可取得較好的生根效果。但生產實際應用時，現有的研究多集中在北方地區，且普遍反應為誘導和增殖緩慢，增殖率低等問題，工廠化育苗技術尚不成熟，有待在南方地區進一步開展君子蘭工廠化育苗的各個環節研究，將組織培養技術作為君子蘭大量繁殖的主要途徑，進一步擴大君子蘭在南方年宵花的份額。

1.材料與方法

1.1供試材料

試驗材料為大花君子蘭中‘和尚’品種，購買自吉林長春市，上盆養護于溫州科技職業學院南校區溫室大棚。試驗采用大花君子蘭“和尚”的幼花上的花托作為實驗所用外植體。

1.2試驗方法

試驗前先取外植體在流水下清洗30 min，然后在超凈工作臺上進行消毒。外植體先用75%乙醇浸泡15 s后用無菌水清洗四次后用1.5%次氯酸鈉溶液浸泡8 min，期間不停振動。然后最用再用無菌水清洗四次，最后再用無菌濾紙吸干水分。然后將外植體切成適合大小（1cm × 1 cm）接種于MS培養基（4%蔗糖+0.6%瓊脂）。

1.2.1愈傷誘導

選取 NAA 和 2，4 - D，KT三種植物生長調節劑，在外植體誘導愈傷階段生長素用量較大，我們通過試驗認為2，4-D 2mg/L+NAA 1mg/L+KT 2mg/L，其中2，4-D有較好的促進愈傷誘導的作用，但不宜過高，過高會抑制形態的發生。接種20天切口處開始產生黃白色蓬松的愈傷組織，之后降低2，4-D濃度至0.5mg/L后繼代，繼代一段時間后愈傷組織逐漸變為膨大緊實，這個時候就可以轉入分化培養基。

1.2.2愈傷組織分化

將愈傷轉入含NAA0.5mg/L +6-BA2mg/L+ KT 1mg/L的MS培養基，之后會逐漸分化出芽。也有研究表明培養基中添加LH可以促進芽的分化。

1.2.3壯苗生根

再生苗一部分在分化培養基中就開始生根，沒有在分化培養基上生根的再生苗轉入生根培養基后大多數都會長出根。生根培養基本培養基用1/2MS，加入0.01%的AC有利于生根，試驗發現1/2MS含激素培養基與不含激素空白培養基結果差異不顯著。

1.2.4煉苗與移栽

再生苗經煉苗后洗凈根部的培養基，種植到混合基質上，混合基質使大花君子蘭表現出較好的移栽效果，在混合基質配比為泥炭：蛭石：珍珠巖：松樹皮=5：1：1：3，移栽一個月后幼苗開始生根，并且與母體相似度較高。

2.影響因素分析

2.1植物激素濃度影響

初代培養中，我們是在MS培養基中添加2，4-D、KT 、NAA生長素可以誘導脫分化和促進愈傷組織生長，2，4-D濃度不能過高，因為2，4-D用量過高時會抑制形態發生過程，對后期分化成苗有負面影響。細胞分裂素用量過高會抑制芽的分化，因此繼代培養加2mg/L 6-BA就可以，生根時則不需要添加任何激素。

2.2外植體的選擇

根據我們多次試驗發現，相對于葉片，根而言，花托出愈率最高，而且污染率較低。取材較為容易，再生苗與母體相似度較高，而且不會對母株有傷害。所以用幼嫩花托作為外植體培養是最佳的選擇。

3 討論

君子蘭的組織培養中，選用幼嫩花托為外植體能保持親體優良性狀的優點，且能直接取材進行培養。通過不同激素配比的實驗結果，我們優化了君子蘭組織培養培養基，得到了一套較為理想的培養體系即愈傷誘導的培養基為 MS +蔗糖 40 g/L +瓊脂 6g/L+ 2，4-D 2mg/L+NAA 1mg/L+KT 2mg/L;分化培養基為 MS + 蔗糖 40 g/L+瓊脂 6g/L + NAA 0.5mg/L +6-BA 2mg/L+ KT 1mg/L;生根培養基為 1/2 MS 培養基。

君子蘭產業大多集中在北方，而此次在南方進行君子蘭離體繁殖的成功，為擴大君子蘭在南方年宵花市場提供了有效的途徑。

君子蘭的不同品系的離體培養所需要的物質，植物激素都各不相同，這一點還需要我們通過不斷試驗進一步地研究、探索。

References：

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