豬流行性腹瀉的診斷和預防

李同斌/山東省濱州市無棣縣畜牧獸醫管理服務中心 251900

豬流行性腹瀉（porcine epidemic diarrhea，PED）是仔豬的一種腹瀉疾病，該病已經在歐洲和亞洲有報道。豬流行性腹瀉與豬傳染性胃腸炎（TEGV）的臨床癥狀極為相似，但其病原是另一種傳染性稍差的冠狀病毒，豬流行性腹瀉病毒（porcineepidemic diarrhea virus，PEDV）。哺乳仔豬在很多暴發的疾病中都不受感染。患病仔豬的主要臨床癥狀是水樣腹瀉，有時會導致嘔吐，死亡率可高達80%。該病毒也可以引起生長育肥豬的腹瀉。盡管病毒感染成年豬后有時會導致腹瀉，但大部分情況下不表現臨床癥狀。可以通過在豬原代細胞培養物或Vero（非洲綠猴腎）細胞對病毒進行分離，也可以通過免疫熒光或ELSA 方法來檢測小腸或糞便中的PEDV 抗原，通過 RT-PCR 來檢測病毒RNA，或者通過證實康復豬體內病毒特異的抗體進行確定，通過上述方法以達到對該病的診斷。目前，在一些國家已經有針對該病的弱毒苗在使用。

1 流行情況

自上世紀80 年代初以來，我國就出現了PED 的區域性暴發。

2 病理變化

腸系膜血管淤血多見，腸系膜淋巴結水腫。腸道泌乳不足，作為吸收不良的指標之一。受感染的豬持續嚴重腹瀉，在腹瀉發生后3～5d 出現低到中度食欲，隨后就死亡。

病毒復制發生在小腸和結腸的上皮細胞中。在小腸中，病毒使腸絨毛縮短。但與豬傳染性胃腸炎病毒對于細胞的破壞率和嚴重程度相比，不太明顯。

3 臨床癥狀

潛伏期長達4d。受感染動物的年齡、相關的發病率和死亡率是可變的。一些農場中，所有年齡段的豬都會發病，1 周內仔豬的死亡率可能接近50%。水樣腹瀉加上之前的嘔吐，為主要臨床表現。偶爾有幾只動物突然死亡，驗尸發現其可出現背部肌肉明顯壞死。該病毒可能會通過豬連續繁殖，持續污染大型養殖場。大部分受感染的豬約1 周后痊愈，死亡率通常較低。

4 傳播方式

4.1 直或間接接觸傳播糞口途徑是PEDV 直接傳播的主要途徑。在養殖場內部和養殖場之間也經常發生PEDV的間接接觸傳播，特別是在生物安全水平較低的情況下。其他受污染的器械包括：運輸拖架、養殖場工人的手、靴子和衣服，飼料、飼料添加劑以及用于運輸散裝飼料或飼料袋。PEDV 在室溫下保持35d 的傳染性。飼料制造過程中也可發生PEDV 交叉污染。

4.2 氣溶膠（間接接觸）傳播氣溶膠是另一種傳播途徑，也是從養殖場到養殖場空氣傳播的另一條途徑。患病仔豬將感染性PEDV 粒子氣溶膠通過空氣傳播，使PEDV在仔豬群體中傳播，并且新生仔豬對病毒高度敏感。霧化吸入的PEDV 并不只感染豬的腸道，但它也感染鼻腔里的上皮鼻黏膜固有層或淋巴組織中的樹突狀細胞攜帶PEDV并將其傳遞給CD3。然而，與新生仔豬相比，可能需要更高劑量的霧化吸入PEDV 來感染斷奶和年齡較大的豬。

4.3 豬場間PEDV 直接接觸或氣溶膠傳播速率的變化PEDV 感染和疾病的嚴重程度，以及PEDV 的傳播能力，取決于豬群的整體免疫和健康狀況以及養殖場的生物安全水平。盡管如此，PEDV 的傳播性直接接觸或氣溶膠接觸也取決于PEDV 基因群。2010 年10 月，一株變異株出現，PEDV 感染急劇增加，嚴重損害了養豬業。

5 診斷

對于急性腹瀉的豬進行安樂死，取小腸樣品做冷凍切片，通過直接免疫熒光法檢測，靈敏而可靠，尤其是新生仔豬的標本。可以通過ELSA 法檢測急性腹瀉的豬的糞便、腸道內容物中的病毒抗原。已有報道，通過一種雙向設計的 RT-PCR 檢測并可在區分豬流行性腹瀉病毒和傳染性胃腸炎病毒，成對的血清樣品，使用阻斷ELSA 或間接免疫熒光法、PEDV 陽性腸冷凍切片法都可以檢測到抗體。

由于PEDV 感染的跡象在臨床癥狀和病理上與傳染性胃腸炎引起的沒有區別。PED 的診斷不能僅僅根據臨床癥狀和組織病理學改變來進行。因此，必須在實驗室進行鑒別診斷，以證明PEDV 或其抗原的存在。PEDV 檢測方法，包括免疫熒光（IF）或免疫組織化學（IHC）檢測、電鏡、病毒分離、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）和多種逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）技術已被廣泛應用。考慮到它們的快速傳播時間和敏感性，常規和實時RT-PCR 系統作為商用試劑盒被廣泛用于流行病或地方病暴發期間的PEDV 檢測，以及檢疫或屠宰的豬。

許多血清學檢測方法已經被用于PEDV 抗體的檢測，包括間接熒光抗體（IFA）染色、ELISA 和病毒中和（VN）試驗。由于新生仔豬對PEDV 的被動免疫，是否存在抗PEDV 抗體在母豬群中需要測量抗PEDV 中和抗體的數量（或滴度），特別是抗血清和初乳中S 蛋白的中和抗體，以監測母豬免疫后的免疫水平。在這方面，VN 檢測對于評估仔豬從母豬身上獲得的保護性抗體水平是必不可少的。然而，這種方法費時費力，不能選擇性地檢測代表黏膜免疫的分泌型IgA 抗體。相反，IFA 和間接ELISA 檢測抗體的方法與VN 檢測方法相比，具有同樣的特異性，是耗時更短和更容易執行的方法。可通過監測PEDV 流行情況確定養殖場的感染狀況。

6 治療和控制

該病沒有特效療法。一般使用疫苗進行預防，一種口服的減毒活疫苗已在韓國被報道。農場里動物之間的適當的衛生控制措施是預防疾病所必需的。種豬場內如果發生疫情，良好的衛生措施有助于減緩感染的傳播。

7 預防和控制

7.1 傳統疫苗

1993 年，Wang 等人研制了PEDV組織滅活疫苗。通過對仔豬口服強毒PEDV，收集其腸道內容物和組織，樣品經滅活后制成乳劑，注入尾底。Ma等人（1994 年）研制了一種氫氧化鋁佐劑滅活疫苗，對Vero 細胞中的CV 777 株進行了減毒，豬尾部接種疫苗后，仔豬主動和被動免疫率均在85%以上。

雖然自2010 年底以來，已經試驗了各種方法，包括自體疫苗、商業化疫苗和腸道內容物喂養，以控制PED的暴發，但它們的效果一直很差。一些豬場仍有反復腹瀉疫情的報道。對PEDV 變異體的致病機制及其免疫應答的認識不足，限制了所使用的預防方法的有效性。在2013 年美國暴發PED 之后，Collin 等人開發了一種滅活疫苗。以分離的美國變異型PEDV株系為基礎，對4 周齡仔豬進行免疫接種，滅活疫苗可激發足夠的體液免疫，以防止感染。2015 年3 月，由減毒的TEGV（H 株）、PEDV（CV 777 株、GI 亞組）和PoRV（NX 株）研制的三價疫苗在中國獲得批準。2015 年1 1 月，由TGEV（HB08 株）和PEDV（ZJ 08 株，GI-b 亞組）組成的雙弱毒疫苗也正式投放市場。考慮到疫苗商品化（GI 基因群）與現場流行株（GII 基因群）的差異，應研制新一代疫苗，以控制PED。近年來，國內研究人員在GII基因群中根據現場流行的PEDV 株研制了二價（PEDV）和TGEV（TGEV）滅活疫苗，實驗和臨床資料表明，該疫苗對GII 流行的PEDV 有較好的保護作用。以GII 基因群內PEDV 變異株為基礎的滅活疫苗免疫豬，其抗PEDV變異株（GII 基因群）的中和抗體滴度（GII 基因群）明顯高于商業化疫苗（GI基因群）。目前，以流行的PEDV（GII基因群）為基礎的疫苗在我國正處于臨床復檢階段。

7.2 PEDV 滅活消毒劑及受污染拖車清理用消毒藥可降低PEDV RNA 的含量，對糞便中PEDV 進行滅活。超氧化水（pH6.0）經10～90 min 接觸后，在室溫下也能有效地滅活PEDV。使用高壓動力清洗拖車，然后進行消毒和干燥，對其去污是有效的。過氧化氫或高氧消毒劑30 min 后，在20℃的污染金屬（拖車）表面有效地滅活PEDV。

7.3 畜牧管理加強生物安全，如運輸拖車和其他可能受污染的器材的去污和消毒，供應安全飼料或飼料添加劑及維持豬場及豬場工人的衛生措施，是防止PEDV 直接或間接接觸傳播的關鍵。在2013～2017 年流行期間，運輸拖車（19/72群；26.4%）或飼料（21/72群；29.2%）被認為是美國養豬場的主要污染動物（共計55.6%）。感染PEDV 的豬場對其他人或野生動物的蔓延也應通過高度隔離協議加以控制，在腹瀉結束和疾病得到控制之前不應進行生豬貿易。

8 結語

流行病PED 的消失和再次出現表明，PEDV 能夠有效地擺脫現有的疫苗接種、生物安全和控制系統。地方性PED 是一個嚴重的問題，由于多個PEDV 變異體出現或可能輸入各國，這一問題更加嚴重。流行的PEDV 毒株迅速傳播，造成大量的豬死亡和巨大的經濟損失，以便在受影響地區預防和控制這種疾病，并研制出有效的疫苗。

高死亡率的PEDV 感染，血清陰性哺乳仔豬最可能與廣泛脫水，造成嚴重的絨毛萎縮。在感染的哺乳仔豬中，隱窩細胞增殖增加，受損的腸上皮細胞重組，成熟的腸細胞遷移到絨毛尖端，可能不足以防止仔豬嚴重脫水。