動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)采樣中出現(xiàn)的問(wèn)題與采樣要求

丁媛媛/江蘇省昆山市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 215300

楊建生/江蘇省昆山市畜牧獸醫(yī)站 215300

動(dòng)物疫病防控工作直接關(guān)系到畜牧業(yè)的健康發(fā)展，而采樣工作直接影響動(dòng)物疫病的監(jiān)測(cè)結(jié)果，監(jiān)測(cè)結(jié)果對(duì)動(dòng)物疫病防控工作、重大動(dòng)物疫病防控決策以及防控措施的制定有重要的指導(dǎo)意義，有著舉足輕重的地位。

基層動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)采樣存在許多問(wèn)題，例如采樣不規(guī)范、采樣流程沒(méi)有無(wú)菌操作、采樣部位不合適、樣品保存與運(yùn)輸不恰當(dāng)?shù)纫幌盗袉?wèn)題直接影響監(jiān)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。雖然各地獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力不斷提升，但在復(fù)雜的動(dòng)物疫病形勢(shì)下，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性是現(xiàn)階段的首要目標(biāo)。

1 常見的采樣問(wèn)題

1.1 樣品溶血現(xiàn)象樣品溶血現(xiàn)象很普遍，采血工作大多由村級(jí)防疫員完成，由于各種原因，溶血現(xiàn)象或多或少均存在，但如果大部分血樣均溶血，導(dǎo)致樣品質(zhì)量不合格。產(chǎn)生溶血現(xiàn)象的原因主要有以下幾個(gè)方面，一是抽血速度過(guò)快，血液快速通過(guò)采血針頭時(shí)容易導(dǎo)致紅細(xì)胞破裂；二是在冬天采血時(shí)，圈舍與室外溫差大，采血后立即將血液放置在室外，快速冷卻也容易造成紅細(xì)胞破裂；三是在血樣受到劇裂震蕩導(dǎo)致溶血；四是注射器或采血器已被污染。五是采血操作不當(dāng)，反復(fù)穿刺導(dǎo)致血腫，收集到的血液為血腫部分的血液。六是血液的保存和運(yùn)輸不合理，全血樣品儲(chǔ)存溫度過(guò)高或過(guò)低均會(huì)導(dǎo)致溶血。

1.2 樣品被污染樣品被污染的情況通常是由于未進(jìn)行無(wú)菌操作導(dǎo)致的，在進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定或病毒分離鑒定時(shí)，如果樣品被污染可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。而對(duì)于免疫抗體的檢測(cè)影響不大。

1.3 組織病料不新鮮在動(dòng)物疫病診斷時(shí)常常遇到畜禽死亡很久后才采集組織病料的情況，這樣的組織病料對(duì)于細(xì)菌分離鑒定和病理切片是沒(méi)有價(jià)值的，例如畜禽死亡后一段時(shí)間，腸道細(xì)菌或某一器官感染的細(xì)菌會(huì)擴(kuò)散至全身，因此分離到的細(xì)菌不一定是導(dǎo)致死亡的病原菌，不新鮮的組織病料做細(xì)菌分離會(huì)干擾診斷。

1.4 樣品類型或采樣部位不正確根據(jù)各種病原菌及病毒對(duì)組織嗜性的不同，以及發(fā)病的臨床經(jīng)過(guò)和畜禽的特點(diǎn)，不同的疾病診斷時(shí)，采用的樣品類型是不同的，例如在進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測(cè)時(shí)，通常采用血清樣品；在進(jìn)行健康活禽高致病性禽流感監(jiān)測(cè)時(shí)，采取的是氣管-泄殖腔雙棉拭子。再如牛口蹄疫病原學(xué)的監(jiān)測(cè)時(shí)，如果有臨床癥狀，出現(xiàn)水泡，可以采水泡液或水泡皮，如果是健康牛群，可以采集O-P 液。如果樣品類型或采樣部位不正確，直接影響檢測(cè)的結(jié)果。

1.5 樣品數(shù)量過(guò)少或單個(gè)樣品量不足樣品數(shù)量過(guò)少或單個(gè)樣品量不足是常見的問(wèn)題，在進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測(cè)或疫病診斷時(shí)，采集的畜禽樣品數(shù)量應(yīng)達(dá)到一定比例，例如存欄的10%以上，有的疾病篩查甚至要求達(dá)到100%，如果樣品數(shù)量過(guò)少，監(jiān)測(cè)結(jié)果只能代表少數(shù)，不能代表整個(gè)群體。另一個(gè)方面是單個(gè)樣品量不足，在進(jìn)行疫病監(jiān)測(cè)時(shí)，一份血樣通常需要做多個(gè)疫病的檢測(cè)，例如一份雞的血清樣品，可能需要同時(shí)開展高致病性禽流感H5 亞型、H7 亞型及新城疫免疫抗體的檢測(cè)，如果血清過(guò)少，將不能完成所有檢測(cè)。

1.6 樣品不真實(shí)在基層動(dòng)物防疫工作中，在進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測(cè)時(shí)常發(fā)現(xiàn)，某動(dòng)物群體的免疫抗體要么全部合格，要么全部不合格，病原學(xué)檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)某動(dòng)物群體要么全部是陰性，要么全部陽(yáng)性。通過(guò)調(diào)查、重新檢測(cè)及核實(shí)后，發(fā)現(xiàn)原因是村防疫員在采樣時(shí)將1 個(gè)動(dòng)物的血樣分為幾份甚至幾十份。這種樣品不真實(shí)的情況時(shí)有發(fā)生。

1.7 采樣記錄不完整采樣記錄很重要，詳細(xì)的記錄有利于問(wèn)題追溯和流行病學(xué)調(diào)查。但基層防疫員在采樣后往往未填寫詳細(xì)的采樣記錄。

2 常用樣品的采樣要求

2.1 免疫抗體檢測(cè)樣品通常采用血清樣品進(jìn)行免疫抗體檢測(cè)。血清樣品的采集比較簡(jiǎn)單，采集畜禽全血，不需要添加任何抗凝劑，靜置凝固后析出的即為血清，可使用離心機(jī)進(jìn)行分離。血清樣品的采樣要求為不溶血、無(wú)污染、血清量足夠，血清可放置于4℃短時(shí)間冷藏或-20℃長(zhǎng)期冷凍保存。并做好采樣記錄，將采樣登記表隨樣品保存及運(yùn)輸。

2.2 病原學(xué)檢測(cè)樣品病原學(xué)檢測(cè)樣品類型較多，其采樣要求及技術(shù)較為復(fù)雜。樣品采集要求無(wú)污染、采樣部位及樣品類型合理。例如禽咽喉-泄殖腔雙棉拭子，通常用于檢測(cè)健康活禽的高致病性禽流感，采樣時(shí)需要將一根滅菌的棉拭子伸入氣管，輕柔旋轉(zhuǎn)擦拭，另一根棉拭子插入泄殖腔（深約2～5 cm）輕柔旋轉(zhuǎn)以粘取糞便及黏膜組織。將兩支棉拭子放入同一離心管中，離心管中可提前放入含抗生素的緩沖液。再如牛羊O-P 液的采集，主要用于口蹄疫的檢測(cè)，采樣要求無(wú)污染，根據(jù)家畜的大小選擇合適的探杯，在采樣前對(duì)探杯進(jìn)行消毒后再用溫水進(jìn)行清洗，每采一頭家畜后均需要重復(fù)消毒和清洗步驟，取出6mL 左右O-P 液放入含有緩沖液或細(xì)胞培養(yǎng)液的的離心管中冷藏運(yùn)輸。

表1 常見病原學(xué)檢測(cè)采樣

3 結(jié)語(yǔ)

采樣是開展實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，了解畜禽免疫情況及疫病形勢(shì)的重要基礎(chǔ)，應(yīng)確保樣品的真實(shí)性、可行性及代表性。采樣的數(shù)量還應(yīng)滿足生物統(tǒng)計(jì)的意義。根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康暮筒煌膭?dòng)物疫病，所采的樣品類型有所差異，采集的樣品應(yīng)具有代表性和可行性，同時(shí)還要避免污染，例如在采集組織樣品時(shí)，應(yīng)先取心肝肺等實(shí)質(zhì)器官，再取消化道組織可避免交叉污染。而在采集牛、羊O-P 液時(shí)應(yīng)提前對(duì)家畜采取禁食5h。另外還應(yīng)根據(jù)血量的需求選擇合適的采血方法。在基層常常出現(xiàn)養(yǎng)殖場(chǎng)、養(yǎng)殖戶不配合采樣工作導(dǎo)致采樣難的情況，開展動(dòng)物防疫的工作人員應(yīng)積極向養(yǎng)殖場(chǎng)、養(yǎng)殖戶宣傳動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)的重要性，必要時(shí)運(yùn)用法律手段采取強(qiáng)制措施。

在完成采樣的技術(shù)操作外，采樣記錄也是采樣工作中尤為重要的一項(xiàng)，這是追溯樣品來(lái)源，進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查的重要依據(jù)。采樣記錄應(yīng)含有相關(guān)的完整信息，盡量詳細(xì)，例如養(yǎng)殖名稱、地址、畜禽種類、免疫情況、聯(lián)系人及聯(lián)系方式，采樣的編號(hào)和名稱等，有畜禽死亡的還應(yīng)記錄臨床癥狀、用藥情況、飼養(yǎng)情況、發(fā)病及死亡情況。采集的樣品應(yīng)按照要求保存和運(yùn)輸，及時(shí)送到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。

在進(jìn)行人獸共患病的監(jiān)測(cè)采樣時(shí)應(yīng)注意做好個(gè)人的生物安全防護(hù)，例如穿好防護(hù)服、手套、鞋套及口罩等。