壯藥材“滇桂艾納香”?；煜幕参锛贃|風草和東風草的鑒別研究

蘇宏娜，李學學，孔苑琳，李瑩，李文兵，農常東，李修善，劉圓

1. 西南民族大學 藥學院，成都 610225；2. 四川省羌彝藥用資源保護與利用技術工程實驗室，成都 610225；3. 西南民族大學 青藏高原研究院，成都 610225；4. 廣西萬壽堂藥業有限公司，南寧 530000；5. 西南民族大學 民族醫藥研究院，成都 610225

“滇桂艾納香”作為廣西壯族常用藥材，具有活絡經血、祛風除濕、止血、利尿等功效，用于治療經期不準、產后大出血、不孕癥、陰瘡、風濕骨痛等癥狀[1-3].《廣西中藥材標準》(第2冊，1996年版)、《湖南省中藥材標準》(2009年版)收載假東風草Blumeariparia(Bl. ) DC. 作為“滇桂艾納香”藥材基原植物，別名白花九里明、華艾納香等.課題組實地考察中發現，東風草B.megacephala(Randeria) Chang et Tseng 別名大頭艾納香、管芽，在廣西壯醫臨床、民間使用也常作為“滇桂艾納香”藥材使用，部分文獻中也存在將這兩個種混淆的情況[4-6].

假東風草和東風草在植物學形態上較為相似，“滇桂艾納香”藥材以全草入藥，但湖南省、廣西省標準僅收載了假東風草作為“滇桂艾納香”的藥材來源，且僅收載了假東風草的性狀以及根和莖的組織切片，尚未收載葉組織結構和粉末鑒別.目前鮮有文獻對東風草的顯微組織結構鑒別的報道，尚無對假東風草和東風草花粉粒形態研究的報道.林雀躍等[7]通過對“滇桂艾納香”及東風草的品種考證和資源調查發現：1836年假東風草被正式命名，而直到1974年東風草才被命名，且一開始是作為假東風草的一個變種來命名的，后來由于各種原因，最終將兩者分列為同屬兩種不同的植物，也就是說東風草實際是由假東風草中分化出來的一個種，但有些學者還是保留這兩個種其實為一個種的意見.

因此，本文擬從原植物形態、藥材性狀鑒別、顯微鑒別、花粉粒電鏡微形態鑒別等方面，對假東風草和東風草的植株、根、莖、葉、花粉粒進行系統的鑒別研究，基于充分的實驗數據比較，為壯藥材假東風草和東風草的歸屬、鑒別提供科學依據.

1 材料與儀器

1.1 材料與試劑

假東風草和東風草均由課題組采于廣西省百色市、南寧市，經西南民族大學劉圓教授、李瑩副教授鑒定為假東風草Blumeariparia(Bl. ) DC.和東風草B.megacephala(Randeria) Chang et Tseng，標本現存于西南民族大學民族藥材標本館，采集信息見表 1.

表1 假東風草(小花種)和東風草(大花種)樣品信息

續表1

試劑主要有水合氯醛試液、正丁醇、無水乙醇、二甲苯，國藥集團化學試劑有限公司(貨號：10023418)；番紅固綠(植物)染液，Servicebio公司(貨號：G1031)；FAA固定液(自配)；電鏡固定液，賽維爾生物；鋨酸、PBS、乙酸異戊酯、冰醋酸、乙酸乙酯、正丁醇、無水乙醇，均為分析純.

1.2 實驗儀器

OLYMPUS BX41光學顯微鏡，日本OLYMPUS公司；JEC-1600 Auto Fire Coater鍍膜器，日本JEOL公司；JJ-12J脫水機，武漢俊杰電子有限公司；JB-P5包埋機，武漢俊杰電子有限公司；RM2016病理切片機，上海徠卡儀器有限公司；JB-L5凍臺，武漢俊杰電子有限公司；Nikon DS-U3成像系統，日本尼康；K850臨界點干燥儀，Quorum；MSP-2Sp、離子濺射儀，IXRF；SU8100掃描電子顯微鏡，HITACHI.

2 方 法

2.1 原植物鑒別

參照文獻[8]對原植物的根、莖、葉、花等特征進行鑒別研究.

2.2 性狀鑒別

參照文獻[2-3，8]對藥材的形狀、大小、顏色、表面特征、質地、斷面、氣味等特征進行觀察.

2.3 顯微鑒別

2.3.1 組織顯微鑒別

將采集到的假東風草、東風草選取根、莖、葉用清水清洗干凈，浸泡入自制的FAA固定液中固定24 h，按常規石蠟切片法切片，番紅-固綠法染色，中性樹膠封片制作成永久石蠟切片[9].顯微鏡下觀察，顯微成像系統成像.

2.3.2 粉末顯微鑒別

假東風草、東風草粉碎過4號篩，用解剖針挑取樣品粉末少許，置載玻片的中央，分別滴加適宜的水合氯醛和稀甘油，用解剖針攪勻，蓋上蓋玻片觀察.

2.4 花粉粒電鏡鑒別 [10-12]

新鮮假東風草、東風草花藥投入電鏡固定液室溫固定2 h，再轉移至4 ℃保存.固定好的樣品經0.1 mol/L磷酸緩沖液PB((pH值為7.4)漂洗3次，每次15 min.1%的鋨酸0.1 mol/L磷酸緩沖液PB(pH值為7.4)室溫固定1～2 h.0.1 mol/L磷酸緩沖液PB(pH值為7.4)漂洗3次，每次15 min.樣本依次入30%，50%，70%，80%，90%，95%，100%，100%酒精每次15 min，乙酸異戊酯 15 min進行脫水處理，將脫水后的樣本放入臨界點干燥儀內進行干燥.將干燥樣本緊貼于導電碳膜雙面膠上放入離子濺射儀樣品臺上進行噴金30 s左右，掃描電子顯微鏡下觀察.

2.5 薄層鑒別

針對“滇桂艾納香”藥材現行地方標準粗淺、專屬性不強的問題，參照《中國藥典》(2020年版)薄層鑒別項要求和文獻[7]建立假東風草和東風草的薄層色譜鑒別方法.

取藥材粉末1 g，加70%甲醇40 mL，超聲處理30 min，濾過，取30 mL濾液旋干，殘渣加甲醇5 mL溶解定容，作為供試品溶液.吸取上述溶液2 μL點于同一硅膠GF254板上，展開劑為乙酸乙酯、甲酸、冰醋酸和水，比例為13∶1∶1∶2，展開，取出，晾干，噴以10% 硫酸乙醇溶液，105 ℃烘約5 min，置紫外光365 nm下檢視.

3 結果與分析

3.1 原植物

課題組通過實地考察、采集，系統比較了假東風草(小花種)與東風草(大花種)原植物特征，原植物及其詳細特征見圖1至圖4，假東風草與東風草原植物比較結果見表2.

表2 假東風草(小花種)、東風草(大花種)原植物比較結果

圖1 假東風草(小花種)和東風草(大花種)植物圖

圖2 假東風草(小花種)和東風草(大花種)各部位特征圖

3.2 性狀鑒別

觀察、比較多個批次假東風草(小花種)與東風草(大花種)藥材特征，藥材見圖5，假東風草與東風草藥材特征比較結果見表3.

圖3 假東風草(小花種)和東風草(大花種)花特征結構圖

圖4 假東風草(小花種)和東風草(大花種)種子詳圖

表3 假東風草(小花種)、東風草(大花種)藥材特征比較結果

圖5 假東風草(小花種)和東風草(大花種)藥材圖

3.3 顯微鑒別

課題組通過觀察多個假東風草(小花種)與東風草(大花種)根、莖、葉石蠟切片與粉末特征裝片，系統比較了假東風草(小花種)與東風草(大花種)根、莖、葉和粉末顯微特征，見圖6至圖9，假東風草與東風草顯微鑒別特征比較結果見表4.

3.4 花粉粒電鏡鑒別

觀察、測量了大約10粒外形飽滿、發育較好的花粉粒，系統比較了假東風草(小花種)與東風草(大花種)花粉粒形態特征，其花粉粒形態及表面紋飾見圖10，假東風草與東風草花粉粒形態特征比較結果見表5.

表4 假東風草(小花種)、東風草(大花種)顯微特征比較結果

1為木栓層；2為油室；3為栓內層；4為射線；5為韌皮部；6為木質部.圖6 假東風草(小花種)和東風草(大花種)根部橫切面圖

1為角突；2為表皮；3為非腺毛；4為皮層；5為中柱鞘纖維束；6為韌皮部；7為木質部；8為射線；9為髓部；10為紅色內含物.圖7 假東風草(小花種)和東風草(大花種)莖橫切面圖

1為柵欄組織；2為上表皮；3為厚角組織；4為海綿組織；5為維管束；6為下表皮；7為紅色內含物；8為晶體.圖8 假東風草(小花種)和東風草(大花種)葉橫切面圖

圖9 假東風草(小花種)、東風草(大花種)粉末顯微特征圖

表5 假東風草(小花種)、東風草(大花種)花粉粒形態比較結果

圖10 假東風草(小花種)和東風草(大花種)花粉粒的外部形態特征圖

3.5 薄層色譜鑒別

結果顯示假東風草具特征斑點C，H，東風草不具備特征斑點C，H，見圖11.表明該方法專屬性好，可以區分假東風草和東風草.

1-5為假東風草；6為“滇桂艾納香”對照藥材(中檢院)；7為3，4-二咖啡酰奎寧酸；8為3，5-二咖啡?？鼘幩?；9-13為東風草.圖11 假東風草(小花種)和東風草(大花種)薄層色譜圖

4 結論與討論

實驗研究發現：假東風草和東風草應為菊科艾納香屬下兩個不同的種.假東風草和東風草原植物和性狀特征可根據花序的大小、疏密或葉柄有無加以區分；顯微組織結構特征可根據葉主脈上突明顯與否、主脈維管束差異進行區分；粉末特征無明顯區別；花粉粒表面特征：假東風草和東風草的花粉粒均為球形或近球形，三孔溝萌發孔；假東風草花粉粒上表面的刺狀突起比東風草更尖，孔穴比東風草分布稀疏且沒有不規則孔眼；假東風草花粉粒比東風草小，瘤狀凸起比東風草大.結果表明，假東風草和東風草的原植物、性狀、內部顯微組織結構、粉末特征、花粉粒表面特征等區別明顯.

本實驗參考《中國藥典》(2020年版)對于中藥材下所收載的項目和相關顯微鑒別規定、方法等，系統地對假東風草進行了鑒別研究，同時對其易混淆且藥效相似的東風草也進行了系統研究.原植物和性狀鑒別對假東風草省標“性狀”項下的內容進行了補充研究；組織結構、粉末鑒別對假東風草省標“鑒別”項下的內容進行了補充研究，提供了詳細的第一手彩色圖像和數據.花粉的生物特征穩定，可以作為品種間鑒別的依據，可以通過觀察假東風和東風草的花粉粒結構特征，以達到快速、準確區分這兩個品種.

雖然假東風草和東風草在藥效上有一定的相似性，但建議后續進一步開展藥效一致性評價等相關研究，探討制藥企業是否能夠將東風草納入“滇桂艾納香”作為新的基原植物，擴大藥源，以緩解假東風草的藥用資源不足的問題.