穿心蓮內(nèi)酯對(duì)盲腸結(jié)扎穿孔誘導(dǎo)的膿毒癥大鼠心肺功能和炎癥損傷的保護(hù)作用

吳海濤，周洪禮，宋玉，石海霞

膿毒癥是一種全身炎癥反應(yīng)綜合征，患者的病情多變且不穩(wěn)定，容易合并急性腎損傷、心肌損傷等，隨著病情的進(jìn)展可能會(huì)出現(xiàn)多器官功能衰竭［1-2］。目前對(duì)于膿毒癥的治療多采取抗生素控制感染以及綜合支持治療等手段［3］。然而，抗生素治療效果并不顯著，因此尋找新型控制感染及炎癥的方法十分重要。穿心蓮內(nèi)酯是爵床科植物穿心蓮的主要有效成分，具有抗炎、抗病毒、抗腫瘤以及增強(qiáng)免疫等作用［4］。有研究發(fā)現(xiàn)，穿心蓮內(nèi)酯對(duì)膿毒癥大鼠肝損傷具有保護(hù)作用［5］；然而穿心蓮內(nèi)酯對(duì)膿毒癥患者心肺功能損傷是否具有保護(hù)作用尚不明確。本研究旨在探討穿心蓮內(nèi)酯對(duì)盲腸結(jié)扎穿孔（cecal ligation and puncture，CLP）誘導(dǎo)的膿毒癥大鼠心肺功能和炎癥損傷是否具有保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1動(dòng)物 SPF級(jí)6周齡SD大鼠75只，體質(zhì)量200～220 g，平均（209±18）g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0011；本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過本院動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意，且嚴(yán)格遵循動(dòng)物實(shí)驗(yàn)減少（Reduction）、優(yōu)化（Refinement）和替代（Replacement）的3R原則。

1.1.2藥物與試劑 穿心蓮內(nèi)酯（CAS：5508-58-7；貨號(hào)：A800173）購自Sigma-Aldrich公司；肌酸激酶同工酶MB（CKMB；貨號(hào)：E019）和心肌肌鈣蛋白I（cTnI；貨號(hào)：E087）試劑盒購自上海滬震生物科技有限公司；蘇木素、伊紅購自武漢博士德生物有限公司；中性福爾馬林、乙醇、二甲苯購自天津科密歐有限公司；腫瘤壞死因子（TNF）-α、白細(xì)胞介素（IL）-6、IL-1β、中性粒細(xì)胞趨化因子1（CINC-1）檢測試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-9、B淋巴細(xì)胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）、P65兔抗鼠一抗及HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗購自美國Thermo公司。

1.1.3儀器 多普勒彩色超聲診斷儀（型號(hào)：DW-T6）購自美國GE公司；全自動(dòng)生化分析儀（型號(hào)：AU5800）、全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（DxH800）購自貝克曼庫爾特公司；動(dòng)物肺功能分析系統(tǒng)（型號(hào)：AniRes2005）購自北京貝蘭博科技有限公司；模塊化電子天平（型號(hào)：Cubis）購自蘇州賽多斯有限公司；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（型號(hào)：SF-TGL-20R）購自上海菲恰爾分析儀器有限公司；正置金相顯微鏡（型號(hào)：WMJ-9688）購自上海無陌光學(xué)儀器有限公司；快速智能蛋白印跡儀（型號(hào)：L00816C）、快速智能蛋白濕轉(zhuǎn)儀（型號(hào)：L00686C）、快速智能蛋白染色儀（型號(hào)：L00657C）購自南京金斯瑞生物科技有限公司；震蕩切片機(jī)（型號(hào)：Leica VT1200）、冰凍切片機(jī)（型號(hào)：CM3050S）購自德國Leica公司；血?dú)夥治鰞x（ST2000）購自上海涵飛醫(yī)療器械有限公司。

1.2研究方法

1.2.1分組及模型建立 將75只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為：假手術(shù)組（A組）、脂多糖模型組（B組）、CLP組（C組）、CLP+低劑量穿心蓮內(nèi)酯組（D組）和CLP+高劑量穿心蓮內(nèi)酯組（E組），每組15只。A組僅進(jìn)行開腹、分離盲腸及關(guān)腹手術(shù)。B組使用1 g∕L的脂多糖以腹腔注射10 mg∕kg建立膿毒癥模型［6］。C、D、E組參照郝軍艦等［7］研究采用CLP手術(shù)誘導(dǎo)膿毒癥。具體操作如下：使用戊巴比妥鈉麻醉大鼠，沿腹壁做切口，取出大鼠盲腸后用線結(jié)扎50%近端盲腸并使用18號(hào)針頭穿孔盲腸2次，兩針眼相距約2 mm，擠出少量糞便后將其放回腹腔，逐層關(guān)腹，消毒。D組和E組分別在建模處理1 h、6 h、12 h后，腹腔注射10 mg∕kg和20 mg∕kg的穿心蓮內(nèi)酯［8-9］，注射劑量為0.2 mL，其余各組注射等量生理鹽水。

1.2.2心臟功能檢測 建模處理24 h后，記錄各組大鼠心率（HR）。以3%水合氯醛麻醉大鼠，小心剪凈左側(cè)胸部鼠毛，左側(cè)臥位，采用DW-T6彩色多普勒超聲儀檢測各組大鼠左心室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fractions，LVEF）。

1.2.3心肌損傷標(biāo)志物檢測 建模處理24 h后，取頸總動(dòng)脈血1 mL，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測CK-MB和cTnI水平，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.2.4肺功能檢測 建模處理24 h后，用AniRes2005動(dòng)物肺功能分析系統(tǒng)，在常溫下，將大鼠置于體描箱內(nèi)，檢測大鼠肺氣道阻力改變和肺容積變換情況。股動(dòng)脈取血，用血?dú)夥治鰞x檢測氧分壓［p（O2）］，計(jì)算動(dòng)脈血氧分壓∕吸入氣氧濃度［PaO2∕FiO2］。處死大鼠，分離肺組織，常規(guī)固定包埋，4μm連續(xù)切片后使用HE染色進(jìn)行組織學(xué)觀察；采用Smith評(píng)分法［10］對(duì)肺水腫、肺泡及間質(zhì)炎癥、肺泡及間質(zhì)出血、肺不張和透明膜形成分別進(jìn)行0～4分評(píng)分，然后取各項(xiàng)評(píng)分總和作為肺損傷評(píng)分：無損傷為0分，病變范圍＜25%為1分；25%≤病變范圍＜50%為2分；50%≤病變范圍＜75%為3分；病變范圍≥75%為4分。取各組大鼠左肺組織稱量濕質(zhì)量，60℃烘干至質(zhì)量恒定后稱量干質(zhì)量，計(jì)算濕∕干質(zhì)量（W∕D）比值。

1.2.5HE染色觀察心肺損傷情況 建模處理24 h后，HE染色觀察大鼠肺組織及病理損傷情況，取大鼠肺組織和心肌組織，使用二甲苯浸泡，梯度乙醇脫水，蘇木精浸泡，鹽酸乙醇分化，沖洗，伊紅染色，乙醇浸泡，二甲苯浸泡，中性樹膠封片，400倍光學(xué)顯微鏡下觀察。

1.2.6Western blot檢測Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2和P65蛋白的表達(dá) 建模處理24 h后，取大鼠肺組織和心肌組織，胰蛋白酶預(yù)處理后使用蛋白質(zhì)提取試劑盒提取總蛋白質(zhì)，使用BCA蛋白測定試劑盒測定總蛋白量；通過十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳將蛋白轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯（PVDF）薄膜上，PVDF膜經(jīng)5%脫脂奶粉室溫下封閉2 h后，加入1∶1 000稀釋的兔抗鼠Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2和P65一抗，4℃孵育過夜，TBST洗膜后加入1∶2 000稀釋的羊抗兔IgG二抗，室溫下孵育2 h，漂洗后采用ECL法顯色，采用Image J軟件分析蛋白條帶灰度值。以GADPH為內(nèi)參蛋白，計(jì)算各蛋白相對(duì)表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.7大鼠外周血炎性因子水平檢測 建模處理24 h后，取大鼠頸總動(dòng)脈血5 mL，采用ELISA法檢測TNF-α、IL-6、IL-1β、CINC-1水平，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作；使用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測中性粒細(xì)胞（NEU）水平。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較行LSD-t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠心功能和心肌損傷標(biāo)志物比較 與A組相比，B組和C組大鼠HR和LVEF降低，cTnI和CK-MB升高（P＜0.05）；與C組相比，D組和E組大鼠HR和LVEF升高，cTnI和CK-MB降低（P＜0.05），見表1。

Tab.1 Comparison of cardiac function and myocardial damage markers between the five groups表1 各組大鼠心功能和心肌損傷標(biāo)志物比較（±s）

Tab.1 Comparison of cardiac function and myocardial damage markers between the five groups表1 各組大鼠心功能和心肌損傷標(biāo)志物比較（±s）

＊P＜0.05；a與A組比較，b與C組比較，P＜0.05。

組別A組B組C組D組E組F n 15 15 15 15 15 HR（次∕min）368.3±29.6 202.7±32.2a 206.4±30.1a 274.0±25.8ab 312.3±31.9ab 83.312＊LVEF 0.54±0.15 0.13±0.04a 0.14±0.05a 0.30±0.09ab 0.42±0.08ab 57.628＊cTnI（μg∕L）0.08±0.03 0.62±0.10a 0.59±0.09a 0.44±0.07ab 0.21±0.05ab 159.006＊CK-MB（μg∕L）47.9±15.2 128.6±17.3a 126.2±16.4a 98.4±19.1ab 65.3±13.5ab 72.413＊

2.2 各組大鼠肺功能比較 與A組相比，B組和C組大鼠肺損傷評(píng)分、肺W∕D比值升高，p（O2）和PaO2∕FiO2降低（P＜0.05）；與C組相比，D組和E組大鼠肺損傷評(píng)分、肺W∕D比值降低，p（O2）和PaO2∕FiO2升高（P＜0.05），見表2。

Tab.2 Comparison of pulmonary function between the five groups表2 各組大鼠肺功能比較 （±s）

Tab.2 Comparison of pulmonary function between the five groups表2 各組大鼠肺功能比較 （±s）

＊P＜0.05；a與A組比較，b與C組比較，P＜0.05；1 mmHg=0.133 kPa。

組別A組B組C組D組E組F n 15 15 15 15 15肺損傷評(píng)分（分）1.8±0.4 7.3±0.8a 7.1±0.6a 4.4±0.8ab 2.6±0.5ab 232.427＊p（O2）（mmHg）84.7±8.2 49.3±5.9a 50.0±6.3a 61.7±7.7ab 72.5±8.3ab 63.732＊PaO2∕FiO2（mmHg）520.7±35.8 281.4±22.7a 286.0±20.9a 380.4±25.6ab 421.1±28.0ab 204.300＊W∕D 3.1±0.3 5.5±0.4a 5.3±0.4a 4.4±0.3ab 3.8±0.3ab 129.280＊

2.3 HE染色觀察各組大鼠心肺損傷情況 HE染色觀察各組大鼠心損傷情況發(fā)現(xiàn)，A組大鼠心肌外膜和心肌纖維完整，心肌纖維縱切面可見周期性橫紋；B組和C組大鼠心肌纖維彎曲、肌束膜破裂，肌細(xì)胞核固縮、溶解；D組和E組心肌肌纖維斷裂溶解顯著減少，肌纖維縱切面可見明暗相間帶，肌細(xì)胞核溶解、固縮顯著減少。

HE染色觀察各組大鼠肺損傷情況發(fā)現(xiàn)，A組大鼠肺泡空間清晰，肺泡間隔均勻；B組和C組肺間質(zhì)中有較多的中性粒細(xì)胞，肺泡間隔增厚且出現(xiàn)大量水腫細(xì)胞；D組和E組肺組織中性粒細(xì)胞浸潤明顯減輕，同時(shí)肺泡間隔增厚和細(xì)胞水腫明顯改善，見圖1。

2.4 各組大鼠心肺組織中Caspase-3和Caspase-9蛋白表達(dá)的比較 與A組相比，B組和C組大鼠心肌組織和肺組織中Caspase-3和Caspase-9蛋白表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05）；與C組相比，D組和E組大鼠心肌組織和肺組織中Caspase-3和Caspase-9蛋白表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05），見圖2、表3。

2.5 各組大鼠心肺組織中Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)的比較 A組大鼠心肌組織Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)水平分別為（0.09±0.03）、（0.11±0.05），與A組相比，B組和C組大鼠心肌組織Bax蛋白表達(dá)水平［（0.41±0.17）、（0.39±0.15）］顯著升高，Bcl-2蛋白表達(dá)水平［（0.08±0.02）、（0.07±0.02）］顯著降低，Bax∕Bcl-2比值顯著升高（P＜0.05）。A組大鼠肺組織Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)水平分別為（0.22±0.06）、（0.25±0.07），與A組相比，B組和C組大鼠肺組織中Bax蛋白表達(dá)水平［（0.75±0.17）、（0.79±0.15）］顯著升高，Bcl-2蛋白表達(dá)水平［（0.12±0.03）、（0.13±0.04）］顯著降低，Bax∕Bcl-2比值顯著升高（P＜0.05），見圖3、表4。

Fig.1 The cardiopulmonary damage observed by HE staining in the five groups(×400)圖1 HE染色觀察各組大鼠心肺損傷情況（×400）

Fig.2 Comparison of expressions of Caspase-3 and Caspase-9 in cardiopulmonary tissues between the five groups圖2 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測大鼠心肺組織中Caspase-3和Caspase-9蛋白的表達(dá)

Tab.3 Comparison of Caspase-3 and Caspase-9 expressions in cardiopulmonary tissues between the five groups表3 各組大鼠心肺組織中Caspase-3和Caspase-9蛋白表達(dá)的比較 （±s）

Tab.3 Comparison of Caspase-3 and Caspase-9 expressions in cardiopulmonary tissues between the five groups表3 各組大鼠心肺組織中Caspase-3和Caspase-9蛋白表達(dá)的比較 （±s）

＊P＜0.05；a與A組比較，b與C組比較，P＜0.05。

組別A組B組C組D組E組F n 15 15 15 15 15 cleaved Caspase-9∕Caspase-9心肌組織0.03±0.01 0.33±0.04a 0.31±0.05a 0.08±0.03ab 0.04±0.02b 303.682＊肺組織0.03±0.02 0.64±0.08a 0.62±0.10a 0.18±0.04ab 0.06±0.02ab 361.755＊cleaved Caspase-3∕Caspase-3心肌組織0.02±0.01 0.29±0.04a 0.27±0.04a 0.07±0.02ab 0.03±0.01b 348.947＊肺組織0.04±0.02 0.58±0.07a 0.55±0.06a 0.10±0.04ab 0.04±0.02b 531.330＊

Fig.3 Expressions of Bax and Bcl-2 in cardiopulmonary tissues of each group圖3 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測各組大鼠心肺組織中Bax和Bcl-2蛋白的表達(dá)

Tab.4 Comparison of Bax and Bcl-2 expressions in cardiopulmonary tissues of each group表4 各組大鼠心肺組織中Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)的比較（±s）

Tab.4 Comparison of Bax and Bcl-2 expressions in cardiopulmonary tissues of each group表4 各組大鼠心肺組織中Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)的比較（±s）

＊P＜0.05；a與A組比較，b與C組比較，P＜0.05。

組別A組B組C組D組E組F n 15 15 15 15 15 Bax∕Bcl-2心肌組織0.8±0.2 4.9±0.3a 5.0±0.4a 1.9±0.3ab 1.0±0.2b 770.893＊肺組織0.9±0.2 5.8±0.6a 5.9±0.5a 2.1±0.3ab 1.2±0.2b 590.096＊

2.6 各組大鼠外周血CINC-1水平及NEU比較 與A組相比，B組和C組大鼠外周血中CINC-1及NEU水平顯著升高（P＜0.05）；與C組相比，D組和E組大鼠外周血CINC-1水平及NEU顯著降低（P＜0.05），見表5。

2.7 各組大鼠外周血炎性因子水平和心肺組織中p-p65蛋白表達(dá)的比較 與A組相比，B組和C組大鼠外周血中IL-6、TNF-α和IL-1β水平及心肌組織和肺組織中p-P65∕P65值均顯著升高（P＜0.05）；與C組相比，D組和E組大鼠外周血中IL-6、IL-1β和TNF-α水平及心肌組織和肺組織中p-P65∕P65值均顯著降低（P＜0.05），見圖4，表6、7。

Tab.5 Comparison of peripheral blood CINC-1 and NEU levels between the five groups of rats表5 各組大鼠外周血CINC-1水平及NEU比較（±s）

Tab.5 Comparison of peripheral blood CINC-1 and NEU levels between the five groups of rats表5 各組大鼠外周血CINC-1水平及NEU比較（±s）

＊P＜0.05；a與A組比較，b與C組比較，P＜0.05。

組別A組B組C組D組E組F n 15 15 15 15 15 CINC-1（ng∕L）317.3±20.4 980.8±84.6a 991.5±105.2a 773.0±66.2ab 596.6±62.0ab 224.184＊NEU 0.13±0.02 0.76±0.06a 0.75±0.06a 0.54±0.05ab 0.31±0.04ab 516.592＊

Fig.4 Expression of p-P65 in cardiopulmonary tissues of each group圖4 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測各組大鼠心肺組織p-P65蛋白的表達(dá)

Tab.6 Comparison of levels of peripheral blood inflammatory factors between the five groups表6 各組大鼠外周血炎性因子水平比較（ng∕L，±s）

＊P＜0.05；a與A組比較，b與C組比較，P＜0.05。

組別A組B組C組D組E組F n 15 15 15 15 15 IL-6 18.3±3.5 96.6±10.7a 95.4±12.3a 58.9±9.1ab 25.1±6.2ab 260.359＊TNF-α 24.7±4.1 172.3±22.8a 168.5±20.4a 119.7±25.0ab 54.5±7.3ab 203.843＊IL-1β 11.5±2.9 41.2±3.7a 40.8±3.2a 26.3±5.6ab 19.7±5.9ab 182.460＊

Tab.7 Comparison of p-P65 expression in cardiopulmonary tissues between the five groups表7 各組大鼠心肺組織中p-P65蛋白表達(dá)的比較（±s）

＊P＜0.05；a與A組比較，b與C組比較，P＜0.05。

組別A組B組C組D組E組F n 15 15 15 15 15 p-P65∕P65心肌組織0.03±0.02 0.37±0.05a 0.35±0.05a 0.12±0.03ab 0.05±0.03b 281.042＊肺組織0.03±0.01 0.56±0.06a 0.54±0.07a 0.10±0.03ab 0.04±0.02b 558.939＊

3 討論

膿毒癥通常伴隨著嚴(yán)重的免疫失衡和炎癥反應(yīng)。NEU作為機(jī)體白細(xì)胞中最豐富的類型，是主要的吞噬細(xì)胞和最終效應(yīng)細(xì)胞，能夠率先滲透到感染部位并參與對(duì)機(jī)體的保護(hù)反應(yīng)，從而成為抵抗微生物入侵的免疫系統(tǒng)的重要組成部分。有研究表明，膿毒癥機(jī)體NEU顯著升高，其在相關(guān)趨化因子作用下被募集到損傷部位，加劇細(xì)胞損傷，促進(jìn)膿毒癥進(jìn)展［11］。CINC-1是募集和激活大鼠NEU的趨化因子之一。穿心蓮內(nèi)酯可通過抑制人蛋白激酶介導(dǎo)的活性氧的生成及抑制核因子（NF）-κB的激活，減少NEU黏附，從而減輕炎性因子和內(nèi)毒素誘導(dǎo)的NEU積聚，緩解感染性休克及過敏性肺炎的癥狀［12］。本研究結(jié)果顯示，CLP+低、高劑量穿心蓮內(nèi)酯組外周血CINC-1及NEU較CLP組明顯減少，與以往研究結(jié)果一致。

膿毒癥中各類炎性細(xì)胞會(huì)分泌相關(guān)炎性因子，主要包括TNF和IL，進(jìn)一步擴(kuò)大炎癥反應(yīng)和加劇病情。TNF-α還可以作用于NEU、巨噬細(xì)胞，使其釋放大量炎性介質(zhì)，造成心肌的血供減少，導(dǎo)致心肌細(xì)胞的缺氧、蛋白聚糖的合成能力下降以及Ⅰ型和Ⅱ型膠原比例失調(diào)。同時(shí)，IL-6也有促進(jìn)組織中基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）、前列腺素等炎性物質(zhì)產(chǎn)生和表達(dá)的作用，從而加速炎性反應(yīng)進(jìn)程。NF-κB家族是一類核轉(zhuǎn)錄因子，能激活靶基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)。P65是NF-κB家族中易被IL-6、TNF-α等炎性因子磷酸化而活化的成員之一。本研究結(jié)果顯示，與CLP組相比，CLP+低、高劑量穿心蓮內(nèi)酯組大鼠外周血中IL-6、IL-1β、TNF-α、CINC-1水平及NEU、心肌組織和肺組織中p-P65∕P65值均顯著降低，提示穿心蓮內(nèi)酯可通過改善免疫狀況，抑制炎癥反應(yīng)，從而改善大鼠膿毒癥癥狀。有研究顯示，Toll樣受體4（TLR4）是一種模式識(shí)別受體，其為NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上游信號(hào)分子，穿心蓮內(nèi)酯可通過調(diào)節(jié)TLR4的表達(dá)發(fā)揮抗炎作用［13］。

膿毒癥可以序貫出現(xiàn)多個(gè)器官功能損傷，其中以心、肺損傷較為常見。p（O2）、PaO2∕FiO2和肺W∕D比值是常見的肺功能指標(biāo)；肺損傷的病理表現(xiàn)為肺泡毛細(xì)血管膜通透性增加、NEU向肺的無限制浸潤、嚴(yán)重肺水腫和彌漫性肺泡損傷。本研究結(jié)果顯示，與CLP組相比，CLP+低、高劑量穿心蓮內(nèi)酯組大鼠肺損傷評(píng)分顯著降低，肺W∕D比值顯著降低，p（O2）和PaO2∕FiO2顯著升高，提示穿心蓮內(nèi)酯可改善大鼠肺功能損傷。心臟損傷會(huì)伴隨著心臟血流動(dòng)力學(xué)改變，目前HR、LVEF是判斷心功能的血流動(dòng)力學(xué)主要指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，與CLP組相比，CLP+低、高劑量穿心蓮內(nèi)酯組大鼠HR和LVEF水平顯著升高，提示穿心蓮內(nèi)酯可改善大鼠心損傷程度；而CLP+低、高劑量穿心蓮內(nèi)酯組大鼠CK-MB和cTnI水平均較CLP組顯著降低，進(jìn)一步提示穿心蓮內(nèi)酯可顯著改善大鼠心肌損傷。有研究顯示，穿心蓮內(nèi)酯具有抗細(xì)胞凋亡作用［14-15］。細(xì)胞凋亡是一種程序性的細(xì)胞死亡過程，受到相關(guān)蛋白的調(diào)控，其中Caspase是細(xì)胞凋亡的核心，Caspase-3、Caspase-9是Caspase家族的主要凋亡因子［16］。Caspase-9基因處于Caspase家族激活基因的頂端，通過自身的裂解產(chǎn)生有活性的Caspase-3，這種有活性的Caspase-3是執(zhí)行凋亡的因子，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡［17］。Bax、Bcl-2是調(diào)控細(xì)胞凋亡相關(guān)因子，但兩者生理功能相反，Bax促凋亡，Bcl-2抗凋亡。Bax、Bcl-2蛋白水平比例能反映細(xì)胞凋亡狀況，Bax∕Bcl-2值越高，細(xì)胞凋亡發(fā)生率越高。本研究結(jié)果顯示，與CLP組相比，CLP+低、高劑量穿心蓮內(nèi)酯組大鼠心肌組織和肺組織中Caspase-3、Caspase-9蛋白表達(dá)水平及Bax∕Bcl-2值顯著降低，提示穿心蓮內(nèi)酯可通過調(diào)控膿毒癥大鼠心肌組織和肺組織中凋亡蛋白的表達(dá)，從而抑制心肌細(xì)胞和肺細(xì)胞的凋亡，緩解心肌組織和肺組織的損傷。

綜上所述，穿心蓮內(nèi)酯可通過緩解CLP誘導(dǎo)膿毒癥大鼠體內(nèi)的炎癥反應(yīng)及調(diào)控凋亡蛋白的表達(dá)，改善大鼠心肺功能，保護(hù)心肺組織。