銀馬解毒顆粒治療洛哌丁胺誘導的小鼠便秘

李 根 李方園 楊 楊 馬婧威 臧彩霞 鮑秀琦 張 丹

(中國醫學科學院北京協和醫學院藥物研究所 天然藥物活性物質與功能國家重點實驗室，北京 100050)

便秘(constipation)是全球最常見的胃腸道疾病之一，主要臨床表現為排便次數減少、糞便干硬和(或)排便困難[1-2]。隨著生活節奏的加快及飲食結構的改變，便秘的發病率逐年上升，嚴重威脅人類的生活質量[3]。兩項薈萃分析研究顯示，慢性便秘的全球綜合患病率為14%[4]，中國成年人慢性便秘總患病率為10.9%[5]。雖然便秘本身的危害性有限，但研究顯示，它與腎疾病、帕金森病、結直腸癌等許多相關疾病的風險增加有關[6-8]。目前，已批準的治療便秘的藥物有滲透性瀉藥、刺激性瀉藥、促分泌劑和5-HT4受體激動劑等[9]。此外，增加膳食纖維攝入和自由攝入液體來調整飲食也是主要的治療手段[10]。

銀馬解毒顆粒是由山銀花、馬齒莧、車前草、大黃和甘草五味中藥提取物制成的純中藥顆粒劑。大黃作為銀馬解毒顆粒的成分之一，是中醫傳統的瀉劑，通過激活肥大細胞促進結腸黏液分泌，改善腸道微環境來緩解便秘[11]。然而銀馬解毒顆粒是否具有緩解便秘功效還未見文獻報道。本實驗在洛哌丁胺(loperamide)誘導的便秘小鼠模型中研究銀馬解毒顆粒緩解便秘的功能，為進一步揭示銀馬解毒顆粒的功效及開發利用提供參考依據。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1實驗動物：SPF級雄性ICR小鼠，體質量22～25 g，購于北京維通利華實驗動物技術有限公司，實驗動物生產許可證號【SCXK(京)2021-0006】。動物在(23±1)℃的溫度和(60±10)%的相對濕度下飼養，保持12 h/12 h 晝夜節律，實驗過程中動物自由進食進水。適應性飼養3 d后用于實驗。實驗中所有操作均遵循北京市實驗動物倫理委員會的規定，并經中國醫學科學院北京協和醫學院藥物研究所實驗動物管理與動物福利委員會批準，倫理審批號：00004504。

1.1.2藥品與試劑：銀馬解毒顆粒(揚子江藥業集團四川海蓉藥業有限公司，批號：20110605)、鹽酸洛哌丁胺膠囊(西安楊森制藥有限公司，批號：JGJ0M4J)、活性炭粉(福晨化學試劑有限公司，批號：20201207)、阿拉伯樹膠(北京索萊寶科技有限公司，批號：315 M021)、0.9%氯化鈉注射液(山東華魯制藥有限公司，批號：SD20110306)。

1.2 方法

1.2.1分組及給藥：將小鼠隨機分為正常對照組、模型組和銀馬解毒顆粒低、中、高劑量組，每組16只。銀馬解毒顆粒溶于0.9%氯化鈉溶液中，低、中、高劑量組分別灌胃給予銀馬解毒顆粒500、1 000、2 000 mg/(kg·d)。正常對照組和模型組灌胃給予相同量的0.9%氯化鈉溶液。給藥7 d后，各組小鼠禁食不禁水24 h，于末次給藥后30 min模型組和銀馬解毒顆粒3個劑量給藥組灌胃給予洛哌丁胺8 mg/kg(溶于0.9%氯化鈉溶液)，正常對照組灌胃0.9%氯化鈉溶液，30 min后各組灌胃用阿拉伯樹膠配制的墨汁，劑量為20 mL/kg。

1.2.2小鼠大腸推進實驗：小鼠于灌胃墨汁2 h后頸椎脫臼法安樂死，打開腹腔，分離腸系膜，剪取上端自幽門、下端至直腸的腸道，平鋪后將腸輕輕拉成直線狀態，測量大腸長度(盲腸至直腸長度)、腸總長度(幽門至直腸長度)和墨汁推進長度(盲腸至墨汁前沿長度)，同時記錄大腸內黑便個數。按下式計算墨汁推進率:

1.2.3小鼠排便實驗：將每只小鼠單獨置于籠內，自由飲水。小鼠灌胃墨汁后開始計時，記錄每只小鼠排出首粒黑便的時間及1 h內排出糞便的數量。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 銀馬解毒顆粒提高小鼠大腸推進功能

本實驗首先觀察小鼠內容物的大腸推進率和腸總推進率來反映小鼠腸推進和蠕動功能。由圖1可知，與正常對照組相比，模型組小鼠大腸推進率和腸總推進率明顯降低，大腸內黑便個數明顯減少，具有統計學意義(P<0.01)，表明洛哌丁胺誘導的便秘小鼠模型建立成功。與模型組相比，銀馬解毒顆粒高劑量(2 000 mg/kg)可明顯提高小鼠大腸推進率和腸總推進率，具有統計學意義(P<0.05或P<0.01)，而低劑量和中劑量效果不明顯(圖1A, B)。銀馬解毒顆粒高劑量有增加小鼠大腸內黑便個數的趨勢，但無統計學差異(圖1C)。以上結果表明，銀馬解毒顆粒可增強便秘小鼠大腸蠕動功能，促進腸內容物的推進。

注：A.大腸推進率; B.腸總推進率; C.大腸內黑便個數。與正常對照組比較, *P<0.01; 與模型組比較, #P<0.05, ##P<0.01

2.2 銀馬解毒顆粒縮短小鼠排便時間，增加排便總量

對小鼠排便時間和排便總量的觀察結果如圖2所示，模型組小鼠排出首粒黑便時間與對照組小鼠相比明顯延長，且1 h內排便總數明顯減少，具有統計學意義(P<0.01)，表明洛哌丁胺誘導的便秘小鼠模型建立成功。與模型組相比，銀馬解毒顆粒高劑量可明顯縮短小鼠排出首粒黑便時間，具有統計學差異(P<0.01)(圖2A)。另外，銀馬解毒顆粒可增加小鼠1 h內排便總數，高劑量組具有統計學差異(P<0.05)(圖2B)。以上結果提示銀馬解毒顆粒對洛哌丁胺誘導的便秘模型小鼠具有較好的緩解作用。

注：A.黑便時間；B.排便個數。與正常對照組比較，*P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01

3 討論

便秘是臨床上最常見的消化道疾病之一[12]。對于便秘患者，通常建議使用瀉藥、促分泌劑等緩解便秘癥狀，促進通便，但長期服用此類化合物通常伴有不良反應[13]。因此，尋找并開發合適的藥物，對便秘患者將大有裨益。

洛哌丁胺是一種長效止瀉藥，主要作用于腸壁的阿片受體，阻止乙酰膽堿和前列腺素的釋放，從而抑制腸蠕動，延長腸內容物的滯留時間[14]。本實驗通過洛哌丁胺成功建立便秘小鼠模型，該模型簡單、安全、穩定。銀馬解毒顆粒是由五味中藥提取物制成的純中藥顆粒劑，具有清熱泄腑，止咳祛痰的功效。用于咳嗽屬熱邪犯肺證，癥見咳嗽，時有發熱、咳痰、痰黃黏稠，口干咽痛、頭疼、大便干燥等。其中所含的大黃成分具有促進小腸運動的作用，因此本研究通過觀察大腸推進率、腸總推進率、大腸內黑便個數、排出首粒黑便時間和1 h內排便個數來評價銀馬解毒顆粒是否對洛哌丁胺誘發的小鼠便秘有改善作用。研究發現銀馬解毒顆粒可明顯改善便秘小鼠腸蠕動和對內容物的推進功能，降低排便時間，增加排便數量，其中以2 000 mg/kg效果最好。并且在實驗過程中未發現與藥物相關的毒性作用。本研究表明銀馬解毒顆粒是安全有效的改善小鼠便秘的藥物，同時為其進一步開發成為治療便秘的藥物提供理論依據和數據支撐。然而目前對于銀馬解毒顆粒緩解便秘的主要成分和機制尚不清楚，有待于深入研究和探討。