新規程施行后的冷沉淀凝血因子質檢結果分析

安蓬蓬，李浩瀧，紀蓉蓉，劉軍

（天津市血液中心，天津 300110）

冷沉淀凝血因子是采用特定的方法將保存期內的新鮮冰凍血漿在1～6℃融化后，分離出大部分的血漿，并將剩余的冷不溶解物質在1 h內速凍呈固態的成分血[1]。冷沉淀凝血因子含有豐富的凝血因子Ⅷ、血管性血友病因子（vWF）以及纖維蛋白原（FIB），臨床上廣泛應用于甲型血友病、血管性血友病以及纖維蛋白原缺乏等疾病的治療[2]。《血站技術操作規程（2019版）》對冷沉淀凝血因子的制備方法（離心法）做了新的規定，為保障冷沉淀凝血因子的質量，筆者隨即對我單位自2019年9月1日起制備的冷沉淀凝血因子進行抽檢和結果分析，報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 2019年9月1日起，我單位成分科按《血站技術操作規程》（2019版）制備的冷沉淀凝血因子中，隨機抽檢480袋，均由采血時間≤13 min的400 mL全血于6 h內分離出的新鮮冰凍血漿制備，外觀正常，均進行容量檢測，其中48袋另外檢測纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量和無菌試驗；匯總2018年9月至2019年8月之間，我單位質管科的48袋冷沉淀凝血因子的質檢記錄，統計纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量。

1.2 儀器 電子天平（北京賽多利斯科學儀器有限公司）；CS-2000i全自動凝血分析儀（上海希森美康醫用電子有限公司）；BacT/ALERT 3D全自動細菌分枝桿菌培養檢測系統（生物梅里埃美國股份有限公司）。

1.3 試劑 活化部分凝血活酶時間試劑盒（批號:557295A）；纖維蛋白原測定試劑（批號:547578）；正常范圍定值質控血漿（批號:507765A）；因子Ⅷ活性測定試劑盒 （批號:547689A）；緩沖液 （批號:554667）；氯化鈣溶液（批號:563802）；清洗液（批號:A9082），以上試劑均為Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH生產。

1.4 冷沉淀凝血因子制備方法（離心法） 取出待制備冷沉淀的新鮮冰凍血漿，在1～6℃水浴裝置中融化；當血漿基本融化時，在2～6℃的環境下重離心；將大部分上層血漿移至空袋，制成去冷沉淀的冰凍血漿；將留下的40～50 mL血漿與沉淀物混合，制成冷沉淀凝血因子；冷沉淀凝血因子在制備后1 h內完成速凍[3]。

1.5 冷沉淀凝血因子質檢方法 用電子天平稱量冷沉淀凝血因子重量并計算血容量；Ⅷ因子含量和纖維蛋白原含量用全自動凝血分析儀檢測；無菌試驗由全自動細菌分枝桿菌培養檢測系統檢測。

1.6 統計學 處理方法應用SPSS 24.0統計軟件進行統計分析。計算樣本中容量、纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量的總體水平95%置信區間（95%CI），分別與GB18469-2012《全血及成分血質量要求》中標準值進行比較；按新、舊規程制備的兩組冷沉淀凝血因子的數據間比較采用t檢驗。

2 結果

2.1 見表1—2。

表1 按新規程制備的冷沉淀凝血因子質檢結果

表2 兩組冷沉淀凝血因子的纖維蛋白原含量和Ⅷ因子含量比較

2.2 新規程組480袋冷沉淀凝血因子中，容量檢測合格率為98%，低于40 mL的有7袋，高于50 mL的有5袋；48袋冷沉淀凝血因子中，纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量，檢測合格率94%；不合格3袋，不合格原因一袋為纖維蛋白原含量偏低（127.70 mg），兩袋為Ⅷ因子含量偏低（67.60 IU、72.10 IU）。舊規程組48袋冷沉淀凝血因子中，纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量，檢測合格率94%；不合格3袋，不合格原因一袋為纖維蛋白原含量偏低（114.60 mg），兩袋為Ⅷ因子含量偏低（57.80 IU、56.30 IU）。

3 討論

《血站技術操作規程》（2019版）將離心法制備冷沉淀凝血因子時，冷沉淀凝血因子中的血漿容量由原來的20～30 mL[4]變為40～50 mL[3]，與虹吸法制備冷沉淀凝血因子時，冷沉淀凝血因子中的血漿容量進行了統一[3]。我單位使用離心法和全自動血液成分分離機制備冷沉淀凝血因子，自2019年9月1日起，成分科及時對全自動血液成分分離機的設置參數進行了修改，以確保冷沉淀凝血因子的血漿容量與新規程要求一致。

GB18469-2012對冷沉淀凝血因子的質控項目和要求見表1。其中容量要求為標示量（mL）±10%，沒有給出確切范圍，因此我單位冷沉淀凝血因子的容量一直以《血站技術操作規程》中的相關規定為標準。新規程規定冷沉淀凝血因子的血漿容量為40～50 mL，未算上其中沉淀物的體積，我單位制備的冷沉淀凝血因子容量總體水平95%CI為39.36～50.10 mL，基本符合要求；盡管如此，由于GB18469-2012中對冷沉淀凝血因子的纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量的要求均與容量有關，而且，冷沉淀凝血因子在臨床上特別適用于難以給予大量的FFP(防止發生循環超負荷)來提供足量的凝血因子的患者，更多的是配合性輸注[5]，因此，建議成分科從分離機參數設置及工作人員的標準操作方面進一步要求細化，確保冷沉淀凝血因子的容量在合格范圍。

《血站技術操作規程（2019版）》在6.2.5.1中指出，血液抽檢結果分析時，對由于獻血者個體差異引起的，且不影響血液安全性的指標，如果檢查符合率≥75%，可認為血液采集、制備和儲存等過程受控。個體因素對冷沉淀凝血因子質量的影響需引起重視，在隨機抽檢的新規程組48袋冷沉淀凝血因子中，有一袋纖維蛋白原含量偏低。纖維蛋白原性質較穩定，只要樣本不與玻璃表面接觸，纖維蛋白原被激活變為纖維蛋白的可能性很小，同時，纖維蛋白原含量與獻血者性別、年齡等個體因素有關，有研究表明[6]，在所調查的獻血人群中，纖維蛋白原含量在女性中高于男性，＞30歲組明顯高于＜30歲組。Ⅷ因子是不穩定凝血因子，在獻血員個體因素方面，除與纖維蛋白原有上述相同分布規律外，相較于其他三種血型，B型冷沉淀凝血因子中Ⅷ因子含量最高[6]；除外個體因素，由于Ⅷ因子在體外半衰期較短，活性易喪失，制備冷沉淀凝血因子過程中任何一個環節的誤差均會影響Ⅷ因子含量：400 mL全血采集時間控制在13 min內，采集后儲存于冷藏環境中；我單位在6 h內完成血漿分離并速凍；制備冷沉淀凝血因子時，新鮮冰凍血漿在1～6℃水浴裝置中融化，在2～6℃環境下重離心，冷沉淀凝血因子在制備后1 h內完成速凍，在60 min內將中心溫度降至-30℃以下。由此可見，整個制備過程中的時間和溫度是影響冷沉淀凝血因子質量的關鍵因素，建議優化工作流程，盡量縮短制備時間，同時進一步嚴格控制儲存、運輸及分離的溫度，以及速凍、融化的溫度，以確保冷沉淀凝血因子質量符合臨床需要。最后，本研究中使用的CS-2000i全自動凝血分析儀準確性、精密性良好，對冷沉淀制品中纖維蛋白原含量與Ⅷ因子含量的檢測結果可靠[7]；在質量抽檢時，也應嚴控冷沉淀凝血因子的融化、取樣時間；檢測纖維蛋白原含量與Ⅷ因子含量的試劑在使用前應在室溫平衡30 min，緩沖液、氯化鈣溶液和清洗液開瓶后使用時間不得超過8周，使用新批號的試劑時需重新定標等。進一步規范試驗操作，避免因此造成的檢測誤差。

在兩組冷沉淀凝血因子的纖維蛋白原含量與Ⅷ因子含量比較中，與舊規程組相比，新規程組的纖維蛋白原含量和Ⅷ因子含量的標準差均較高，這與新規程提高了冷沉淀凝血因子的血漿容量有關；與舊規程組相比，新規程組的Ⅷ因子含量較高，一方面由于Ⅷ因子不穩定且與獻血員個體因素密切相關，另一方面，也與新規程施行后，我單位的冷沉淀凝血因子制備流程更優化，人員操作更規范有關。

為了保證冷沉淀凝血因子的質量，工作人員在制備過程中應嚴格遵守操作規程，不斷提高技術水平；同時，質控人員在檢測時應更加細致操作，以避免誤差。通過對480袋冷沉淀凝血因子進行質量抽檢，我中心按《血站技術操作規程（2019版）》制備的冷沉淀凝血因子符合GB18469-2012《全血及成分血質量要求》的相關規定，冷沉淀凝血因子質量安全有效。