不同雞新城疫疫苗對種鴿免疫效果的影響

林明星，余見棟

(平陽縣畜牧獸醫管理中心，浙江 平陽 325400)

鴿新城疫又稱鴿瘟或鴿I型副黏病毒(PPMV-I)病，是一種由禽I型副黏病毒引起的、流行于鴿群的高度接觸性急性傳染病，且普遍存在于各種鴿群(肉鴿、信鴿和賽鴿)中[1]。該病主要以腸炎、嚴重腹瀉和神經癥狀為特征，傳播迅速，發病率和死亡率高，常給鴿場造成嚴重的經濟損失[2]。由于鴿屬珍稀家禽，市場對鴿專用的鴿副黏病毒疫苗需求量較少，鴿I型副黏病毒與雞新城疫病毒同為副黏病毒，有相似的免疫原性。據楊秀環等[3]報道，用雞的新城疫弱毒疫苗和滅活疫苗對鴿進行免疫，可有效地預防和控制鴿新城疫的感染和傳播。生產上常借用雞新城疫疫苗進行免疫預防。大量研究和實踐證明，疫苗的免疫接種可有效地預防和控制疾病的發生與流行，但有關鴿體對這些疫苗的免疫相關研究報道較少。為探討不同類型雞新城疫疫苗對種鴿的免疫效果和抗體消漲情況，我們開展了不同類型雞新城疫疫苗對種鴿免疫效果的試驗，免疫后定期檢測其血清抗體的效價，了解血清抗體消長規律及其相互關系，以期為鴿場選擇和使用新城疫疫苗時提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物

試驗鴿為570 d齡、臨床健康、公母配對的美國白羽王鴿高代雜交種，共320對(640羽)。

1.1.2 疫苗

雞新城疫I系活疫苗、雞新城疫L系活疫苗購自哈藥集團生物疫苗有限公司；雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯油乳滅活疫苗購自青島易邦生物工程有限公司。

1.1.3 試劑

血凝抑制試驗用雞新城疫病毒抗原及標準陽性血清購自青島易邦生物工程有限公司，經HA試驗檢測效價后，配成4個血凝單位抗原備用；紅細胞懸液按常規方法制備，用PBS配成1%雞紅細胞懸液，4 ℃保存備用；阿氏液、磷酸鹽緩沖液(PBS)，按相關方法自行配制，4 ℃冰箱保存備用。

1.1.4 儀器設備

96孔V型微量板、微量移液器(配滴頭，規格為10、100、200 μL等)、微型振蕩器、溫箱等。

1.2 方法

1.2.1 分組及免疫

種鴿采血檢測其新城疫原有抗體水平后，將整個實驗鴿群分成5組，每組128只，每對1籠，共16個重復，每個重復4對，常規飼養。A組采用雞新城疫I系活疫苗1倍劑量肌注免疫1次；B組采用雞新城疫L系活疫苗4倍劑量肌注免疫1次；C組采用雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯油乳滅活疫苗0.4 mL肌注免疫1次；D組采用雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯油乳滅活疫苗0.4 mL肌注免疫，隔21 d加強免疫1次；E組生理鹽水1 mL肌注免疫一次，作為對照。

1.2.2 樣品收集

兩組試驗鴿于免疫后第1周、第2周、第3周、第4周、第5周、第7周、第11周、第15周、第19周、第23周、第31周分別進行翅下靜脈采血，每組抽樣不少于12羽，每羽采血1～2 mL，血液樣品于室溫放置30 min后，再置4 ℃冰箱中30 min，室溫下4 000 r·min-1離心5 min，收集上清液于一新EP管中。

1.2.3 檢測方法

新城疫免疫抗體檢測按照《新城疫診斷技術》(GB/T 16550—2008)規范進行，采用血凝(HA)試驗檢測標準抗原的血凝價，制備4單位抗原并驗證，采用血凝抑制(HI)試驗檢測血清樣品的新城疫抗體效價，每次檢測的抗體效價以log2值表示。

1.2.4 數據分析

新城疫抗體效價≥5 log2判定為免疫合格，利用Excel進行數據平均值、標準差和合格率等統計分析。

2 結果與分析

免疫前各組的HI抗體滴度平均值為1.67 log2，使用不同的雞新城疫疫苗對種鴿進行免疫后各組種鴿產生的新城疫抗體滴度從3 log2到9 log2不等，對照組抗體滴度在0.44 log2～1.25 log2。免疫后第1周上升最快的是A組，其HI抗體滴度平均值為6.17 log2；抗體滴度峰值最高的是D組，其HI抗體滴度平均值為9.63 log2(圖1)。

圖1 各組新城疫抗體消漲情況

A組經雞新城疫I系活疫苗單次免疫后，相應的HI抗體滴度在第1、2、3、4、5、7、11、15、19、23和31周平均值分別為6.17 log2、6.81 log2、7.44 log2、5.94 log2、6.31 log2、5.94 log2、5.69 log2、4.88 log2、4.56 log2、5.06 log2、4.56 log2，其中抗體合格率在第1周至第15周達到75%以上，結果顯示，A組試驗種鴿在免疫1周后，新城疫抗體水平顯著上升，至第15周抗體滴度平均值降至免疫合格線(5 log2)以下，同時抗體合格率在第19周開始小于70%，免疫抗體保護期約80 d。

B組經雞新城疫L系活疫苗單次免疫后，相應的HI抗體滴度在第1、2、3、4、5、7、11、15、19、23和31周平均值分別為3.17 log2、5.19 log2、5.50 log2、5.56 log2、5.88 log2、4.75 log2、5.50 log2、4.38 log2、4.31 log2、4.75 log2、3.25 log2，其中抗體合格率僅在第5周達到75%，結果顯示，B組試驗種鴿在免疫1周后，新城疫抗體水平有所上升，但上升幅度小且免疫合格率低，免疫抗體保護期約28 d。

C組經雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯油乳滅活疫苗單次免疫后，相應的HI抗體滴度在第1、2、3、4、5、7、11、15、19、23和31周平均值分別為5.33 log2、9.29 log2、9.13 log2、9.00 log2、8.65 log2、8.19 log2、7.94 log2、7.19 log2、6.38 log2、6.31 log2、6.14 log2，其中抗體合格率在第1周達到75%，其后抗體合格率保持在86%以上，結果顯示，C組試驗種鴿在免疫1周后，新城疫抗體水平顯著上升，至第31周抗體滴度平均值仍在免疫合格線(5 log2)以上，免疫抗體保護期長達220 d，且均勻度佳。

D組經雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯油乳滅活疫苗二次免疫后，相應的HI抗體滴度在第1、2、3、4、5、7、11、15、19、23和31周平均值分別為5.17 log2、9.00 log2、8.56 log2、9.00 log2、9.63 log2、9.19 log2、8.75 log2、7.92 log2、8.00 log2、7.43 log2、7.17 log2，其中抗體合格率在第1周達到67%，其后抗體合格率保持在92%以上，抗體在免疫后第2周首次達峰值9.00 log2，21 d加強免疫后有所下降，在第5周激發機體產生更高抗體水平再次達峰值9.63 log2，結果顯示D組試驗種鴿在免疫一周后，新城疫抗體水平顯著上升，至第31周抗體滴度平均值仍在7 log2以上，免疫抗體保護期長達220 d，且均勻度佳。

3 小結與討論

本研究使用不同的雞新城疫疫苗對種鴿群進行免疫試驗，免疫后7 d各免疫組均產生抗體，A、B組使用活疫苗免疫，抗體在免疫后第3～5周達峰值分別為7.44 log2、5.88 log2，C、D組使用滅活疫苗免疫，抗體在免疫后第2～5周達峰值分別為9.29 log2、9.63 log2，對照組抗體水平在原有水平上略下降。通過分析免疫抗體水平可知，在試驗中鴿體對不同的雞新城疫疫苗具有免疫反應，表明雞新城疫疫苗能誘導出鴿體的新城疫免疫抗體，這與研究相符[4]。滅活疫苗免疫的C、D組產生抗體的峰值明顯高于使用活疫苗免疫的A、B組，且維持的時間更久，表現出良好的抗原性和免疫效果。

A組經雞新城疫I系活疫苗免疫后7 d免疫抗體水平達到6.17 log2，與B組的3.17 log2、C組的5.53 log2、D組的5.17 log2相比上升最快，同時抗體水平下降也快，這與高琳等[5]研究中不同雞新城疫疫苗免疫效果對比試驗中接種I系疫苗的雞抗體水平上升最快，但達到峰值后下降也最快的結果一致，表明雞新城疫活疫苗I系比較適用于緊急免疫。

江斌等[6]研究表明，鴿群單獨使用雞新城疫L系活疫苗免疫兩次的效果較首次免疫使用雞新城疫L系活疫苗第二次免疫使用雞新支流三聯滅活疫苗的效果差，其HI抗體滴度峰值僅為5.1 log2；呂艷秋等[7]研究中，鴿群使用雞新城疫L系活疫苗滴鼻點眼免疫兩次后，其新城疫抗體水平有所升高，但不足于達到對鴿群的有效保護。同時柳曉峰等[8-9]研究發現，使用新城疫L系活疫苗免疫雞將加重或誘發I群血清4型禽腺病毒、禽網狀內皮組織增生病毒的致病作用，而在鴿群中使用雞新城疫L系活疫苗是否加重或誘發此類垂直傳播性病毒的致病作用還有待研究。試驗中B組使用雞新城疫L系活疫苗免疫后在各組中免疫抗體上升最慢且峰值最低，僅達到5.88 log2，抗體合格率僅在第5周達到70%以上。據以上研究，不建議在鴿群中單獨使用雞新城疫L系活疫苗進行免疫。

C、D組使用二聯油乳滅活疫苗免疫，C組新城疫抗體在免疫后第2周首次達峰值9.29 log2；D組新城疫抗體在免疫后第2周首次達峰值9.00 log2，21 d加強免疫后抗體滴度有所下降，在第5周激發機體產生更高抗體水平再次達峰值9.63 log2，這與鄒永新等[10]研究的結果一致。滅活疫苗在第二次免疫和第三次免疫后7 d抗體滴度發生不同程度的下降，這可能與進入機體內的疫苗抗原與機體血清中原有抗體發生部分中和反應有關，14 d后抗體滴度迅速回升，是由于機體免疫記憶細胞的作用使抗體水平能在短時間內迅速上升，并達到更高水平且維持更長時間。試驗中接種二聯油乳滅活疫苗的種鴿抗體水平能達到更高水平且在達到峰值后能夠在較高的抗體水平維持更長時間，表明二聯油乳滅活疫苗較適于日常的預防接種。

有研究顯示，使用雞新城疫活疫苗免疫鴿易因種間差異、個體、日齡和疫苗毒力等造成免疫不穩定[11]。針對種鴿存欄期長、雛鴿自然孵化需哺喂、同舍乳鴿日齡差異大、乳鴿母源抗體參差不齊等現狀，同時乳鴿免疫接種活疫苗其免疫效果易受母源抗體影響，而應用滅活疫苗受影響較小。同時鴿場一旦使用弱毒疫苗，易發生病毒擴散，導致鴿場疾病遷延不斷。根據本試驗對鴿場使用滅活疫苗的免疫效果監測分析表明，滅活疫苗免疫后，抗體效價高、合格率高、整齊度好、免疫保護期長，試驗中運用的雞新城疫、禽流感二聯油乳滅活疫苗為成熟的滅活疫苗[12]，對鴿安全穩定，具有無病毒擴散、不污染環境等優點，有利于鴿場新城疫疫病的凈化，適于養鴿場推廣應用。結合雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯油乳滅活疫苗免疫后備鴿抗體水平研究，建議鴿場在實際生產中，后備鴿及首次產蛋成鴿(60～180 d齡)采用“二次免疫法”；1 a及以上成鴿可以采用“單次免疫法”，每年免疫1次。