食品中黃曲霉毒素檢測方法研究進展

胡冰， 時浩楠， 胡本倫， 趙思明， 劉茹， 賈才華

（華中農業(yè)大學食品科學技術學院，環(huán)境食品學教育部重點實驗室，武漢 430070）

民以食為天，食品安全問題是關系國計民生的大事，其中，真菌毒素對食品的污染已成為各國高度關注的食品安全問題［1］。食品在受到真菌毒素污染后，不僅食用價值、營養(yǎng)價值和商品價值降低，還會對消費者的身體健康造成極大的傷害。此外，某些真菌毒素還具有致癌［2］、致畸［3］和致突變［4］作用。據(jù)FAO發(fā)布的統(tǒng)計數(shù)據(jù)，全球每年被真菌毒素污染的糧食約占糧食總產量的1/4，不僅造成大量浪費，還給世界農業(yè)和經濟貿易的發(fā)展帶來嚴重影響［5-7］。我國是受真菌毒素影響較為嚴重的國家之一［8］，每年因真菌毒素污染糧食造成的直接經濟損失達680億～850億元［9］，而黃曲霉毒素（aflatoxin，AFT）是對人體危害較大且較常見的真菌毒素之一。鑒于此，本文概述了當前國內外關注度較高的黃曲霉毒素的檢測方法，介紹了近幾年檢測技術的最新進展，分析了這些方法的優(yōu)缺點，旨在為各類食品中黃曲霉毒素檢測方法的選擇提供參考，為解決我國有關真菌毒素污染的食品安全問題提供一定的技術支撐。

1 黃曲霉毒素概況

黃曲霉毒素是黃曲霉和寄生曲霉中產毒菌株的代謝產物［10］，是一類結構相似的化合物，可分為B系和G系兩個大類，其基本結構都有二呋喃環(huán)和香豆素，是二呋喃香豆素的衍生物。現(xiàn)已分離出 B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q1等十幾種，其中B系為甲氧基、二呋喃環(huán)、香豆素、環(huán)戊烯酮的結合物；G系結構與B系類似，但其中的環(huán)戊烯酮被替換為環(huán)內酯。在自然環(huán)境下，從被AFT污染的食品中只檢測出了黃曲霉毒素B1（AFB1）、黃曲霉毒素B2（AFB2）、黃曲霉毒素G1（AFG1）、黃曲霉毒素G2（AFG2）、黃曲霉毒素M1（AFM1）和黃曲霉毒素M2（AFM2）6種，結構見圖1。

AFT對人和動物來說都是劇毒物，但不同種類的AFT之間毒性差異很大。AFB1的毒性最強［11-12］，是氰化鉀的10倍、砒霜的68倍，僅次于肉毒梭菌的代謝產物肉毒毒素，是當今發(fā)現(xiàn)的毒性最強的真菌毒素［13］。AFB1不僅具有極強的急性毒性，還具有慢性毒性［14］，若在短期內大量攝入被AFB1污染的食品，會造成嚴重的肝損傷和膽管增生，危及生命；若在一段時間內持續(xù)攝入一定量的AFB1，則表現(xiàn)為生長障礙和慢性肝損傷［15］。此外，AFB1還是目前已知致癌性最強的毒物，1993年WHO就將其列為一類致癌物［16］，主要誘發(fā)肝癌［17］。AFM1是動物攝入被 AFB1污染的飼料后在肝臟微粒體單氧化酶催化作用下產生的代謝產物［18］，毒性僅次于 AFB1［19］。

AFT造成的食品污染在世界范圍內相當廣泛，其中AFB1主要污染對象為堅果類（花生、核桃、開心果、松子等）、谷物類（玉米、小麥、大米、高粱等）食品，尤其以花生、玉米受污染的程度最重［20］，植物油、香辛料以及一些中藥材也存在易受AFB1污染的問題。AFM1則通常分布于動物組織（肝臟、腎臟、肌肉）、動物體液（乳汁、尿液）和卵中［21］，乳及乳制品受 AFM1的污染最為嚴重［22］。因此，許多國家都針對AFT制定了嚴苛的限量標準，F(xiàn)AO發(fā)布的世界食品和飼料真菌毒素法規(guī)顯示，全球已有100多個國家和地區(qū)制定了各類食品中AFT的限量標準［23］。為便于比較國內外關于AFT限量標準的差異，表1梳理了我國食品安全國家標準GB 2761—2017［24］，以及美國、食品法典委員會（Codex Alimentarius Commission，CAC）、日本和歐盟等國家、組織或地區(qū)對于AFT的限量標準［25-29］。

理化性質上，AFT具有極強的耐熱性，普通的烹調方式難以將其完全破壞，280～300℃的高溫才能將其裂解。AFT在水中的溶解度很低，但能溶于油脂和多種有機溶劑，經紫外線照射可產生熒光［30］。此外，AFT不耐堿，加堿處理也能使一些毒素喪失活性，若遇5%的次氯酸鈉，則可瞬間被破壞。

2 食品中黃曲霉毒素的檢測方法

目前，國內外應用較為廣泛的食品AFT檢測方法主要有儀器分析法（高效液相色譜法［31-32］、液相色譜?質譜法［33］）、免疫分析法（酶聯(lián)免疫吸附法［34］、時間分辨熒光免疫分析法［35］、膠體金免疫層析法［36］）、表面增強拉曼光譜法［37］和電化學傳感器法［38］等。

2.1 儀器分析法

2.1.1 高效液相色譜法 高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）于 20世紀70年代獲得迅猛發(fā)展，成為一種常規(guī)高效分離分析技術，是目前各種色譜模式中應用最為廣泛的技術。HPLC分析的基本原理是以液體充當流動相，利用高壓輸液系統(tǒng)將流動相泵入裝有固定相的色譜柱中，流動相中各種不同組分經色譜柱分離后進入檢測器檢測。AFT的檢測普遍采用HPLC法，該方法不僅具有較高的檢測分離效能，還可同時檢測多種真菌毒素。

表1 國內外食品中黃曲霉毒素限量比較Table 1 Comparison of aflatoxin limits in food at home and abroad

由于食品中AFT的殘留通常極其微量，故而HPLC法常與快速穩(wěn)定的前處理方法結合使用，行之有效的前處理方法對于分析結果的準確與否起著決定性作用。在國家標準中，食品樣品中AFT的提取、凈化和富集方法有機溶劑用量大且操作過程較為繁瑣，因而有必要開發(fā)出一種快速、高效的方法用于AFT的前處理。目前較為常用的是免疫親和柱（immunoaffinity chromatography，IAC）凈化法［39］，該方法具有有機溶劑消耗少、基質干擾少、特異性強、靈敏度高和適用于各種復雜食品基質等特點［40］。周欣等［41］采用免疫親和凈化?高效液相色譜法測定了麥麩中4種AFT（AFB1、AFB2、AFG1、AFG2）的含量，樣 品 提 取 后經IAC凈化進行HPLC檢測，最低檢出限（limit of detection，LOD）分 別 為 5.6×10?4、2.3×10?4、1.08×10?3和 4.3×10?4μg·kg?1。然而 IAC 也存在一定的缺點，如柱子儲存時間有限、不能回收利用且價格昂貴等。近年來，新型吸附材料制備技術的發(fā)展為食品中AFT殘留的提取和凈化提供了全新選擇［42］。Saini等［43］基于固相萃取原理，以C18為吸附劑對飲用水中的痕量AFB1進行濃縮和富集，然后進行HPLC分析，樣品LOD為0.012 ng·mL?1，定量限（limit of quantitation，LOQ）為 0.039 ng·mL?1，回收率為98.01%～98.65%，可用于飲用水中AFB1的痕量水平檢測和定量。Mohammad等［44］制備了適配體功能化磁性納米粒子（aptamer functionalized magnetic nanoparticles，AMNPs）充當吸附劑，用來提取和濃縮牛奶樣品中的痕量AFM1，然后用HPLC進行定量分析，該方法的LOD為0.2 ng·L?1，是迄今為止所報道的最小值。

HPLC法雖具有較高的靈敏度和準確度，但樣品需要經過復雜的前處理且經濟成本較高；無法較好地掌握色譜分析條件，分析方法的建立較為耗時，不能滿足大批量樣品快速檢測的需求；定性、定量分析均需要標準品作為參比；選擇性較差，在使用反相色譜進行檢測時常常會受到一些保留行為類似物質的干擾從而造成檢測誤差，梯度淋洗技術雖然可以較好地克服這個問題，但會延長樣品的分析時間［45］。

2.1.2 液相色譜?質譜法 液質聯(lián)用技術（liquid chromatogram tandem mass spectrometry，LC-MS）將液相色譜與質譜2種檢測儀器有效結合，實現(xiàn)優(yōu)勢互補，液相色譜有對復雜樣品的高效分離能力，而質譜具有的高選擇性、高靈敏度以及能夠提供物質相對分子質量與結構信息，LC-MS將二者的優(yōu)點結合起來，顯著提高了待測物定量分析的可靠性與準確度，具有較好的分離性能與高通量的檢測水平［46］。鑒于氣質聯(lián)用技術在分析之前需要對樣品進行衍生化處理（改變分析物的結構，使其沸點降低而易于離子化），較為復雜［47］，在此不作介紹。

由于該方法兼具色譜對復雜樣品的高效分離能力與質譜檢測的通用性，故普遍適用于真菌毒素的檢測且具有較高的靈敏度，近年來被廣泛應用于真菌毒素的篩檢中［10］，亦可實現(xiàn)對多種真菌毒素的定性和定量分析。LC-MS在分析前，通常需要將樣品中的待檢組分提取出來，較為常用的方法是溶劑一步提取法。Deng等［48］采用LC-MS對海產品中的4種真菌毒素（AFB1、T-2毒素、赭曲霉毒素A和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇）進行了同步測定，樣品經乙腈?水（85/15，體積分數(shù)）溶液提取后，用正己烷脫脂凈化，隨后進入儀器，該方法對4種真菌毒素的LOD為0.1～2.0 μg·kg?1，LOQ 為 0.3～5.0 μg·kg?1，回收率為72.2%～98.4%。Varga等［49］用乙腈?水?甲酸（79/20/1，體積分數(shù)）處理小麥樣品中的12種真菌毒素，LCMS定量，LOQ為0.02～161 μg·kg?1，回收率為88%～120%。傳統(tǒng)的一步提取法雖然具有處理簡單、目標成分損失少等優(yōu)點，但仍存在一定的局限性，其在提取過程中有機溶劑用量相對較大，同時在對于一些成分復雜的食品基質進行提取時，樣品中其他成分可能會被一并提取出來，影響分析結果的準確性并造成質譜檢測器進樣口的污染［50］。QuEChERS法很好地克服了以上問題，它不僅大大降低了有機溶劑的使用，節(jié)約了時間和成本，而且具有較強的抗干擾能力和更高的回收率［51］。Miro-Abella等［52］用植物性飲料樣品測試了其提取回收率，結果在80%～91%，樣品提取后經LC-MS分析，植物性飲料中AFB1和AFG1的LOQ分別為15和0.05 μg·L?1。 Ouakhssase 等［53］采 用 改 進 的QuEChERS方法對玉米樣品中4種AFT（AFB1、AFB2、AFG1和AFG2）進行提取，該方法溶劑用量少且無需純化步驟，提取完成后進行LC-MS分析，LOD為0.11～0.36 μg·kg?1，LOQ為0.36～1.19 μg·kg?1，均低于歐盟規(guī)定的最高允許水平，除AFB2外回收率均在70%～110%。

LC-MS法無需對樣品進行衍生處理，具有分離能力強、靈敏度高、特異性好的特點，能較好滿足食品中AFT檢測的要求，但要求測試人員必需掌握一定的專業(yè)知識，否則難以操作；高昂的儀器成本；分析測試通常只能在實驗室中進行，不能滿足現(xiàn)場檢測的要求等制約了其進一步推廣。因此，開發(fā)易操作、低成本、可用于現(xiàn)場檢測真菌毒素的LC-MS技術已成為未來研究的熱點。表2列舉了不同方法的特點和應用效果，以便更加直觀地對比每組方法。

2.2 免疫分析法

2.2.1 酶聯(lián)免疫吸附法 酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是將待測物的抗原（或抗體）吸附于固相載體表面，加入酶標記的抗體（或抗原），使其在固相載體表面發(fā)生抗原抗體結合反應，再添加酶反應的底物，顯色后即可根據(jù)顏色的深淺、有無進行定性或定量分析。為了進一步提高ELISA的靈敏度以滿足痕量檢測的需要，Zhan等［54］開發(fā)了一種動態(tài)光散射?直接競爭酶聯(lián)免疫吸附法（dynamic light scattering-direct competitive ELISA，DLS-dcELISA），用于超靈敏檢測玉米中的AFB1。該方法采用基于散射的DLS信號來代替?zhèn)鹘y(tǒng)的基于吸收的比色信號作為免疫分析信號輸出，利用葡萄糖氧化酶（glucos oxidase，GOx）氧化葡萄糖生成過氧化氫（H2O2）的特點，將GOx作為AFB1的載體制備了GOx-AFB1競爭抗原，生成的H2O2可在辣根過氧化物酶（horseradish reroxidase，HRP）和酪胺（TYR）存在的條件下觸發(fā)膠體金納米粒子（gold nanoparticle，AuNP）聚集，從而顯著放大AuNP的散射信號，再將散射信號整合到dcELISA中進行 AFB1的檢測（圖 2）。LOD 為 0.12 pg·mL?1，比傳統(tǒng)的比色ELISA法低約385倍，樣品平均回收率為90.6%～107.0%。由于傳統(tǒng)ELISA法在測定時常會出現(xiàn)假陽性和假陰性的現(xiàn)象，為了避免這一現(xiàn)象的發(fā)生，Xu等［55］建立了一種基于金屬?有機框架（metal-organic framework，MOF）的間接競爭酶聯(lián)免疫吸附測定法。該方法將傳統(tǒng)ELISA法中的天然酶替換為功能性MOF，以催化生色 系 統(tǒng) ，LOD 為 9×10?3ng·mL?1。 與 傳 統(tǒng) 的ELISA相比，針對AFB1開發(fā)的MOFLISA法的LOD值提高了20倍，樣品回收率和相對標準偏差分別為86.41%～99.74%和2.38%～9.04%，有效降低了假陽性和假陰性結果的出現(xiàn)頻率。

圖2 DLS-dcELISA法結合H2O2介導的TYR信號放大系統(tǒng)［54］Fig.2 DLS-dcELISA method combined with H2O2-mediated tyramine signal amplification system［54］

近年來，ELISA憑借靈敏度高、特異性強、檢測速度快、檢測成本低等優(yōu)點已被廣泛應用于各學科的分析測試中，成為我國谷物、糧油和其他食品國家標準規(guī)定的真菌毒素篩選和檢測方法。但仍存在一些不足，如測定時緩沖溶液的性質（pH、離子強度等）［56］、溫度等因素會顯著影響測定結果的準確性，需要準確把控；標記物酶穩(wěn)定性差、易失活；檢測結果重復性差且無法同時檢測多種真菌毒素；自動化程度低及假陽性頻率高等。

2.2.2 時間分辨熒光免疫分析法 時間分辨熒光免疫分析法（time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA）是一種新型超微量檢測技術，其利用具有獨特熒光特性的鑭系元素及其螯合物作為示蹤物來標記抗原（抗體），再結合高靈敏度的時間分辨技術測量熒光，對波長和時間2個參數(shù)進行信號分辨，可較大程度地減少背景干擾，提高檢測結果的準確性［57］。在食品真菌毒素的檢測中，常用的反應體系有抗原抗體免疫反應、核酸探針雜交反應和靶細胞與效應細胞的殺傷反應等，測試物經反應體系作用后進行反應產物熒光強度測定，進而在標準熒光曲線上查出反應體系中測試物的濃度，實現(xiàn)精確定量［58］。Guo等［59］開發(fā)了牛乳中AFM1的間接競爭TRFIA法：首先，將AFM1與牛血清蛋白（bovine serum albumin，BSA）偶聯(lián)，形成AFM1-BSA結合物抗原，加入抗AFM1抗體進行孵育，AFM1-BSA結合物抗原與抗AFM1抗體發(fā)生特異性結合形成AFM1-BSA-抗AFM1抗體復合物；再加入銪（Eu）標記的羊抗兔抗體（goat anti rabbit IgG-Eu）進行二次孵育，孵育完成加入增強液，用全自動時間分辨熒光免疫分析系統(tǒng)進行定量分析（圖3）。此方法對AFM1的LOD為6×10?3μg·kg?1，LOQ為0.022 μg·kg?1。盧迪莎等［60］開發(fā)了一種基于TRFIA的試紙，可同時篩檢玉米樣品中的AFB1和赭曲霉毒素A：首先以Eu系時間分辨熒光微球標記AFB1和赭曲霉毒素A單克隆抗體制備熒光探針，而后與免疫層析試紙條進行組裝；組裝后的試紙條對2種真菌毒素的肉眼LOD分別為 3.70、5.55 μg·kg?1，整個測試過程約為 20 min且開發(fā)的試紙條性質穩(wěn)定可在4℃保存5個月以上，能較好滿足大批量樣品現(xiàn)場篩檢的要求，應用前景廣闊。目前該方法僅限適用于玉米樣品的篩檢，對AFT類似物也存在較高的交叉反應，還需進一步深入研究來克服這些問題。

表2 儀器分析法檢測食品中的黃曲霉毒素Table2 Determination of aflatoxin in food by instrumental analysis

圖3 間接競爭TRFIA法檢測AFM1原理［59］Fig.3 AFM1detection by indirect competitive TRFIA［59］

TRFIA是超微量分析領域中的一項新興技術，它將酶標記技術、放射性標記技術以及同位素標記技術的優(yōu)點相結合［61］，具有分析速度快、靈敏度高、穩(wěn)定性好、特異性強等優(yōu)點，發(fā)展?jié)摿薮蟆５玊RFIA所使用的同位素的半衰期及其產生的放射性會對人體造成傷害并可能導致環(huán)境污染。此外，大多數(shù)螯合劑為有毒物質，對測試人員的身體健康有潛在威脅，且螯合劑的熒光壽命較短，產生的背景信號也容易受到干擾。

2.2.3 膠體金免疫層析法 膠體金免疫層析技術（immune colloidal gold technique，GICT）是20世紀90年代興起的一種免疫分析技術，其以膠體金作為示蹤標記物，硝酸纖維膜充當固相載體，基于抗原和抗體間的特異性結合反應，利用毛細管作用使得含有待測物的液體從膜條一端向另一端緩慢滲移，其間待測物與金標試劑發(fā)生一系列特異性結合反應而被截留，聚集于檢測帶上并顯現(xiàn)出肉眼可見的紅色條帶，通過觀察可實現(xiàn)對待測物的定性或半定量分析。陳宗倫［62］基于GICT開發(fā)了一款用于檢測谷物中AFB1的檢測卡。檢測卡對谷物中AFB1的肉眼判斷靈敏度為0.2 ng·mL?1，儀器判斷靈敏度為0.05 ng·mL?1，檢測可在15 min內完成，且檢測卡在25℃常溫條件下可保存1～2年。曹德康等［63］應用GICT制得一種可同時對谷物類食品中AFB1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素進行檢測的三聯(lián)檢測卡。檢測卡對3種毒素的LOD分別為5～10、60、1 000 ng·g?1，且該檢測卡特異性良好，與待檢物的結構類似物、其他真菌毒素均無交叉反應，15 min內可完成測試，于常溫下可保存12個月。

GICT以其獨有的優(yōu)勢越來越受到檢測人員的青睞，它具有快速、靈敏、操作簡便等優(yōu)點，適用于在田間地頭、倉庫、農貿市場、商場等場所對原料或成品進行大批量篩查檢測。但GICT在制備抗體時成本較高，樣品提取時效率較低，檢測結果重復性差且易出現(xiàn)假陽性結果，這些不足制約了GICT的推廣應用，需進一步優(yōu)化。

2.3 其他檢測方法

2.3.1 表面增強拉曼光譜法 拉曼光譜是基于印度科學家拉曼在1928年所發(fā)現(xiàn)的拉曼散射效應發(fā)展起來的光譜分析技術，在分析樣品時具有對試樣非接觸性、不破壞試樣的特點［64］，同時也擁有較高的靈敏度和準確性，可在短時間內完成對試樣的分析，但傳統(tǒng)拉曼光譜的強度和靈敏度較低。表面增強拉曼光譜（surface-enhanced Raman spectroscopy，SERS）克服了傳統(tǒng)拉曼光譜的低靈敏度缺點，它利用納米結構表面現(xiàn)象來增強吸附在銀、金和銅等金屬顆粒上的弱非彈性散射拉曼效應，且保持了常規(guī)拉曼光譜實時與快速的特性，已廣泛應用于食品安全［65］、生物醫(yī)藥［66］、環(huán)境監(jiān)測［67］等諸多領域。He等［68］基于SRES開發(fā)了一種可用于檢測花生制品中AFB1的免疫傳感器。傳感器以SH-cDNA（short hairpin-cDNA）修飾的Fe3O4@Au粒子作為捕獲探針，以SH-Apt（short hairpin-適配體）修飾的Au@Ag粒子和Cy3-Apt（Cy3熒光標記的適配體）為報告探針，在AFB1存在的條件下，Apt與AFB1的特異性結合可以使報告探針從捕獲探針中釋放出來，導致SERS強度隨AFB1濃度的增加而線性下降，從而實現(xiàn)對AFB1的痕量檢測（圖4）。該方法對AFB1的LOD為0.40 pg·mL?1，回收率為96.6%～115.0%。在納米溶膠由濕態(tài)向干態(tài)轉化的過程中進行實時SERS采集的技術稱為動態(tài)SERS（dynamic SERS，DSERS），與常規(guī)SERS信號相比增加了2～3個數(shù)量級。基于此，任菲等［69］采用D-SERS對薏苡仁中的AFG1進行檢測。該方法采用擦拭法提取樣品表面的AFG1，以AuNP作為SERS的增強基底進行D-SERS分析，對AFG1的LOD為5.5 μg·kg?1，具有低成本、快速、簡便的特點，適用于大批量樣品的快速篩檢。

圖4 基于SERS免疫傳感器檢測原理［68］Fig.4 Detection principle based on SERS immunosensor［68］

近年來，SERS技術憑借其熒光背景低、圖譜信息量豐富、簡便靈敏、快速無損等優(yōu)點被廣泛應用于食品安全檢測領域。但目前SERS多作為一種輔助性檢測手段使用，仍有一些問題亟待解決：①儀器成本較高，難以商業(yè)化推廣；②制備重現(xiàn)性好、靈敏度高的基底較為困難，且性能可觀的基底材料多為貴金屬，如Au（金）、Ag（銀）等與其他材料的復合物，進一步增加了檢測成本；③自然界中真菌毒素的種類繁多且結構復雜，目前還尚未建立起針對各種真菌毒素的SERS拉曼譜圖庫導致許多毒素無法檢測。

2.3.2 電化學傳感器法 電化學傳感器是一種利用電化學分析對樣品進行定量檢測的裝置。其工作原理為：對目標物具有特異性識別的原件被修飾于電極上，通過與目標物相互作用對目標物進行識別而引起信號的改變，信號轉換器再將這種信號變化轉換成電化學信號。在一定范圍內，目標物的濃度與電化學信號之間存在一定的比例關系，可實現(xiàn)對目標物的定量分析。Yuan等［70］研制了一種靈敏度高、可選擇性地對AFB1進行檢測的電化學傳感器。其首先將AFB1適配體（aptamer，Apt）的巰基化cDNA通過硫?金鍵固定在AuNPs修飾的玻碳電極（glassy carbon electrode，GCE）表面，再通過特定的堿基配對方式讓Apt與cDNA互補配對而附著于GCE表面；在AFB1存在的情況下，通過AFB1和Apt之間的特異性識別，Apt從電極表面分離，在溶液中形成Apt-AFB1偶聯(lián)物；偶聯(lián)物在外切酶Ⅰ（ExoⅠ）的作用下以觸發(fā)AFB1循環(huán)；最后，DNA-AuNPs-HRP納米探針通過特異性堿基配對與電極表面的cDNA結合，HRP可以催化H2O2將對苯二酚（hydroquinone，HQ）氧化為苯醌（benzoquinone，BQ），產生強烈的電化學信號（圖5），信號隨AFB1濃度的增加而增大，最低LOD為3.3×10?4ng·mL?1，回收率為88.5%～110.2%，已成功應用于花生和玉米樣品中 AFB1的測定。Wang等［71］制備了一種無試劑適配體電化學傳感器，可用于快速、靈敏檢測多種食品中的AFB1。在對AFB1具有較高親和力的短鏈26-mer DNA適配體5’端引入一個硫醇基團，并在其T18位點偶聯(lián)一個亞甲基藍（methylene blue，MB）標記，通過硫?金鍵合將適配體固定在金電極上。對于T18位點有MB標記的適配體，AFB1的結合引起MB電流信號顯著增加，從而可以根據(jù)電信號的變化檢測AFB1。傳感器的檢測極限為 6 pmol·L?1，且具有較好的穩(wěn)定性，經去離子水漂洗再生后可重復使用。

圖5 基于DNA-AuNPs-HRP納米探針和ExoⅠ輔助信號放大的電化學適配體傳感器檢測原理［70］Fig.5 Detection principle of electrochemical aptamer sensor based on DNA-AuNPs-HRP nanoprobe and ExoⅠ auxiliary signal amplification［70］

近年來，電化學傳感器因其具有較高的檢測靈敏度、操作簡便、便于攜帶且較為經濟的特點而被廣泛用于食品中污染物的檢測。其中核酸適配體和電極修飾材料的開發(fā)是電化學傳感器制備的關鍵，直接影響著傳感器的檢測性能和使用壽命。因此，探索性能優(yōu)越的新型電極修飾材料，篩選、修飾親和力更強、成本更低的核酸適配體將成為未來構建性能穩(wěn)定的電化學傳感器的研究重點［72］。

3 結語

AFT對食品的污染嚴重危害著消費者的身體健康，食品中AFT檢測技術的發(fā)展日益受到人們的關注，高效檢測各類食品中AFT的殘留對我國食品行業(yè)的可持續(xù)發(fā)展和更好踐行“健康中國”戰(zhàn)略、保障我國食品安全事業(yè)行穩(wěn)致遠至關重要。

就目前來看，隨著科學技術的進步，各種檢測技術在靈敏度、準確度、穩(wěn)定性等方面都取得了實質性的進步，但對于大批量樣品的快速檢測仍然沒有方法可以同時滿足靈敏、準確、穩(wěn)定、快速、簡便、低成本的要求，已然成為本領域所面臨的一項難題。儀器分析技術雖然在檢測結果的準確性上有著絕對的優(yōu)勢，但由于其本身的局限性，分析測試只能在實驗室中由專業(yè)人員執(zhí)行，樣品在測試前需要經歷較為繁瑣的前處理過程，測試后也不能立即獲取檢測結果，且有著較高的測試成本，不適合大批量樣品的快速篩查。免疫技術的興起在一定程度上彌補了儀器分析技術的不足，它具有靈敏度高、特異性強、簡便、快速、低成本等優(yōu)點，各種免疫試劑盒、試紙條的出現(xiàn)使得大批量樣品的現(xiàn)場篩查成為可能。更重要的是，它對操作人員的知識儲備要求不高，經過一定的培訓即可快速上手。但目前免疫技術在測試結果的準確性上與儀器分析技術仍有差距，假陽性、假陰性結果不能完全避免，且抗原抗體不易制備，還有待繼續(xù)探索并不斷完善。SERS、電化學傳感器技術是當前真菌毒素檢測領域研究的熱點。SERS具有定量精確、快速無損的特點，電化學傳感器則以其低成本和便攜性備受青睞，但作為新興檢測技術還尚未發(fā)展成熟。未來，AFT的檢測將更傾向于從實驗室走向現(xiàn)場，從儀器分析走向快速分析，研發(fā)集提取、分離、富集、檢測于一體的檢測設備用于AFT的現(xiàn)場大批量、快速、精準定量將成為AFT檢測技術的發(fā)展趨勢。