基于HPLC-MS/MS法的咽炎片中麥冬摻偽檢查

馬昌豪 ，李洪芹，李懷偉

（1.山東省食品藥品審評查驗中心，山東 濟南 250014 ；2.菏澤學院，山東 菏澤 274000；3.菏澤市食品藥品檢驗檢測研究院，山東 菏澤 274000）

咽炎片由玄參、百部（制）、天冬、牡丹皮、麥冬、款冬花（制）、木蝴蝶、地黃、板藍根、青果、蟬蛻、薄荷油等十二味藥材組成，具有養陰潤肺，清熱解毒，清利咽喉，鎮咳止癢等作用，用于治療慢性咽炎引起的咽干，咽癢，刺激性咳嗽，是治療咽炎的常用藥。麥冬為百合科植物麥冬Ophiopogon japonicus（L.f） Ker-Gawl.的干燥塊根，主產于四川、浙江。山麥冬為百合科植物湖北麥冬Liriope spicata（Thunb.）Lour.var.prolifera Y.T.Ma或短葶山麥冬Liriope muscari（Decne.）Baily的干燥塊根，根據產地不同習稱湖北麥冬和福建麥冬[1]。麥冬具有養陰生津，潤肺清心的功效，麥冬和山麥冬均收載于《中國藥典》2020年版，兩者功能主治相同，性狀相近，易混用，日常抽檢中發現有以山麥冬代替麥冬銷售的情況。中醫傳統用藥習慣中并不使用山麥冬，湖北麥冬僅作為地方用藥[2-3]，同時研究[4]表明麥冬質量優于山麥冬，說明麥冬和山麥冬不能混用。

咽炎片制劑中存在麥冬摻偽投料的風險，應建立相關檢驗方法對山麥冬替代麥冬投料的情況進行檢查。參考相關文獻[5-7]本實驗采用高效液相色譜-串聯電噴霧三重四級桿質譜法（HPLC-MS/MS），分別以麥冬中的麥冬皂苷D、湖北麥冬中的山麥冬皂苷B、短葶山麥冬中的短葶山麥冬皂苷C為指標性成分，建立咽炎片中麥冬投料的檢測方法，以判斷咽炎片制劑中是否存在以山麥冬替代麥冬投料的情況。

1 儀器與試藥

XS-105電子天平（梅特勒公司）、超聲波清洗器（杭州超聲波有限公司）、QTRAP6500高效液相色譜-串聯電噴霧三重四級桿質譜（AB SCIEX公司）。

麥冬皂苷D（PS180725-04、Stanford Chemicals），麥冬對照藥材（121013-201711）、湖北麥冬對照藥材（121136-201803）、山麥冬皂苷B（111907-201103）和短葶山麥冬皂苷C（111908-201102）均來自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈、甲酸均為色譜純（Merk化工）；水為超純水。

麥冬、湖北麥冬、短葶山麥冬分別購于安徽亳州中藥材市場、菏澤鄄城舜王城藥材市場，經菏澤市食品藥品檢驗檢測研究院馬海春副主任中藥師檢定均為正品。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Innoval ODS-2（2.1 mm×100 mm，3 μm）色譜柱；流動相：乙腈-0.1 %甲酸：（75:25）；流速0.3 ml/min，柱溫40 ℃，進樣量2 μl。

2.2 質譜條件

掃描模式為質譜多反應監測（MRM），具體參數見表1。

表1 多反應監測條件

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液 取麥冬皂苷D、山麥冬皂苷B、短葶山麥冬皂苷C對照品適量，分別加甲醇制成濃度為500，250，500 ng/ml對照品溶液。

2.3.2 藥材溶液 取麥冬對照藥材、湖北麥冬對照藥材、短葶山麥冬藥材適量，粉碎，分別稱取0.5 g，加甲醇30 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水25 ml使溶解，用水飽和的正丁醇提取2次，每次20 ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇5 ml使溶解，濾過，取續濾液，即得。

2.3.3 供試品溶液 取咽炎片6片，去除糖衣，研細，加甲醇30 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水25 ml使溶解，用水飽和的正丁醇提取3次，每次25 ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇5 ml使溶解，濾過，取續濾液，即得。

2.3.4 標準樣品及陰性樣品溶液 按照咽炎片處方配料比，制備標準樣品及缺少麥冬的陰性對照，按照2.3.3項供試品溶液制備方法制成標樣溶液及陰性對照溶液。

2.4 對照品質譜確認結果

取3種對照品溶液，參照2.1項和2.2項下條件，進行HPLC-MS/MS分析。色譜圖見圖1～圖3。

圖1 麥冬皂苷D MRM總離子流圖

圖2 短葶山麥冬皂苷C MRM總離子流圖

圖3 山麥冬皂苷B MRM總離子流圖

2.5 專屬性試驗

將2.3.2項和2.3.4項下藥材溶液、標準樣品溶液、陰性樣品溶液在2.1項和2.2項條件下進樣，結果見圖4～圖8。

圖4 麥冬對照藥材MRM總離子流圖

圖5 湖北麥冬對照藥材MRM總離子流圖

圖6 短葶山麥冬藥材MRM總離子流圖

圖7 標樣溶液MRM總離子流圖

圖8 陰性樣品溶液MRM總離子流圖

由圖可見，麥冬、湖北麥冬對照藥材及短葶山麥冬藥材分別只檢出與麥冬皂苷D、山麥冬皂苷B、短葶山麥冬皂苷C對照品保留時間一致的離子峰，母離子及子離子峰均與對照品一致。標準樣品溶液僅檢出與麥冬皂苷D對照品保留時間一致的離子峰，陰性樣品溶液未檢出與各對照品相應的離子峰。由此判定，制劑中其他組分及輔料對目標成分無干擾，該方法可準確判定咽炎片是否存在麥冬摻偽投料。

2.6 檢測限

分別取麥冬皂苷D、山麥冬皂苷B、短葶山麥冬皂苷C對照品溶液逐級稀釋，以3倍信噪比為檢測限，測定3種對照品，結果見表2。

表2 對照品檢測限

2.7 結果測定

依照上述色譜及質譜條件，測定31批次樣品，結果見表3。

表3 樣品測定結果

由表3可見，有23批次樣品僅檢出麥冬皂苷D，未發現替代投料；有7批次樣品檢出短葶山麥冬皂苷C，表明混有短葶山麥冬投料；有1批次樣品檢出山麥冬皂苷B，表明混有湖北麥冬投料；有1批次樣品檢出山麥冬皂苷B和短葶山麥冬皂苷C，表明同時混有湖北麥冬和短葶山麥冬投料。

3 討論

3.1 檢測方法優化

前期研究中采用薄層色譜和液相色譜法檢查，干擾較多，靈敏度難以滿足要求。液質聯用技術具有靈敏度高，專屬性強的特點，在中藥研究中廣泛應用[8-12]。根據3種指標性成分化學結構，選用不同的采集模式，其中山麥冬皂苷B在正離子模式下的母離子信號響應較強，短葶山麥冬皂苷C和麥冬皂苷D在負離子模式下的母離子信號響應較強。為提高檢驗靈敏度，分別采用正負離子模式對3種指標性成分進行監測。

3.2 結果分析

現行藥典收錄的麥冬和山麥冬來源不同，在常規的性狀鑒別上常難以區分。在前期調研中發現，部分農戶種植的麥冬種質資源存在問題，采收后經鑒別為山麥冬，相關生產企業的藥材驗收人員對麥冬的鑒別要點認識不足，導致制劑企業可能存在混用的風險。本試驗建立的液質聯用的檢查方法能夠準確鑒別麥冬、湖北麥冬和短葶山麥冬，可為咽炎片質量標準的完善提供參考。該制劑中麥冬為提取后投料，后續的研究中將對麥冬原粉投料的制劑進行研究，為含麥冬類制劑的通用檢查方法的建立提供依據。