氣相色譜法測定胃蛋白酶中丙酮的殘留量

張德偉?朱澤兵?郭婭?肖琦?袁林?唐小平

摘要：本文采用氣相色譜法測定胃蛋白酶中丙酮的殘留量。結果表明，樣品中丙酮的分離度高，濃度在100～1000 μg/mL范圍內，線性關系良好（r=0.9992），方法回收率為96.5%，相對標準偏差為1.4%，與定量分析要求相適應。采用氣相色譜法測定胃蛋白酶中丙酮的含量，樣品的處理簡便、快捷，檢測結果靈敏、準確、重現(xiàn)性好，為現(xiàn)有質量標準的提升提供科學依據(jù)。

關鍵詞： 胃蛋白酶;丙酮;氣相色譜法

【中圖分類號】Q946.81+4 【文獻標識碼】A 【文章編號】1673-9026（2022）05--01

胃蛋白酶（Pepsin）具有助消化的生理功能，在工業(yè)上還廣泛應用于方便食品、奶制品、助消化藥和口香糖加工制造[1]。目前，國內外對胃蛋白酶的研究主要集中在臨床療效、藥理領域，對質量狀況的研究較少，現(xiàn)報道有采用單掃描極譜法測定胃蛋白酶中丙酮殘留的報道[2]， 但該法所采用的檢測設備普及率低，專屬性不強。因此，本實驗采用氣相色譜法測定胃蛋白酶中丙酮的殘留量，為該產品的質量安全提供技術支持。

1 材料與方法

1.1材料與試劑

胃蛋白酶樣品，購于西南地區(qū)生產胃蛋白酶的主流廠家A、B、C、D，各2個批次。N-甲基吡咯烷酮 （分析純，Honeywell公司生產）;丙酮（色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司）。

1.2 儀器與設備

CP224S電子天平（賽多利斯科學儀器有限公司）;GC-2010Plus氣相色譜儀（日本島津科技有限公司）;HP-5毛細管色譜柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm，安捷倫科技有限公司）。

1.3 實驗方法

1.3.1 標準儲備液的配制

精密稱取丙酮對照試劑0.50g，置50 mL容量瓶中，加50% N-甲基吡咯烷酮稀釋至刻度，搖勻，制成濃度分別為10 mg/mL的混合溶液，作為標準儲備液。

1.3.2 標準工作液的配制

分別精密量上述儲備液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置10 mL的容量瓶中，加50% N-甲基吡咯烷酮稀釋至刻度，配成濃度分別為100、200、400、600、800、1000 μg/mL系列標準工作溶液。

1.3.3 樣品的處理

精密稱取胃蛋白酶0.5 g，置20 mL頂空進樣瓶中，加50% N-甲基吡咯烷酮5 mL，密封，渦旋使溶解，作為供試品溶液。

2 結果與分析

2.1 色譜條件

頂空進樣瓶汽化室溫度80 ℃，汽化時間20 min;進樣口溫度200 ℃;分流-不分流進樣（SSL）：進樣量1 mL，分流比25：1;色譜柱采用程序升溫模式：初始溫度40 ℃，保留時間7 min，以10℃/min速率升溫至80 ℃，再以25 ℃/min速率升溫至200 ℃，保持5 min;FID檢測器，溫度250 ℃[3-5]。

2.2 線性關系

分別精密量取“1.3.2”項下的系列標準工作溶液各5 mL，置20 mL頂空進樣瓶中，按擬定的色譜條件進行測定。以質量濃度（X）為橫坐標，測得的峰面積（Y）為縱坐標，繪制線性回歸方程為Y=2866Х-8289， 相關系數(shù)r=0.9992，結果見圖1。

2.3 回收率與精密度實驗

通過對3個平行樣進行加標回收試驗，結果見表2。丙酮回收率在96.5%，相對標準偏差RSD是1.4%，該方法的回收率和精密度良好。

2.4 方法檢出限

按S/N=3， 取對照試劑溶液逐級進行稀釋， 按擬定氣相色譜條件進行測定， 測得丙酮在該方法中的檢出限為0.1μg/mL。

2.5 樣品中丙酮的測定

取A、 B、 C、 D四個生產廠家的胃蛋白酶樣品進行測定，結果見表3。實驗結果表明， 不同廠家生產的胃蛋白酶原料中丙酮殘留量水平存在較大差異。

3 結論

胃蛋白酶生產過程中主要使用丙酮進行沉淀結晶[6-8]，分離干燥后易形成微小的泡狀微粒，鎖住了殘留的有機溶劑，很難完全散發(fā)出來。本研究以50%N-甲基吡咯烷酮為溶劑，將樣品置于頂空瓶中加熱溶解，讓有機相全部釋放出來，形成飽和的蒸汽，保證各組分不流失，頂空進樣對氣相色譜儀污染較小，測定更加科學、準確，檢測靈敏度高，實驗操作簡單、快速度，可作為胃蛋白酶中丙酮留量測定方法進行推廣。

參考文獻：

[1] 喻東. 生物堿對胃蛋白酶的酶學性質及光譜性質的影響[D]. 成都： 四川大學， 2005.

[2] 田玉瓊，湯曉勤，向仕學.胃蛋白酶中丙酮殘留量的單掃描極譜法測定[J].預防醫(yī)學情報雜志，2006（06）：756-757.

[3] 林瑛，楊學靈，楊雪珠.氣相色譜法測定胰酶中的丙酮溶劑殘留量[J].廣州化學，2013，38（02）：34-36.

[4] 周緒云，馬曉茜.氣相色譜法測定洛索洛芬鈉中7種殘留溶劑的含量[J].中南藥學，2021，19（07）：1450-1453.

[5]? 田潔，丁紅雨，趙麗元，郝愛魚，王戈.頂空毛細管氣相色譜法測定阿托伐他汀鈣原料藥中殘留溶劑[J].中國藥物評價，2015，32（03）：135-138.

[6] 王瑩. 豬胃蛋白酶分離純化新工藝建立及技術參數(shù)研究[D].黑龍江八一農墾大學，2009.

[7] 辛秀蘭.生物分離與純化技術 [ M] ， 科學出版社， 2005， 8： 64-65.

[8] 王瑩， 張麗萍.胃蛋白酶分離純化技術研究進展[J].中國食品添加劑， 2008（01）： 110-113.

作者簡介：張德偉， 副主任中藥師， 主要研究方向為食品藥品質量檢測分析。

基金項目： 重慶市萬州區(qū)2020年度科技創(chuàng)新項目（wzstc-2020059）， 重慶市科學技術局2021年度重慶市藥品科研項目

*通信作者： 朱澤兵， 主管中藥師， 主要研究方向為食品藥品質量檢測分析。

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