天津市靜海區乙肝病毒感染者病毒基因型分布的臨床意義

張 梅

(天津市靜海區醫院感染疾病科，天津 301600)

據WHO流行病學數據顯示,全球約有2億人曾經感染過乙型肝炎病毒(HBV),且每年大約有60萬人死于HBV感染所致相關疾病[1-2]。我國是HBV感染大國,區域性流行病學研究顯示,我國HBsAg陽性攜帶者高達1億以上[3]。近年來研究顯示,不同地區乙型肝炎病毒不同感染類型存在一定的差異,并與感染后患者疾病的轉歸存在一定的關系[4-5]。HBV感染后,由于病毒編碼的一種蛋白質HBV的直接作用以及由于細胞內活性氧(ROS)的大量增加而引起的間接變化,導致肝細胞改變。HBV通過與基因組DNA結合,改變miRNAs的表達模式,影響組蛋白甲基轉移酶,結合SIRT1蛋白激活轉錄,與組蛋白甲基化酶和去甲基化酶協同改變細胞表達模式,部分導致調控失調[6-7]。慢性HBV感染時,細胞內ROS增加了1000倍。ROS增加的部分原因是HBV定位于線粒體,在線粒體中HBV降低線粒體膜電位。HBV感染后ROS的增加引起炎性反應,從而導致ROS的進一步增加。ROS引起20多種類型的DNA損傷。氧化性DNA損傷是致突變的。此外,DNA損傷的修復可在DNA修復過程中引起損傷部位的表觀遺傳改變。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取我院診治的HBV感染者98例為研究對象,留取患者的血清標本進行HBV基因型檢測。98例HBV感染者中男66例,女32例,年齡19～79歲,平均(54.3±19.6)歲,其中無癥狀攜帶者10例,慢性乙型肝炎患者77例,肝硬化者6例,肝細胞癌者5例。98例患者均符合全國第十次病毒性肝炎會議修訂的“病毒性肝炎防治方案”的標準及2005 年《慢性乙型肝炎防治指南》標準,且臨床確診HBV DNA陽性。本研究經我院醫學倫理委員會批準。

1.2試劑與儀器:DNA提取試劑盒,Qiagene DNA blood minikit(50T),購自德國QIAGENE公司；DNA聚合酶,購自日本Takara公司；dNTP,購自日本Takara公司；引物序列合成由華大基因公司完成。臺式微型離心機,購自BechmanCoulter公司；多功能PCR儀(DNA Engine),購自美國BIO-RAD公司。

1.3基因型檢測：按照試劑盒說明提取患者血清HBV DNA,根據文獻報道[4,8]進行PCR反應,并根據擴增片段大小與陽性標準品做對照,判斷HBV基因型。

1.4統計學分析：統計學分析采用STATA12.0軟件進行,基因型等計數資料采用n(%)表示,組間比較采用χ2檢驗,P<0.05認為差異有統計學意義。

2 結果

2.1HBV基因型：98例患者中乙型肝炎病毒B型37例(37.8%),C型45例(45.9%),B型+C型混合感染型16例(16.3%),混合型顯著低于B型和C型,具體亞型分布頻率：B型37例(37.8%)：其中Ba型23例(23.5%)，Bj型8例，非Ba/Bj型6例(6.1%)；C型 45例(45.9%)：其中C1型3例(3.1%)，C2型25例(25.5%)，非C1/C2型17例(17.3%)；B+C型16例(16.3%)：其中Ba+C1型1例(1.0%)，Bj+C2型1例(1.0%)，Ba+C2型3例(3.1%)，Bj+C2型4例(4.1%)，Ba型+非C1/C2型4例(4.1%)，Bj型+非Cl/C2型1例(1.0%)，非Ba型/Bj+C1型0例(0.0%)，非Ba/Bj型+C2型0例(0.0%)，非Ba/Bj型+非Cl/C2型2例(2.0%)。見圖1。

圖1 98例患者中乙型肝炎病毒分型分布頻率

2.2不同類型HBV感染者基因型分布：無癥狀攜帶者以B型感染為主,慢性乙型肝炎以B型和C型為主,肝硬化及肝癌以C型為主,不同類型HBV感染者基因型分布頻率差異存在統計學意義(P<0.05)。見表1，見圖2。

表1 不同類型HBV感染者基因型分布[n(%)]

圖2 不同類型HBV感染者基因型分布柱狀圖

3 討論

乙型肝炎病毒感染人體細胞后在人體內不斷復制增殖,是造成肝功能異常、肝硬化、甚至肝癌的重要原因。近年來的分子流行病學研究顯示,人群感染HBV后可出現不同的轉歸,部分人群為無癥狀攜帶者,部分人群發展為慢性乙型肝炎、但有的人群感染后發生肝硬化甚至肝癌[9]。已有研究證實,不同的乙型肝炎轉歸可能與患者感染的HBV基因型有關[10]。根據HBV全基因組序列差異≥8%或S基因序列≥4%,可將HBV 分為A型到H型,8個基因型。不同基因型又可進一步分為不同亞型。既往的研究表明,HBV基因型具有較為明顯的地理分布特點和人種的特異性,HBV基因型與感染途徑、感染譜、疾病進展有一定相關性[11-12]。李雅娟等[4]采用基因型和亞型特異性引物聚合酶鏈反應6個城市400多份HBV感染者血清進行基因型及亞型分析,認為HBV各型感染存在明顯差異。研究提示,上述6個城市HBV感染者中,以B2和C2亞型占優勢,C基因型可能與肝硬化和肝細胞癌的發生有關。徐素仿等[8]研究認為合肥地區HBV感染者中以Ba和C2亞型占優勢,C基因型可能與肝硬化和肝細胞癌的發生有關。從上述來自不同地區的研究樣本可以看出,HBV感染基因型存在一定的地區差異及人群特征。

本研究對天津市靜海地區98例HBV感染者的血清HBV基因分型進行了研究,探討該地區HBV感染患者病毒基因型分子流行病學情況,為該地區的乙型肝炎診治提供一定的參考。研究發現,該地區乙型肝炎病毒以B型(37.8%)和C型 (45.9%)為主。肝硬化及肝癌患者中C型比例最高。研究提示,天津市靜海地區乙型肝炎病毒感染以B型和C型為主,C型感染可能是本地區HBV感染患者肝硬化及肝癌的高危因素。因此，對于HBV C型感染患者應引起醫務人員的重視,此類感染人群更易發展為肝硬化和肝癌。