不同離子濃度、溫度、pH對拉氏精子活力的影響

吳 晨，駱小年，段友健，曾永聰，繆云亮，韓 峰，羅 超

( 大連海洋大學 水產與生命學院，遼寧 大連116023 )

1 材料與方法

1.1 親魚來源

試驗魚取自遼陽縣興大養殖場。2020年5月繁殖季節，挑選身體健康、發育良好的雄親魚10尾，體質量80.0～100.0 g，體長10.0～20.0 cm。

1.2 人工催產及精液采集

1.3 精子激活液的配制

參考高體雅羅魚(Leuciscusidus)精子活力試驗的配制方法[13]。以NaCl、KCl、CaCl2、葡萄糖、Tris緩沖劑(C4H11NO3)作為外界因子，將不同晶體配制成不同濃度梯度的離子激活液，所有溶液現配現用，純水作為對照組，每個梯度試驗3個平行。NaCl：25、50、75、100、125 mmol/L；KCl：5、25、75、100、150 mmol/L；CaCl2：25、35、50、75、100 mmol/L；葡萄糖：25、50、75、100 mmol/L；Tris緩沖劑：5、10、20、50、100 mmol/L。并在單因子試驗的基礎上設計了復合因子試驗：復合液A[V(Na+100 mmol/L)∶V(K+75 mmol/L)∶V(葡萄糖100 mmol/L)=1∶1∶1]、復合液B[V(Na+100 mmol/L)∶V(K+75 mmol/L =1∶1)]、復合液C[V(Na+100 mmol/L)∶V(葡萄糖100 mmol/L)=1∶1]和復合液D[V(K+75 mmol/L)∶V(葡萄糖100 mmol/L)=1∶1]。

參考不同pH對烏鱧(Channaargus)精子活力影響的試驗方法[15]，采用濃度為0.1 mol/L的NaOH、KH2PO4、H3BO33種溶液配制出不同pH梯度的緩沖液。pH設置為5.0、6.0、7.0、8.0、9.0。

1.4 精子活力觀察

R1=(t2-t1)/t1×100%

R2=(t4-t3)/t3×100%

式中，R1為精子快速運動時間變化率(%)，R2為壽命變化率(%)，t1為對照組精子快速運動時間(s)，t2為試驗組精子快速運動時間(s)，t3為對照組壽命(s)，t4為試驗組壽命(s)。

1.5 數據處理與分析

試驗數據用Microsoft Excel 2010統計，SPSS 19.0軟件進行單因素方差分析，并使用Duncan法對多組樣本間進行差異顯著性分析，以P=0.05為檢驗水準，統計結果以平均值±標準誤表示。

2 結 果

2.1 Na+對拉氏精子活力的影響

表1 拉氏精子在不同Na+濃度中的活力(n=3)Tab.1 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different concentrations of Na+

2.2 K+對拉氏精子活力的影響

表2 拉氏精子在不同K+濃度下的活力(n=3)Tab.2 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different concentrations of K+

2.3 Ca2+對拉氏精子活力的影響

表3 拉氏精子在不同Ca2+濃度中的活力(n=3)Tab.3 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different concentrations of Ca2+

2.4 葡萄糖對拉氏精子活力的影響

表4 拉氏精子在不同葡萄糖濃度下的活力(n=3)Tab.4 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different concentrations of glucose

2.5 Tris緩沖劑對拉氏精子活力的影響

表5 拉氏精子在不同Tris緩沖劑(C4H11NO3)濃度中的活力(n=3)Tab.5 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different concentrations of Tris buffer

2.6 溫度對拉氏精子活力的影響

表6 拉氏精子在不同溫度下的活力(n=3)Tab.6 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii atdifferent temperature

2.7 pH對拉氏精子活力的影響

表7 拉氏精子在不同pH下的活力(n=3)Tab.7 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii atdifferent pH

2.8 幾種因子復合液對拉氏精子活力的影響

表8 拉氏精子在幾種因子復合液下的活力(n=3)Tab.8 Sperm motility of fat minnow P. lagowskii at different types of commpound liquids

3 討 論

3.1 Na+、 K+、 Ca2+對拉氏精子活力的影響

表9 幾種淡水魚類精子活力最強時金屬離子濃度Tab.9 Concentration of metal ions at the maximal sperm motility in several freshwater fishes

3.2 Tris緩沖劑對拉氏精子活力的影響

3.3 葡萄糖對拉氏精子活力的影響

魚類精液中的碳水化合物主要是葡萄糖、半乳糖和果糖[31]。鯉(Cyprinuscarpio)精漿的堿性磷酸酶能使來自血糖的6-磷酸葡萄糖和6-磷酸果糖轉變為葡萄糖和果糖，葡萄糖、果糖在體外受精魚類的精子中經三羧酸循環可為精子運動提供能量[32]。適宜濃度的葡萄糖可明顯提高白斑狗魚(Esoxlucius)[33]、高體雅羅魚[13]、蛇(Saurogobiodumerili)[34]、薩羅羅非魚(Sarotherodonmelanotheron)[35]的精子活力。相比之下，適宜葡萄糖濃度下細鱗斜頜鲴精子活力雖然較高，但對精子活力提升作用不明顯[27]。本試驗結果顯示，葡萄糖在0～100 mmol/L濃度下，拉氏精子快速運動時間均無顯著差異，但在壽命上適宜葡萄糖濃度對拉氏精子活力有明顯促進作用。

3.4 溫度對拉氏精子活力的影響

3.5 pH對拉氏精子活力的影響

3.6 幾種因子復合液對拉氏精子活力的影響

4 結 論