RGS6表達對肝細胞癌預后的影響

吳小勤,，黃宏寶，吳雪銘，蘇群英，王興枝子，龍勤琴，黃小英，龍喜帶

【摘要】 目的 探討G蛋白信號傳導調節蛋白6（regulator of G protein signaling 6，RGS6）表達與肝細胞癌（hepatocellular carcinoma， HCC）預后的關系。

方法 收集HCC腫瘤組織樣本100例，通過免疫組織化學檢測RGS6在腫瘤組織中的表達情況，采用Kaplan-Meier生存法和Cox回歸模型分析RGS6表達對HCC預后的影響。

結果 腫瘤組織中RGS6表達減少與更高腫瘤分級、微血管侵犯、腫瘤生長、Ki67高分值等病理特征密切相關（P<0.05）;Kaplan-Meier生存曲線分析結果顯示腫瘤組織中RGS6表達減少的患者具有更低的生存率（P=0.027），多因素Cox回歸分析均顯示具有RGS6表達減少的患者死亡風險增加，具體風險值（HR）為157.747（95%CI=5.769～4313.674，P=0.003）。

結論 RGS6表達是一個影響HCC預后的獨立指標，RGS6表達影響HCC預后的可能機制與其影響腫瘤分化、生長、血管浸潤等相關。

【關鍵詞】 肝細胞癌;RGS6表達;腫瘤預后

中圖分類號：R735.7 文獻標志碼：A DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2022.02.008

Effects of RGS6 expression on the prognosis of hepatocellular carcinoma

[HJ2][HJ]

WU Xiaoqin1a，2， HUANG Hongbao1b， WU Xueming1a，2， SU Qunying1a，2， WANG Xingzhizi1a，2，

LONG Qinqin1a，2， HUANG Xiaoying1a，2， LONG Xidai1a，2

（1a.Clinical Pathological Diagnosis & Research Center，1b. Reproductive Medicine Center， 1. Affiliated Hospital of

Youjiang Medical University for Nationalities， Baise 533000， Guangxi， China; 2.Key Laboratory of Molecular

Pathology[Hepatobiliary Diseases] of Guangxi， Baise 533000， Guangxi， China）

[HJ2][HJ]

【Abstract】 Objective To explore association between the expression of regulator of G protein signaling 6 （RGS6） and the prognosis of hepatocellular carcinoma （HCC）.

Methods A total of 100 tumor tissue samples with HCC were collected and the RGS6 expression in these tumor tissues was tested by immunohistochemistry method.The effects of RGS6 expression on HCC prognosis were analyzed by Kaplan-Meier survival method and Cox regression model.

Results The decrease of RGS6 expression in tumor tissues was associated with pathological features such as higher tumor grade，microvascular invasion， tumor growth and higher Ki67 score， etc （P<0.05）. Results from Kaplan-Meier survival method showed that patients with decreasing RGS6 expression in tumor tissues had a lower survival rate （P=0.027）， multivariable Cox regression analysis exhibited that decreasing RGS6 expression increased the death risk of patients， and specific risk value was 157.747（5.769-4313.674， P=0.003）.

Conclusion RGS6 expression is an independent index affecting the prognosis of HCC， and the possible mechanism of which is related to its influence on tumor differentiation， growth and vascular infiltration， etc.

【Key words】 HCC; RGS6 expression; tumor prognosis

肝細胞癌（hepatocellular carcinoma， HCC）是消化系統中常見的惡性腫瘤之一，其發病率在全球排名第6位，死亡率位于第4[1]，該腫瘤發病機制復雜，早期診斷困難，無有效的治療手段。目前，臨床上依然以手術治療為主和化療為輔，但預后不佳[2]。因此，尋找有效的預后預測標志物仍是當前研究領域有待解決的重要課題。而G蛋白信號傳導調節蛋白6（regulator of G protein signaling 6，RGS6）是G蛋白信號傳導通路負性調節因子家族的重要成員，具有促進GTP酶活性并加速GTP水解而調節G蛋白信號通路的重要作用[3～4]。近年來，有研究表明RGS6在膀胱癌、胰腺癌、結直腸癌、乳腺癌等多種腫瘤及中樞神經系統、心血管系統疾病中出現不同程度的表達異常，提示可能參與腫瘤及某些疾病的發生與發展[5～10]。但是，RGS6表達是否影響HCC的預后并不清楚。本研究采用免疫組化檢測RGS6在HCC中的表達情況，并根據免疫組化結果探討RGS6表達與HCC患者預后的關系。

1 資料與方法

1.1 研究對象

收集在右江民族醫學院附屬醫院住院進行手術治療并符合下列入選標準的HCC患者：術前未進行放療與化療、病理組織活檢確診為HCC、具有完整的臨床病理資料與生存隨訪資料、具有足夠用于免疫組織化學檢測的石蠟包埋組織樣本。在2016年1月至2021年6月期間，收集到符合入選標準的HCC患者共100例。所有研究對象均接受了生存隨訪，隨訪截止日期為2021年6月30日。當前研究獲得了病例收集醫院的倫理審批同意。

1.2 免疫組織化學檢測

RGS6在HCC腫瘤組織中的表達水平通過免疫組織化學方法進行檢測分析，其中RGS6抗體購自北京博奧森生物技術有限公司（產品編號：bs-19862R），二抗由邁新生物科技有限公司提供。免疫組織化學檢測為標準化檢測流程，具體包括檢測石蠟組織的脫蠟、水化、抗原修復、抗體孵育、顯色分析等過程，為保準實驗，每次實驗均設立陰性對照與陽性對照，并采用雙盲法進行分析。根據染色程度和強度評價RGS6蛋白質的表達量，其中染色強度分為0～3分：無染色為0分，弱染色為1分，中度染色為2分，強染色為3分;染色程度分為0～3分：陽性細胞數占總檢細胞百分比的0～10%、11%～40%、41%～70%和71%～100%分別為0分、1分、2分和3分，以染色強度與程度的乘積作為RGS6表達量。為便于分析，我們以所有樣本的RGS6平均表達量5分作為高低表達分組的依據，即≥5分為高表達組，<5分為低表達組。

1.3 統計學方法

所有統計分析通過R軟件（version 4.0.3）來完成。計量資料不服從正態分布，采用“中位數（P25，P75）”表示，組間比較采用秩和檢驗，計數資料采用頻數（n）和百分率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法，RGS6表達對HCC預后的影響通過Kaplan-Meier生存法和Cox生存回歸模型來分析。檢驗水準：α=0.05，雙側檢驗。

2 結 果

2.1 RGS6表達與HCC病理特征的關系

我們首先分析了HCC腫瘤組織中RGS6表達與HCC臨床病理特征的關系，結果顯示：與具有高RGS6表達的患者相比，低RGS6表達者腫瘤分化程度更低，微血管浸潤概率更高（表1），反映腫瘤生長速度的Ki67分值和腫瘤直徑也更大（圖1和表1）。

2.2 RGS6表達對HCC生存曲線的影響

Kaplan-Meier生存曲線結果顯示（圖2），與高RGS6表達者相比，低RGS6表達者具有更低的總體生存率，差異有統計學意義（P=0.027）。

2.3 RGS6表達對HCC死亡風險的影響

為了明確RGS6表達是否是一個獨立的HCC預后指標，我們完成了多因素Cox生存回歸分析，將所有變量納入分析模型中。結果顯示：以高RGS6表達者為參照，具有低RGS6表達的HCC患者所面臨的死亡風險增加約157倍（校正HR為157.747，95%可信區間為5.769～4313.674，P值為0.003）。

3 討 論

RGS6作為一種G蛋白信號通路的負性調控因子，在胚胎發育和細胞分化過程中起重要作用，它的表達失調涉及腸癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌等多種腫瘤的演進，在腫瘤的發生與發展進程中起到類似腫瘤抑制基因的作用[11～12]。例如，在結直腸癌中，有研究者觀察到RGS6上調具有抗腫瘤作用，在膀胱癌、乳腺癌、胰腺癌中也有類似發現。并且還有研究發現RGS6參與心血管系統疾病的發生發展[13～18]，因此，我們猜想，RGS6在HCC的發生發展中是否也起到同樣或是相似的抑癌作用，我們試圖通過實驗驗證并闡明這一想法。在我們的研究結果中發現HCC腫瘤組織中RGS6的升高與HCC患者的良好預后相關，這種RGS6影響HCC預后不受其他臨床病理特征的影響，這說明RGS6是一個影響HCC的獨立預后標志物，并且RGS6是HCC的保護因素，在HCC的發生發展中起到限制腫瘤生長的作用。而RGS6調節腫瘤預后的機制卻很復雜，可能涉及如下幾個方面：① RGS6在腫瘤形成的免疫微環境中通過調節趨化因子、細胞轉化及誘導細胞死亡等方式發揮抗腫瘤作用[19～26]。② RGS6能負性調節細胞增殖。我們當前的研究也發現腫瘤組織中RGS6表達與Ki67、腫瘤大小等腫瘤增殖標志相關，表達水平增加可以抑制腫瘤增殖。③ RGS6表達水平高低與HCC腫瘤細胞的分化程度相關，高RGS6表達者具有更高的腫瘤分化，后者與好的腫瘤預后相關。因而，RGS6有望成為HCC預后的新指標和免疫治療新靶點[27～28]。

總之，我們的研究發現RGS6有統計學意義地影響HCC預后，是一個獨立的預后標志物，這種影響也許與RGS6表達調節腫瘤分化與增殖密切相關。值得注意的是我們的研究是基于一個相對較小的樣本所獲得的結論，它的推廣需要通過更大樣本和功能性試驗加以確認。

參 考 文 獻

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（收稿日期：2021-08-26 修回日期：2021-09-12）

（編輯：梁明佩）