肺炎支原體肺炎患兒外周血CD64 及心肌酶與血清MP-IgM 抗體滴度的相關(guān)性

況兆忠，裴彧，李會(huì)強(qiáng)，魏殿軍

（1.天津醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，天津 300203;2.天津市濱海新區(qū)塘沽婦產(chǎn)醫(yī)院檢驗(yàn)科，天津 300451；3.河北省燕達(dá)醫(yī)院檢驗(yàn)科,廊坊 065201）

肺炎是臨床兒科的常見病、多發(fā)病，其中又以肺炎支原體（MP）感染引起的肺炎最為多見[1]。MP是一種沒有細(xì)胞壁的原核生物，體積非常小，可穿過(guò)細(xì)胞過(guò)濾器，并且還能在體外生長(zhǎng)繁殖，具有較強(qiáng)的生存能力[2]。人體是MP 的唯一宿主，普遍易感，呼吸道飛沫是MP 傳播的主要途徑。肺炎支原體肺炎（MPP）的臨床發(fā)病率逐年攀升，且有明顯的低齡化發(fā)展趨勢(shì)，肺炎還是5 歲以下兒童死亡的主要原因[3]。近年來(lái)，由于抗生素藥物的過(guò)度使用及不當(dāng)使用，使得MP 耐藥性增加，難治性MPP、重癥MPP 病例逐年增多。因此，正確判斷MPP 患兒病情，指導(dǎo)臨床合理應(yīng)用抗生素，提高用藥的針對(duì)性具有重大意義。但是，目前關(guān)于MPP 的病情判斷、抗菌藥物選用等問(wèn)題尚不規(guī)范，再加上MPP 的臨床癥狀缺乏特異性，臨床較易漏誤診，從而進(jìn)一步增加病情判斷的難度，影響治療效果[4]。為此，找尋科學(xué)、有效的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)以輔助判定MPP 患兒病情，指導(dǎo)臨床治療尤為重要。本研究擬對(duì)外周血CD64、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脫氫酶（LDH）4 項(xiàng)指標(biāo)與MPP 患兒病情及血清MP-IgM 抗體滴度的關(guān)系進(jìn)行探究。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取天津市濱海新區(qū)塘沽婦產(chǎn)醫(yī)院兒科在2020 年1 月—12 月收治的MPP 患兒共130 例作為研究對(duì)象。男54 例，女76 例，年齡1~12 歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）有呼吸道感染相關(guān)癥狀（如發(fā)熱、咳嗽、咳痰、氣促、呼吸困難等），且影像學(xué)檢查可見胸部變化，嬰幼兒影像學(xué)檢查多表現(xiàn)為間質(zhì)性病變或散在斑片狀陰影，年長(zhǎng)兒以肺實(shí)質(zhì)性病變及胸腔積液多見[1]。（2）符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》中的MPP 診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。（3）血清MP-IgM 抗體滴度≥1：80。（4）年齡1~12 歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）反復(fù)呼吸道感染者。（2）免疫力低下者。（3）合并支氣管哮喘者。（4）合并其他感染性肺炎者。（5）患病前存在心血管、肝、腎、肺等系統(tǒng)基礎(chǔ)疾病者。

1.2 方法

1.2.1 血清學(xué)檢測(cè)方法 所有患兒均在入院后24 h內(nèi)采集空腹外周靜脈血（3mL），常規(guī)離心處理后保留血清，用于測(cè)定CD64、CK、CK-MB、LDH 水平。患兒在入院次日清晨，采集空腹靜脈血，用于測(cè)定血清MP-IgM 抗體滴度。

MP-IgM 抗體滴度檢測(cè)采用被動(dòng)凝集法，試劑盒由日本富士瑞必歐株式會(huì)社提供，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。CK 檢測(cè)采用磷酸肌酸底物法，CK-MB 檢測(cè)采用免疫抑制法，LDH 檢測(cè)采用乳酸底物法。檢測(cè)儀器選用日立7600 型全自動(dòng)生化分析儀（日本株式會(huì)社日立高新技術(shù)），CK、CK-MB、LDH 檢測(cè)試劑盒均由邁克生物股份有限公司提供。CD64 指數(shù)檢測(cè)使用FACS canto II 流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD 公司生產(chǎn)），檢測(cè)各細(xì)胞群CD64 平均熒光強(qiáng)度，根據(jù)公式計(jì)算中性粒細(xì)胞CD64 指數(shù)[6]，儀器性能和質(zhì)控全部良好。

1.2.2 分組方法 （1）參考MPP 重癥及輕癥診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]（肺部體征輕，未見肺外并發(fā)癥，X 線片顯示支氣管肺炎或間質(zhì)性肺炎為輕癥；肺部體征重，至少有2 個(gè)系統(tǒng)肺外并發(fā)癥，X 線片顯示大片實(shí)變影或胸腔積液為重癥），將130 例MPP 患兒分為兩組：重癥組（54 例）、輕癥組（76 例）。（2）根據(jù)測(cè)得的血清MP-IgM 抗體滴度，將130 例MPP 患兒分為3 組：低滴度組（1∶80）36 例、中滴度組（1∶160~1∶320）57 例、高滴度組（≥1∶640）37 例。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS23.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料以百分比（%）表示，數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s 表示，兩組比較采用t 檢驗(yàn)，多組比較進(jìn)行單因素ANOVA方差分析；非正態(tài)分布計(jì)量資料以M（P25，P75）表示，兩組間比較采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)，多組間比較采用Kruskal-Wallis H 檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman 相關(guān)性分析，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較 輕癥組與重癥組患兒的性別、病程比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。

表1 輕癥與重癥MMP 患兒的一般資料比較（±s）Tab 1 Comparison of general data between children with mild and severe MMP（±s）

表1 輕癥與重癥MMP 患兒的一般資料比較（±s）Tab 1 Comparison of general data between children with mild and severe MMP（±s）

注：MMP：肺炎支原體肺炎

組別 例數(shù) 男/女 病程（d）輕癥組 重癥組 76 28/48 4.35±0.78 54 26/28 4.48±1.02 χ2/t 1.662 0.823 P 0.197 0.412

2.2 不同病情程度 MMP 患兒的血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果與輕癥組相比，重癥組患兒的血清CD64 指數(shù)、CK、CK-MB、LDH 水平明顯更高（均P＜0.05）。輕癥組與重癥組MP-IgM 抗體滴度比較差異顯著，重癥組中高滴度者占比高于輕癥組（均P＜0.05），見表2。

表2 不同病情程度MMP 患兒的血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果[±s，M（P25，P75）,n（%）]Tab 2 Detection of serum parameters in children with different degrees of MMP[±s，M（P25，P75）,n（%）]

表2 不同病情程度MMP 患兒的血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果[±s，M（P25，P75）,n（%）]Tab 2 Detection of serum parameters in children with different degrees of MMP[±s，M（P25，P75）,n（%）]

注：MMP：肺炎支原體肺炎；CK：肌酸激酶；CK-MB：肌酸激酶同工酶；LDH：乳酸脫氫酶；MP：肺炎支原體

組別輕癥組重癥組χ2/Z/t例數(shù)76 54 CD64 指數(shù) CK（U/L） CK-MB（U/L） LDH（U/L）MP-IgM 抗體滴度低中高4.78±1.33 90.00（79.25，121.50） 36.50（25.75，45.25） 325.50（286.25，379.25） 33（43.42） 40（52.63） 3（3.95）7.25±1.99 118.50（96.25，138.50） 67.50（42.00，87.75） 521.50（377.25，590.25） 3（55.56） 17（31.48） 34（62.96）-7.96 -1.940 -4.496 -5.587 58.197 P 0.000 0.052 0.000 0.000 0.000

2.3 不同血清MP-IgM 抗體滴度患兒的血清指標(biāo)比較 不同血清MP-IgM 抗體滴度患兒的CD64 指數(shù)、CK、CK-MB、LDH 水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），CD64 指數(shù)、CK、CK-MB、LDH 水平均有高滴度組＞中滴度組＞低滴度組，兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表3。

表3 不同血清MP-IgM 抗體滴度患兒的血清指標(biāo)比較[（±s），M（P25，P75）]Tab 3 Comparison of serum parameters in children with different levels of MP-IgM antibody titers[（±s），M（P25，P75）]

表3 不同血清MP-IgM 抗體滴度患兒的血清指標(biāo)比較[（±s），M（P25，P75）]Tab 3 Comparison of serum parameters in children with different levels of MP-IgM antibody titers[（±s），M（P25，P75）]

注：CK：肌酸激酶；CK-MB：肌酸激酶同工酶；LDH：乳酸脫氫酶；與低滴度組相比，※P<0.05；與中滴度組相比；*P<0.05

組別 例數(shù) CD64 指數(shù) CK（U/L） CK-MB（U/L） LDH（U/L）低滴度組 36 4.22±1.14 87.50（72.75，101.25） 30.50（21.50，41.00） 307.00（246.25，332.25）中滴度組 57 5.05±0.71※ 106.00（90.00，137.00）※ 42.00（34.00，72.00）※ 383.00（334.00，448.00）※高滴度組 37 8.56±1.19※* 118.00（94.00，142.00）※* 68.00（42.00，88.00）※* 542.00（377.00，631.00）※*F/χ2 177.40 21.110 34.122 45.467 P 0.020 0.000 0.000 0.000

2.4 病情嚴(yán)重程度與MP-IgM 抗體滴度的相關(guān)性 相關(guān)性分析顯示，MPP 患兒病情輕重與MPIgM 抗體滴度呈正相關(guān)（r=0.556，P=0.000）。各血清指標(biāo)與MP-IgM 抗體滴度的相關(guān)性分析顯示，CD64指數(shù)、CK、CK-MB、LDH 均與MP-IgM 抗體滴度呈正相關(guān)（均P＜0.05），見表4。

表4 各血清指標(biāo)與MP-IgM 抗體滴度的相關(guān)性Tab 4 Correlation between serum parameters and MP-IgM antibody titer

3 討論

MP 是導(dǎo)致兒童呼吸道感染的主要病原體，其在進(jìn)入人體后會(huì)附著于呼吸道上皮細(xì)胞表層形成免疫復(fù)合物，從而引起呼吸道及其他器官病理性改變，不僅影響患兒的生理健康，進(jìn)展為重癥MPP 后還可能對(duì)患兒的生長(zhǎng)發(fā)育造成不利影響[8]。由于MP感染的臨床表現(xiàn)多樣，患兒就診時(shí)可能無(wú)明顯呼吸道體征，臨床較易發(fā)生漏診或誤診，而隨著病情的遷延，MP 感染引起的心肌損害等肺外并發(fā)癥未能被及時(shí)發(fā)現(xiàn)會(huì)造成患兒病情加重，從而延長(zhǎng)病程，增加患兒痛苦[9]。近期有報(bào)道指出[10]，我國(guó)MPP 的臨床發(fā)病率有一定的上升趨勢(shì)，所以盡早診斷并最準(zhǔn)確判定MPP 的病情嚴(yán)重程度，對(duì)于提高治療的有效性，降低難治性MPP 及重癥MPP 發(fā)生，改善患兒預(yù)后具有重要意義。

MPP 可造成機(jī)體缺氧及心功能不全，嚴(yán)重時(shí)還會(huì)危及患兒生命。心肌細(xì)胞富含各類心肌酶，MP 感染引起的心肌細(xì)胞受損使大量的心肌酶釋放入血，所以可檢測(cè)到血清心肌酶水平大幅提高。心肌酶水平的特征性改變能夠較好地反映心肌受損程度，是反映MPP 患兒心肌損傷程度的高敏感性、高特異性指標(biāo)，故常被作為臨床診治和預(yù)后評(píng)估的參考依據(jù)，常用的心肌酶指標(biāo)有CK、CK-MB、LDH 等[11]。國(guó)內(nèi)相關(guān)報(bào)道指出，MPP 患兒的血清CK、CK-MB 水平顯著高于健康兒童，并且CK、CK-MB 水平會(huì)隨著患兒病情的加重而升高[12]。國(guó)外有報(bào)道指出，LDH在難治性MPP 患者中呈高表達(dá)[13]。本研究顯示，重癥MPP 患兒的血清CK、CK-MB、LDH 水平均顯著高于輕癥患兒，證實(shí)血清心肌酶水平會(huì)隨著MPP 患兒病情嚴(yán)重程度的變化而變化，心肌酶水平越高預(yù)示著患兒心肌受損程度越嚴(yán)重。CD64 為免疫球蛋白IgG 的Fc 片段受體，其在細(xì)胞免疫和體液免疫之間發(fā)揮著連接作用。機(jī)體發(fā)生感染后，自身促炎-抑炎平衡被打破，只能通過(guò)固有免疫系統(tǒng)來(lái)拮抗外來(lái)病原體入侵，而中性粒細(xì)胞在這一過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，中心粒細(xì)胞在被激活后即可發(fā)揮趨化、吞噬作用，引起CD64 等相關(guān)分子表達(dá)上調(diào)。文獻(xiàn)報(bào)道指出，在人體正常情況下，CD64 表達(dá)極低，但在促炎因子、粒細(xì)胞集落刺激因子、補(bǔ)體裂解產(chǎn)物刺激下，中性粒細(xì)胞CD64 表達(dá)水平則會(huì)快速上升，CD64表達(dá)上調(diào)通常在炎癥發(fā)生24 h 內(nèi)即可檢測(cè)到[14]。本研究顯示，相比輕癥MPP 患兒，重癥MPP 患兒的CD64指數(shù)更高，這與關(guān)海燕等[15]報(bào)道結(jié)論一致。

MP-IgM 是機(jī)體受到MP 感染后，由免疫系統(tǒng)B細(xì)胞識(shí)別Ag 后分泌的一種免疫球蛋白，通常在機(jī)體感染后7 d 可測(cè)得，常被用作MP 感染診斷。吳娟等[16]報(bào)道認(rèn)為，MP-IgM 抗體滴度越高，MPP 患兒的發(fā)熱持續(xù)時(shí)間越長(zhǎng)，肺部X 片表現(xiàn)越嚴(yán)重，患兒合并肺外并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)越高。本研究通過(guò)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)MPP 患兒的病情輕重與MP-IgM 抗體滴度顯著相關(guān)，患兒病情隨著MP-IgM 抗體滴度的升高而加重，這與前述報(bào)道結(jié)果相符，提示MP-IgM 抗體滴度可較為可靠地反映MPP 患兒病情嚴(yán)重程度。本研究發(fā)現(xiàn)，CD64 指數(shù)、CK、CK-MB、LDH 表達(dá)均隨著MPIgM 抗體滴度的升高而升高，相關(guān)性分析顯示CD64指數(shù)、CK、CK-MB、LDH 均與MP-IgM 抗體滴度呈正相關(guān)。這與溫曉濱等[17]和Tomoyuki 等[18]的報(bào)道結(jié)論一致，表明隨著血清MP-IgM 抗體滴度的升高，MPP 患兒機(jī)體的炎癥反應(yīng)、免疫損傷及心肌損傷就越嚴(yán)重。在MPP 患兒的血清CD64 指數(shù)、CK、CK-MB、LDH 及MP-IgM 抗體滴度升高的情況下，應(yīng)當(dāng)警惕患兒病情的加重，指導(dǎo)臨床盡早應(yīng)用糖皮質(zhì)激素藥物，調(diào)整治療方案，積極干預(yù)肺外并發(fā)癥的發(fā)生，以降低重癥MPP、難治性MPP 的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，改善患兒預(yù)后。

綜上所述，MPP 患兒的外周血CD64、CK、CKMB、LDH 均與血清MP-IgM 抗體滴度有正相關(guān)關(guān)系，各項(xiàng)指標(biāo)均隨著MPP 患兒病情的加重而加重，監(jiān)測(cè)4 項(xiàng)指標(biāo)變化對(duì)于預(yù)測(cè)MPP 患兒病情進(jìn)展，指導(dǎo)治療方案調(diào)整有積極作用。本研究樣本量較小，研究結(jié)論還有待更大樣本量的多中心研究予以證實(shí)。