正交試驗篩選牛大力最佳切制工藝

李健 王倩 周改蓮

【摘 要】 目的：通過正交試驗篩選牛大力最佳切制工藝。方法：采用正交試驗設計設置加工牛大力條件，通過紫外分光光度法、浸出物測定法等方法進行牛大力多糖、總黃酮和煎出物等指標的測定，制定綜合評價規(guī)則進行結(jié)果分析。結(jié)果：3個因素對牛大力切制工藝影響程度依次為：A（蒸潤時間）>B（切片厚度）>C（干燥溫度），而各個因素不同水平的影響程度依次為：A1>A2>A3，B3>B2>Bd1，C2>C3>C1。結(jié)論：牛大力最佳切制工藝應為A1B3C2，即蒸潤10 min，切3 mm片，60 ℃烘干。

【關(guān)鍵詞】 切制工藝;正交試驗;牛大力

【中圖分類號】R283?? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2022）02-0040-04

Screening the Best Cutting Processing of Millettia speciosa Champ by Orthogonal Experimental Design

LI Jian1 WANG Qian2 ZHOU Gailian2*

1. School of Traditional Chinese Medicine Affiliated to Guangxi University of Traditional Chinese Medicine，

Nanning 530022， China;2.Guangxi University of Traditional Chinese Medicine， Nanning 530200， China

Abstract：Objective To screening the best Processing Conditions of Millettia speciosa Champ by orthogonal test. Methods Orthogonal design was used to set the processing conditions of Millettia speciosa Champ， the contents of polysaccharides， total flavonoids and decoctions were determined by UV spectrophotometry and extraction method， and made comprehensive evaluation rules to analyze the results.Result The influence of the three factors on the processing of Millettia is in the order of A （steaming time）>B （slice thickness）>C （drying temperature），and The influence degree of each factor at different levels is： A1>A2>A3， B3>B2>B1，C2>C3>C1. Conclusion The best cutting process of Millettia is A1B3C2， which is processing Millettia steaming for 10 min， cutting into 3 mm and drying at 60 ℃.

Key words：Cutting Process; Orthogonal Experimental Design; Millettia speciosa Champ

牛大力為豆科植物美麗崖豆藤Millettia speciosa Champ.的干燥塊根[1]，別名山蓮藕、血藤、牛古大力、九龍串珠、大力薯[2]，分布于廣東、廣西、海南等地，在廣西梧州、玉林、百色、南寧、欽州等地均有產(chǎn)[3]，也是廣西壯族和仫佬族民間常用的草藥[4]。炮制是處理中藥的一種傳統(tǒng)技術(shù)，也是中醫(yī)用藥的特點，目前對于牛大力炮制的研究和記載甚少。藥材進行炮制時必須具合適炮制的形態(tài)，而牛大力根是根莖類藥材，進行炮制處理時一般切片，切片薄，在炮制過程中易破碎，從而影響飲片外觀和價格。反之，切片厚，在炮制處理過程中又難達到所需的效果，導致藥材炮制不均勻，影響藥材療效。現(xiàn)在市面上牛大力多以整根和斜段為主，少見適用于炮制處理的片，因此對牛大力切制工藝進行探索具有重要意義，也能為今后牛大力飲片生產(chǎn)和炮制研究提供理論和實驗依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-1780型紫外可見分光光度計（島津儀器有限公司）;CPA225D型和SQP型電子天平（賽多利斯科學儀器有限公司）;KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;HWS-26型電熱恒溫水浴鍋（上海齊欣科學儀器有限公司）;DHG-9140A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海齊欣科學儀器有限公司）;DFY-500型中藥粉碎機（溫嶺市林大機械有限公司）。

1.2 材料 硫酸（批號：20161202，成都金山化學試劑有限公司）;乙醇（批號：2017122101，成都市科隆化學品有限公司）;亞硝酸鈉（批號：2016040191）和氫氧化鈉（批號：2017102003）天津市致遠化學試劑有限公司;硝酸鋁（批號20170514，天津市科密歐化學試劑有限公司）;蘆丁對照品（批號：wkq16101104）和葡萄糖對照品（批號：wkq16082202）購自四川省維克奇生物科技有限公司;牛大力原藥材購自玉林市玉州區(qū)喜運中藥材購銷部。

2 方法

2.1 供試品溶液制備

2.1.1 牛大力多糖供試品溶液制備 取牛大力樣品0.5 g，精密稱定，置于500 mL圓底燒瓶中，加入80%乙醇100 mL，冷凝回流1 h，過濾，取濾渣和濾紙置于圓底燒瓶中，加入100 mL水，沸水浴1 h，過濾，取濾液25 mL置于50 mL容量瓶中，定容至刻度，即得牛大力多糖供試品溶液。

2.1.2 牛大力總黃酮供試品溶液制備 取牛大力樣品1.0 g，精密稱定，置于25 mL具塞錐形瓶中，稱重，精密移入60%乙醇10 mL，密封，超聲45 min，取出，放至室溫，60%乙醇補重，搖勻后抽濾，取濾液，即得牛大力總黃酮供試品。

2.1.3 牛大力煎出物供試品制備 取牛大力樣品2 g，精密稱定，置于250 mL具塞錐形瓶中，精密加入純水50 mL，稱定重量，靜置1 h，接入冷凝回流裝置，加熱至沸騰，保持微沸狀態(tài)1 h，取出，放置室溫，用水補重，搖勻，過濾，精密移取濾液25 mL，置于干燥恒重的蒸發(fā)皿中，沸水浴揮干，即得牛大力煎出物。牛大力煎出物的測定參照藥典通則2201（浸出物測定法之水溶性浸出物測定法：熱浸法）[5]。

2.2 對照品溶液的制備

2.2.1 葡萄糖標準品溶液制備 精密稱取葡萄糖對照品33.30 mg，置于100 mL潔凈容量瓶中，加入適量水，超聲溶解，放置室溫后，加水定容至刻度，既得濃度為0.33 mg/mL葡萄糖對照品溶液。

2.2.2 蘆丁標準品溶液制備 精密稱取蘆丁對照品25.15 mg，置于25 mL潔凈容量瓶中，先加入適量60%乙醇，超聲溶解后，放置室溫，加60%乙醇定容刻度，既得濃度為1.01 mg/mL蘆丁對照品溶液。

2.3 顯色法及最大吸收波長選擇

2.3.1 牛大力多糖供試品顯色法及吸收波長的選擇 取葡萄糖對照品溶液和牛大力多糖供試品溶液，各1 mL，分別置于10 mL具塞試管中，加水至2 mL，搖勻，加入0.2%蒽酮-硫酸溶液至10 mL，搖勻，冷卻后沸水浴10 min，取出，立即冰水浴10 min;以相對應溶液為空白對照，在200～700 nm范圍內(nèi)進行全波長掃描，牛大力多糖供試品在波長583 nm處有最大吸收，因此選擇583 nm作為測定波長。

2.3.2 牛大力總黃酮供試品顯色法及吸收波長的選擇 取蘆丁對照品溶液和牛大力總黃酮供試品溶液，各3 mL，分別置于25 mL容量瓶中，加入濃度為5%的NaNO2溶液1 mL，混勻，靜置6 min，加入濃度為10% 的Al（NO3）3溶液1 mL，混勻，靜置6 min，加入濃度為4% 的NaOH溶液10 mL，再用30%乙醇溶液定容至刻度，混勻，靜置15 min;以相對應溶液為空白對照，在200～700 nm范圍內(nèi)進行全波長掃描。牛大力總黃酮供試品溶液在409 nm處有吸收峰，因此選擇483 nm作為牛大力總黃酮測定波長。

2.4 線性關(guān)系考察

2.4.1 葡萄糖標準曲線繪制 精密移取“2.2.1”項下葡萄糖對照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL和0.6 mL，分別置于10 mL潔凈具塞試管中，加水至2 mL，按“2.3.1”項下顯色法顯色，以相對應溶液為空白對照，在波長583 nm處測定其吸光度分別為0.1893、0.3711、0.5309、0.6977、0.8639、1.0298，以葡萄糖對照品濃度為橫坐標X，吸光度值為縱坐標Y，繪制標準曲線如圖1，得到標準曲線回歸方程Y=0.5017X+0.029（R=0.9999），即濃度在0.3330～1.9980 mg/mL范圍內(nèi)，葡萄糖濃度與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.4.2 蘆丁標準曲線繪制 精確移取“2.2.2”項下蘆丁對照品溶液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、4.0 mL、6.0 mL和8.0 mL，分別置于10 mL潔凈的容量瓶中，用60%乙醇定容至刻度，搖勻，即得不同濃度的蘆丁對照品溶液。分別取3 mL不同濃度對照品溶液分別置于25 mL容量瓶中，按“2.3.2”項下顯色方法顯色，以相對應溶液為空白對照，在波長483 nm處測定吸光度值分別為0.0654、0.1377、0.2123、0.5346、0.8334、1.0881，以蘆丁對照品濃度作為橫坐標x，吸光度值作為縱坐標y，繪制標準曲線如圖2，得到標準曲線回歸方程y=1.3576x+0.0006（R=0.9998），即濃度在0.0503～0.8048 mg/mL范圍內(nèi)，蘆丁濃度與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.5 藥材處理 鑒于中藥材切制過程中可能會影響到藥材有效成分含量的三個主要因素分別是蒸潤時間、切片厚度和干燥溫度，結(jié)合前期單因素分析結(jié)果，采用正交試驗對蒸潤時間（A）、切片厚度（B）和干燥溫度（C）進行考察，因素水平表如1，選擇了L9（34） 正交表，并按照正交表進行樣品處理條件如表2。

2.6 多糖、總黃酮和煎出物測定

2.6.1 多糖含量測定 稱取不同處理牛大力粉末，每個樣品取3份，每份0.5 g，精密稱定，共27份，按“2.1.3”項下供試品制備方法進行牛大力多糖供試品制備，再按 “2.3.1”項下顯色方法顯色，在波長582 nm處測定其吸光度，通過繪制的葡萄糖標準曲線計算器多糖含量，同一份樣品取平均值作為該樣品多糖含量，得出1～9號樣品中多糖含量依次為41.46%、46.95%、40.16%、35.50%、36.17%、39.14%、36.30%、35.17%和35.86%。

2.6.2 總黃酮含量測定 稱取不同處理牛大力粉末，每個樣品取3份，每份1.0 g，精密稱定，共27份，按“2.1.2”項下供試品制備方法進行牛大力總黃酮供試品制備，再按“2.3.2”項下顯色方法顯色后，在波長483 nm處測定其吸光度，通過繪制的蘆丁標準曲線計算其總黃酮含量，同一份樣品取平均值作為該樣品總黃酮含量，得出1～9號樣品中總黃酮含量依次為0.45%、0.48%、0.44%、0.38%、0.33%、0.34%和0.32%。

2.6.3 煎出物含量測定 稱取不同處理牛大力粉末，每個樣品取3份，每份2.0 g，精密稱定，共27份，按“2.1.3”項下煎出物含量測定方法進行測定，同一份樣品取平均值作為該樣品煎出物含量，得出樣品1～9號樣品中煎出物含量依次為13.46%、11.00%、18.35%、11.54%、8.18%、11.09%、10.95%、10.40%和14.95%。

3 結(jié)果分析

3.1 測定指標的綜合評分規(guī)則及綜合評分結(jié)果 通過對文獻統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)牛大力成分的研究主要集中在總黃酮和多糖類化合物的研究方面，且藥理研究方面也主要以總黃酮、多糖和水煎液的藥理活性研究為主，考慮到水煎液中含有總黃酮和多糖成分，因此設置權(quán)重系數(shù)為：多糖權(quán)重系數(shù)0.4、總黃酮權(quán)重系數(shù)0.4和煎出物權(quán)重系數(shù)0.2，綜合評價指標按以下方法進行計算：

綜合評分=M1（M1′ ）×40%+M2（M2′ ）×40%+M3（M3′）×20%）×100

M1為牛大力中多糖含量;

M1′為牛大力中多糖含量最大值;

M2為牛大力中總黃酮含量;

M2′為牛大力中總黃酮含量最大值;

M3為牛大力煎出物含量;

M3′為煎出物含量最大值。

根據(jù)上述計算公式，結(jié)合多糖、總黃酮和煎出物含量三個指標，對正交條件下處理的9個樣品進行綜合評分，得出1～9號樣品綜合得分依次為87.49、 92.25、 90.88、 74.49、 72.33、 77.10、 70.36、 69.63和73.51。

3.2 正交結(jié)果 基于對正交條件處理后9個牛大力樣品中多糖、總黃酮和煎出物含量的測定及綜合評分結(jié)果繪制牛大力切制正交試驗結(jié)果表（表3），通過IBM SPSS Statistics 21進行方差分析結(jié)果如表4。

由表3可知，3個因素對牛大力切制工藝影響程度依次為：A（蒸潤時間）>B（切片厚度）>C（干燥溫度），而各個因素不同水平的影響程度依次為：A1>A2>A3，B3>B2>B1，C2>C1>C3。由表4可知，因素A（蒸潤時間）對牛大力切制工藝測定指標的綜合性評分有顯著性影響（P<0.05），而因素B（切片厚度）和C（蒸潤時間）對牛大力切制工藝測定指標的綜合性評分沒有顯著性影響（P>0.05），結(jié)合上述正交試驗結(jié)果分析，牛大力最佳切制工藝應為A1B3C2，即蒸潤10 min，切3 mm片，60 ℃烘干。

參考文獻

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（收稿日期：2021-05-25 編輯：劉 斌）