商品化甲氧芐啶膠體金快檢試劑盒檢測效果評價與分析

葉雅真 駱和東

摘 要：為了解商品化甲氧芐啶膠體金快檢試劑盒對動物源性食品的快檢效果，探討目前動物源性食品中甲氧芐啶快速檢測方法存在的問題，確定下一步的研究方向。本文通過對國內快檢產品生產企業技術實力的資格審查，擇優篩選出5個品牌試劑盒進行質量評價，并對相對準確度較高的3個品牌試劑盒產品進行絕對靈敏度研究。質量評價結果顯示，5個品牌試劑盒產品的假陰性率在9.1%～25.0%，均不符合假陰性率應≤5%的考察要求，其中3個品牌產品假陰性率在20%左右，漏檢風險較高。因此，有必要進行甲氧芐啶快檢方法研究，提高試劑盒產品實際檢測靈敏度，確保試劑盒產品的快檢監管效果。

關鍵詞：甲氧芐啶;膠體金免疫層析;動物源性食品;質量評價;食品安全快速檢測

Analysis and Quality Assessment of Commercial Colloidal Gold Kits for Rapid Detection of Trimethoprim

YE Yazhen1， LUO Hedong1，2*

（1.Xiamen Institute for Food and Drug Quality Control， Xiamen 361012， China; 2.RayKol Group （Xiamen） Corp.， Ltd.， Xiamen 361015， China）

Abstract： In order to master the effect of commercial colloidal gold kits for rapid detection of trimethoprim in foods of animal origin， and to identify the research directions of the method for rapid detection of trimethoprim in foods of animal origin， a unifiable technical evaluation was conducted on kits of 5 brands， which passed the inspection of the manufacturer’s technology prowess， and the absolute sensitivity of three brand kits with high relative accuracy was studied. The evaluation results show that the false negative rates of the five brands are from 9.1% to 25.0%， which does not meet the inspection requirements that the false negative rate should be ≤5%. Among them， the false negative rate of three brand products is about 20%， and the risks of missed detection were higher. Therefore， it was necessary to study the rapid detection method of trimethoprim to improve the actual detection sensitivity of kits to ensure the rapid detection supervision effect of the kit products.

Keywords： trimethoprim; the principle of colloidal gold immunochromatography; products of animal origin; quality assessment; rapid detection for food safety

甲氧芐啶（Trimethoprim，TMP）是一種抗菌增效劑，在獸醫臨床常與磺胺類藥物或其他抗生素聯合使用，用于治療雞白痢、禽霍亂、呼吸道繼發性細菌感染等，以降低抗菌藥用量、增強抗菌藥療效、降低抗菌藥殘留及減少細菌對抗菌藥的耐藥性[1-3]。甲氧芐啶的廣泛使用和不合理用藥使動物性食品中存在藥物殘留，從而威脅人體健康。為了更有效地開展甲氧芐啶殘留的快檢監控工作，確保食品安全[4]。本文面向社會廣泛征集符合評價驗證方案要求的快檢產品生產企業，參加評價驗證，組建專家組對各品牌快檢產品生產企業科研能力等技術實力進行資格審查，擇優篩選出5個品牌快檢產品進入檢測能力方面的現場質量評價環節。通過統一制備盲樣，由企業實驗人員自行快檢實驗操作的方式，對這5個品牌商品化甲氧芐啶膠體金試劑盒產品進行統一的現場質量評價。本文擬對這5個品牌試劑盒產品的假陰性率、假陽性率、相對準確度等性能指標進行考察，為確定動物源性食品中甲氧芐啶的快速檢測方法的研究方向提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

本次評價實驗使用的甲氧芐啶快速檢測試劑盒由各品牌生產企業自行準備。

1.2 實驗方法

依據《食品快速檢測方法評價技術規范》（食藥監辦科[2017]43號）[5]和《關于規范使用食品快速檢測的意見》（征求意見稿）[6]制定評價方案。《食品安全國家標準 食品中獸藥最大殘留限量》（GB 31650—2019）對家禽中肌肉靶組織的最大殘留限量為50 μg/kg。因此，本文考察試劑盒對甲氧芐啶的檢測限要求為50 μg/kg，并根據《食品快速檢測方法評價技術規范》設定試劑盒質量評價性能指標考察要求為假陰性率應≤5%，假陽性率應≤15%。每家企業盲樣數均為50份，其中陽性樣和陰性樣均為20～30份。各企業自行準備參加評價驗證所必需的食品快檢設備、輔助設備、試劑及實驗耗材，由企業實驗人員自行進行快檢實驗操作、出具快檢結果。對所有快檢結果進行匯總分析，統計各品牌甲氧芐啶試劑盒產品的假陰性率、假陽性率、相對準確度等指標。

2 結果與分析

為避免對企業造成影響，對試劑盒品牌進行編號表示，分別為A品牌、B品牌、C品牌、D品牌和E品牌，質量評價結果見表1和表2。質量評價結果顯示，5個品牌產品的假陰性率在9.1%～25.0%，均不符合規定的假陰性率應≤5%的考察要求，其中A品牌、B品牌和E品牌產品假陰性率較高，漏檢風險較高;5個品牌產品的假陽性率在0%～10.0%，均符合規定的假陽性率應≤15%的考察要求。

A品牌試劑盒質量評價結果所示，A品牌試劑盒在0.5倍檢測限未出現假陽性，對空白基質的快檢結果假陽性率卻高達12.0%，而且對1倍檢測限的假陰性率高達25.0%，漏檢率是5個品牌中最高的，快檢結果相對準確度只有84.0%，是5個品牌試劑盒快檢結果相對準確度中最低的。通過查閱各品牌試劑盒產品說明書，發現在5個品牌中，只有A品牌試劑盒為消線法膠體金快檢產品，其余4個品牌的判定方式均為檢測線（T線）與控制線（C線）比色法。經過市場調研發現，甲氧芐啶消線法膠體金試劑盒品牌極少，只調研到2家。根據試劑盒產品說明書，A品牌適用于雞肌肉靶組織的檢測，另一個品牌適用基質為血清。A品牌試劑盒產品的質量評價結果，假陽性率高可能是受甲氧芐啶的消線法膠體金快檢技術的技術瓶頸影響，或是A品牌試劑盒產品的生產工藝問題所導致。

B品牌、C品牌、D品牌和E品牌試劑盒假陰性率分別為19.0%、11.1%、9.1%和19.2%，B品牌和D品牌假陽性率分別為3.4%和7.1%，C品牌和E品牌未出現假陽性情況。結果顯示，4個品牌試劑盒都存在不同程度的漏檢風險，假陰性率均不符合考察要求的≤5%，試劑盒產品的實際檢測靈敏度均不夠，應該對產品進行優化，降低各品牌產品的實際檢測限，以降低產品假陰性率。

3 結論

膠體金快檢試劑盒最理想的檢測效果是0和0.5倍檢測限的快檢結果為明顯的陰性（T線顏色明顯深于C線顏色），1倍及以上檢測限的快檢結果為強陽性（T線顏色明顯淺于C線顏色，甚至T線幾乎不顯色）。在試劑盒質量評價現場觀察到，雖然B品牌試劑盒產品的絕對靈敏度最高，但是對空白基質的快檢，B品牌試劑盒的快檢結果為比較弱的陰性（T線顏色略深于C線顏色），試劑盒對0.5倍檢測限和1倍檢測限的識別差異不大，0.5倍檢測限為弱陰性（T線顏色與C線顏色相當），1倍檢測限為比較弱的陽性（T線顏色略淺于C線顏色）。在降低產品實際檢測限后，試劑盒的假陽性率可能增高，增加誤檢風險。

因此，有必要進行快檢方法研究，對方法進行優化，提高試劑盒產品實際檢測靈敏度，提高快檢準確度，確保試劑盒產品的快檢監管效果。

參考文獻

[1]羅浩師.動物性食品中甲氧芐啶和二甲氧芐啶殘留量的測定[D].北京：中國農業科學院，2013.

[2]GILL E E， FRANCO O L， HANCOCK R. Antibiotic Adjuvants： Diverse Strategies for Controlling Drug-Resistant Pathogens[J].Chemical Biology and Drug Design，2015，85（1）：56-78.

[3]BERNAL P， MOLINA-SANTIAGO C， DADDAOUA A， et al. Antibiotic adjuvants： identification and clinical use[J].Microbial Biotechnology，2013，6（5）：445-449.

[4]葉雅真.我國食品安全快檢產品的現狀和對策分析[J].食品安全質量檢測學報，2019，10（12）：3719-3724.

[5]國家食品藥品監督管理總局.總局辦公廳關于印發食品快速檢測方法評價技術規范的通知[EB/OL].（2017-03-28）[2022-01-07].https：//www.tid.gov.hk/english/aboutus/tradecircular/cic/asia/2017/files/ci2017292a.pdf.

[6]國家市場監督管理總局.市場監管總局就《關于規范使用食品快速檢測的意見（征求意見稿）》公開征求意見的公告[EB/OL].（2019-12-24）[2022-01-07].https：//www.samr.gov.cn/hd/zjdc/201912/t20191224_309419.html.